非洲豬瘟的研究進(jìn)展

黃福軍李可啟

（1山東亞太中慧集團(tuán)，山東禹城 251200；2江蘇揚(yáng)州大學(xué)，江蘇揚(yáng)州 225009）

非洲豬瘟的研究進(jìn)展

黃福軍1李可啟2

（1山東亞太中慧集團(tuán)，山東禹城 251200；2江蘇揚(yáng)州大學(xué)，江蘇揚(yáng)州 225009）

非洲豬瘟雖然在我國尚沒有被發(fā)現(xiàn)，但其從西非至東非、歐洲、亞洲的傳播態(tài)勢(shì)已經(jīng)形成。非洲豬瘟對(duì)我國養(yǎng)豬業(yè)的潛在威脅越來越大，加強(qiáng)對(duì)該病的病原學(xué)研究和對(duì)其流行病學(xué)的認(rèn)識(shí)，并研發(fā)能夠快速診斷和防治該病的技術(shù)十分重要。本文主要介紹了非洲豬瘟的病原特點(diǎn)、流行病學(xué)特征、臨床癥狀、病理學(xué)、快速診斷方法以及國內(nèi)外對(duì)其的研究進(jìn)展，旨在為該病的防治提供一定理論依據(jù)。

非洲豬瘟；病原學(xué)；流行病學(xué)；臨床癥狀；快速診斷；防治方法

非洲豬瘟(African swine fever，ASF)是由 ASFV(African swine fever virus，ASFV)引起豬的一種急性、高度接觸性傳染病。該病最早于1921年在非洲肯尼亞被報(bào)道，非洲、歐洲以及美洲的許多國家都受到了該病的影響[1]。非洲豬瘟是發(fā)病過程最為復(fù)雜，且最具有經(jīng)濟(jì)意義的病毒性疾病之一，也是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）要求各成員國及時(shí)通報(bào)的疾病之一。該病臨床癥狀以高熱、病程短、高死亡率、內(nèi)臟器官廣泛性出血以及呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)功能改變?yōu)橹饕卣鱗2,3]。本病對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害甚大，我國將其列為一類動(dòng)物疫病。目前,針對(duì)該病缺乏有效的疫苗進(jìn)行免疫預(yù)防，該病的防控面臨著巨大挑戰(zhàn)。隨著世界經(jīng)濟(jì)全球化的發(fā)展，自然生態(tài)環(huán)境隨之改變，一些嚴(yán)重危害動(dòng)物和人類健康的跨國疫病不斷發(fā)生。許多源于國外的動(dòng)物疫病相繼傳入我國，使我國現(xiàn)代農(nóng)業(yè)和養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)遭受了沉重打擊，嚴(yán)重影響了我國的經(jīng)濟(jì)和國際貿(mào)易發(fā)展。

1 病原學(xué)特征

ASFV屬于虹彩病毒科，虹科病毒屬，形狀呈五角或六角形，大小為175～215 nm。病毒核衣殼蛋白呈20面體對(duì)稱，直徑為180 nm，基因組由單分子線狀雙股DNA組成，長度為170～190 kb[4]。DNA分子具有共價(jià)的閉合末端、反轉(zhuǎn)重復(fù)區(qū)和發(fā)夾結(jié)構(gòu)，編碼200多種蛋白質(zhì)。在豬體內(nèi)，ASFV可在幾種類型的細(xì)胞漿中，尤其是網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞中復(fù)制。該病毒多參與消化道感染，存在于感染豬的血液、組織液、內(nèi)臟及所有分泌物和排泄物內(nèi)[5,6]。ASFV活力很強(qiáng)，冷藏6年的血液在室溫下保存數(shù)星期仍具有感染力，皮膚和肌肉所含有的病毒在冷凍或室溫干燥狀態(tài)保存，可存活幾年。此病毒對(duì)高溫敏感，在55℃ 30分鐘或60℃10分鐘條件下即可滅活(失去傳染性)，或置1%甲醛中6天，2%氫氧化鈉中42小時(shí)，盧戈氏液中10分鐘，病毒也可滅活。其對(duì)腐敗和干燥環(huán)境都有較高的抵抗力，且可在雞胚卵黃囊中生長繁殖。臨床上患該病痊愈的豬在10個(gè)月內(nèi)仍帶毒。研究者認(rèn)為，該病毒不只有一種類型，其通過動(dòng)物傳若干代后，抗原可能會(huì)發(fā)生改變，為此，在對(duì)該病的免疫上存在很多問題。由于該病毒在病豬體內(nèi)存在的時(shí)間長，對(duì)自然環(huán)境抵抗力強(qiáng)，因此易于傳播擴(kuò)散，污染的豬圈舍、飼料及飲水等都可傳染。臨床觀察認(rèn)為，昆蟲(如豬虱等)可能是其傳播媒介[4-6]。

2 流行病學(xué)特征

ASFV是目前唯一已知核酸為DNA的蟲媒病毒，是非洲大陸本土病原，豬是本病的自然宿主。該病自1921年在肯尼亞首次被發(fā)現(xiàn)以來，一直存在于撒哈拉以南的中、南部和西部非洲國家。非洲豬瘟的癥狀與豬瘟極為相似，直到1910年兩者始終混淆不清[7]。直至1921年，英國學(xué)者認(rèn)為這種類似豬瘟的豬病，是由一種不能和豬瘟病毒交叉免疫的病毒所引起，非洲豬瘟才被明確為豬的另外一種疫病。豬對(duì)此病毒的感染性很高，在家豬中常造成暴發(fā)式流行，給世界各地養(yǎng)豬業(yè)造成很大的危害。豬與野豬對(duì)本病毒都系自然易感性，各品種及各不同年齡的豬群易感性均很強(qiáng)[8]。Montgomery于1921年曾設(shè)法對(duì)白鼠、天竺鼠、兔、貓、犬、山羊、綿羊、牛、馬、鴿等動(dòng)物進(jìn)行感染試驗(yàn)，均未成功，而Velho于1956年報(bào)告，他曾用兔子盲傳26代后攻毒豬會(huì)致其死亡。現(xiàn)有研究認(rèn)為，公野豬和家豬對(duì)本病易感性最強(qiáng)。本病是通過直接或間接接觸而傳染的[9]，所以飼料、飲水、圈舍等都是傳播的媒介。非洲豬瘟由野豬傳染給家豬的方式還未明確，據(jù)研究表明，這種傳播很可能是通過昆蟲進(jìn)行的，而家豬相互之間極容易由同圈飼養(yǎng)管理不善而造成感染。ASFV可經(jīng)過口和上呼吸道系統(tǒng)進(jìn)入豬體，在鼻咽部或是扁桃體發(fā)生感染，病毒迅速蔓延到下頜淋巴結(jié)，通過淋巴和血液遍布全身。強(qiáng)毒感染時(shí)細(xì)胞變化很快，在呈現(xiàn)明顯的刺激反應(yīng)前，細(xì)胞均已死亡。弱毒感染時(shí)，刺激反應(yīng)很容易觀察到，細(xì)胞核變大，普遍發(fā)生有絲分裂?，F(xiàn)在歐洲的非洲豬瘟，已經(jīng)慢性化，感染此病的豬漸漸成為帶毒豬，這一點(diǎn)值得重視[10-12]。

3 臨床癥狀

自然感染潛伏期5～9天，或更短，臨床實(shí)驗(yàn)感染為2～5天。發(fā)病時(shí)體溫升高至41℃，約持續(xù)4天，直到死前48小時(shí)體溫下降，臨床癥狀直到體溫下降時(shí)才顯現(xiàn)出來，這與豬瘟癥狀出現(xiàn)在體溫升高時(shí)不同[3]。最初發(fā)熱3～4天時(shí)，病豬食欲下降，極度脆弱，常躺在舍角。脈搏快，咳嗽，呼吸困難，比正常快約三分之一，呈漿液或粘液膿性結(jié)膜炎，有些毒株會(huì)引起帶血下痢，嘔吐，血液變化的癥狀，似豬瘟[5]。白血球數(shù)目減少約50%，淋巴細(xì)胞也同樣明顯減少。體溫升高時(shí)發(fā)生白血球性貧血，至第4天白血球數(shù)下降至40%，同時(shí)可觀察到未成熟中性白血球數(shù)目的增加。病豬往往發(fā)熱后第7天死亡，或出現(xiàn)癥狀后兩天很快死亡[6]。

4 臨床病理學(xué)變化

在耳、鼻、腋下、會(huì)陰、尾、腳等無毛部分呈界限明顯的紫色斑，耳朵紫斑部分常腫脹，中心有暗紅色出血現(xiàn)象，邊緣褪色，尤其在腿及腹壁皮膚處肉眼可見。通過顯微鏡觀察，真皮內(nèi)小血管嚴(yán)重充血，肉眼可見紫色斑，血管內(nèi)發(fā)生纖維性血栓。耳朵紫斑部分的上皮基層組織內(nèi)，可見血管血栓性壞死現(xiàn)象，切開胸腹腔，心包有許多血色液體。內(nèi)臟漿膜處可見淺紅色瘀斑，尤其小腸處多見。直腸壁深處、心包和腎臟處有彌漫性出血現(xiàn)象，胸膜下水腫特別明顯。病豬淋巴節(jié)腫大，伴有出血現(xiàn)象。腺臟腫大，髓質(zhì)腫脹區(qū)呈深紫黑色，切面突起，淋巴濾胞小而少，脾臟處有暗紅色栓塞。循環(huán)系統(tǒng)的表現(xiàn)為心包液特別多，少數(shù)病例有混濁且含有纖維蛋白，多數(shù)病豬心包下及心內(nèi)膜充血。呼吸系統(tǒng)的表現(xiàn)為喉、會(huì)厭有瘀斑充血及擴(kuò)散性出血現(xiàn)象，并且比豬瘟更加嚴(yán)重，氣管前三分之一處有瘀斑。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，腸道充血但沒有出血病灶，肺泡則呈現(xiàn)出血現(xiàn)象，淋巴球呈破裂狀。經(jīng)肉眼觀察，肝表現(xiàn)正常，但近膽部分組織有充血及水腫現(xiàn)象，小葉間結(jié)締組織有淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞浸潤現(xiàn)象。

5 快速診斷方法

5.1 臨床診斷

非洲豬瘟與豬瘟等其他出血性疾病的癥狀和病變相似，它們的亞急性型和慢性型病變?cè)谏a(chǎn)現(xiàn)場實(shí)際上很難區(qū)別，因而必須借助實(shí)驗(yàn)室方法才能鑒別。經(jīng)尸體解剖，如發(fā)現(xiàn)豬出現(xiàn)脾和淋巴結(jié)嚴(yán)重充血，形如血腫，則可懷疑為豬瘟，可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷[13]。

5.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

由于缺乏有效疫苗進(jìn)行防控，所以實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)是目前用以監(jiān)測(cè)和控制非洲豬瘟暴發(fā)的有效方法。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織規(guī)定，由試驗(yàn)得到活病毒抗原，包括對(duì)傳染源的操作、處理病原體等需要在動(dòng)物生物安全三級(jí)（ABL-3）實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行[14]。目前實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)方法主要包括免疫酶技術(shù)、動(dòng)物接種試驗(yàn)、細(xì)胞吸附試驗(yàn)、免疫組化法、免疫酶技術(shù)、熒光抗體試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)（間接ELISA、夾心ELISA、間接免疫熒光試驗(yàn)）、病毒核酸檢測(cè)（熒光定量PCR技術(shù)、巢式PCR、多重PCR）等方法。

⑴紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)：將健康豬的白細(xì)胞加上非洲豬瘟豬的血液或組織提取物，37℃培養(yǎng)，如見許多紅細(xì)胞吸附在白細(xì)胞上，形成玫瑰花狀或桑椹體狀，則為陽性；

⑵直接免疫熒光試驗(yàn)：熒光顯微鏡下觀察，如見細(xì)胞漿內(nèi)有明亮熒光團(tuán)，則為陽性；

⑶間接免疫熒光試驗(yàn)：將豬瘟病毒接種在長滿Vero細(xì)胞的蓋玻片上，未接種病毒的Vero細(xì)胞作為對(duì)照。試驗(yàn)后，對(duì)照正常，待檢樣品在細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)明亮的熒光團(tuán)核熒光細(xì)點(diǎn)可被判定為陽性；

⑷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)：對(duì)照成立時(shí)（陽性血清對(duì)照吸收值大于0.3，陰性血清吸收值小于0.1），待檢樣品的吸收值大于0.3時(shí)，判定為陽性；

⑸免疫電泳試驗(yàn)：抗原于待檢血清間出現(xiàn)白色沉淀線者可判定為陽性；

⑹間接酶聯(lián)免疫蝕斑試驗(yàn)：肉眼觀察或顯微鏡下觀察，蝕斑呈棕色則為陽性，無色則為陰性[15,16]。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，兩種或多種技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用，將為ASFV的分子流行病學(xué)調(diào)查提供更加準(zhǔn)確的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

6 防治方法

在無本病的國家和地區(qū)應(yīng)防止ASFV的傳入，在國際機(jī)場和港口，從飛機(jī)和船舶來的食物廢料均應(yīng)焚毀。無本病地區(qū)應(yīng)建立快速診斷方法和制定一旦發(fā)生本病時(shí)的撲滅計(jì)劃。一旦有ASF疫情進(jìn)入，采取實(shí)驗(yàn)室診斷方法盡早作出診斷非常重要。

現(xiàn)在已有多種用于檢測(cè)病毒、病毒抗原或者病毒DNA的檢測(cè)方法，檢測(cè)抗體的方法也有報(bào)道。同時(shí)進(jìn)行抗體以及抗原檢測(cè)對(duì)于此病的正確診斷以及對(duì)疫情準(zhǔn)確的評(píng)估具有重要意義。由于該病疫苗尚缺乏，所以ASF的清除顯得相當(dāng)困難，需要較長的一段時(shí)間努力。成功的清除計(jì)劃需要農(nóng)民、獸醫(yī)人員以及政府部門的共同參與[3]。生豬以及豬肉產(chǎn)品的運(yùn)輸應(yīng)予以嚴(yán)格監(jiān)控，且禁止使用泔水喂豬，及時(shí)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)并淘汰感染病毒的豬，加強(qiáng)豬場的生物安全，給予養(yǎng)豬者一定補(bǔ)償。非洲豬瘟雖然在我國尚沒有被發(fā)現(xiàn)，但從西非至東非、歐洲、亞洲傳播的態(tài)勢(shì)已經(jīng)形成，對(duì)我國的潛在威脅越來越大。所以加強(qiáng)對(duì)該病的防控以及診斷防治技術(shù)研發(fā)工作十分重要。

[1]宣長和.豬病學(xué).北京:中國農(nóng)業(yè)科技出版社.1997，44-51.

[2]殷震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué).北京：科學(xué)出版社.1997，652-664.

[3]常華，花群義，段綱，等.非洲豬瘟的研究進(jìn)展.中國畜牧獸醫(yī)，2007，34(1)：34-37.

[4]王君瑋，張維，王華.ASFV分子流行病學(xué)進(jìn)展.中國動(dòng)物檢疫，2010，27(9)：12-19.

[5]陶玉順，袁東波，徐健.目前我國豬瘟的流行現(xiàn)狀及防控策略.畜牧與獸醫(yī)，2008，40(8)：26-30.

[6]溫肖會(huì)，魏文康，黃忠，等.非洲豬瘟的研究進(jìn)展.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，37(10)：49-52.

[7]Stegeman A,Elbers A,de Smit:H, et al.The 1997-1998 epidemic of classical swine fever in the Metherlands.Vet Microbiol,2000,73:183-196.

[8]R Stark,G Meyers,T Rümenapf. Pro-cessing of pestivirus polyprotein: cleavage sitebetween autoprotease and nucleocapsid proteinofclassicalswine fever virus.journal of virology,1993,67 (12):7088-7095.

[9]Ruggli N,Summerfield A,Fiebach. Classical Swine Fever Virus Can Remain Viru-lent after Specific Elimination of the InterferonRegulatory Factor 3-Degrading Function ofNpro.journal of virology,2009, 83:817-829.

[10]Vloker Moenning.Pestiviruses:a review.Vet.Microbiol,1990,23:35-54.

[11]Volker Moennig.Introduction to classical swine fever:virus,disease and controlpolicy. Veterinary Microbiology, 2000,73:93-102.

[12]陳澤，羅建勛，殷宏.非洲豬瘟的生物媒介.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011,42(5)：67-69.

[13]楊霞，陳陸.河南省非洲豬瘟感染情況篩查.中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010(21)：55-58.

[14]黃萍，肖家勇.ASFV實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立.中國動(dòng)物檢疫，2010 (11)：41-47.

[15]劉峰.非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù).畜牧與飼料科學(xué)，2010(3)：17-24.

[16]石仕權(quán).應(yīng)用間接血凝試驗(yàn)監(jiān)測(cè)豬瘟抗體.中國畜禽傳染病，1996，1:49-50.

S852.65+1

B

1673-4645(2013)06-0058-03

2013-02-25

黃福軍（1985-），男，山東聊城人，農(nóng)學(xué)學(xué)士，目前主要從事豬病研究工作，E-mail：likeqi401622@163.com