中藥復(fù)方和復(fù)方制劑治療肺癌作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

孫超龍，謝慧珺

(河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州450008)

原發(fā)性支氣管肺癌(primary bronchogenic carcinoma)，簡稱肺癌(lung cancer)，為起源于支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤［1］。目前，肺癌的發(fā)病率和死亡率不斷上升［2］，我國的一項(xiàng)回顧調(diào)查資料［3］顯示:肺癌死亡率至2007年升至30.84/10萬，已取代肝癌成為中國首位惡性腫瘤死亡原因。在治療上，西醫(yī)針對(duì)于早期肺癌以手術(shù)為主，針對(duì)于中晚期肺癌，以放、化療為主。然而，大多數(shù)肺癌患者確診時(shí)已屬于中、晚期，手術(shù)的機(jī)會(huì)大為減少，而且單純放、化療毒的副作用相當(dāng)大，給患者帶來很多痛苦［4］。大量的臨床實(shí)踐［5］證明:中藥復(fù)方和復(fù)方制劑有良好的抗肺癌作用，可以延長中晚期肺癌患者的帶瘤生長時(shí)間，提高其生存質(zhì)量，減少放、化療所帶來的副作用。本文對(duì)近年來中藥復(fù)方和復(fù)方制劑治療肺癌機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行概述，以期為今后的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

1 細(xì)胞毒作用

細(xì)胞毒作用是指對(duì)細(xì)胞的直接殺傷作用，中藥復(fù)方和復(fù)方制劑可以作用于癌細(xì)胞生長的不同階段，使癌細(xì)胞停止于增殖周期中的某一環(huán)節(jié)，引起死亡或破壞癌細(xì)胞膜引起細(xì)胞自溶［6］。鄭璐玉等［7］篩選出麥門冬湯合千金葦莖湯的8個(gè)有效部位，將其作用于非小細(xì)胞肺癌H460和正常人胚肺成纖維細(xì)胞HFL－1，結(jié)果發(fā)現(xiàn)6個(gè)部位對(duì)NCI－H460細(xì)胞有顯著的毒作用。鄒璽等［8］采用3種方法對(duì)克瘤丸進(jìn)行提取，以MTT法觀察不同濃度克瘤丸作用下人肺癌細(xì)胞株A549的生長情況，結(jié)果表明:當(dāng)克瘤丸組合提起劑濃度在5 mg/mL時(shí)對(duì)肺癌細(xì)胞有顯著的殺傷作用。

2 影響細(xì)胞生長周期

腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞周期調(diào)控失衡有密切關(guān)系。崔德利等［9］選取六君二陳解毒湯及其拆方六君二陳湯、半夏陳皮湯和清熱解毒湯對(duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠進(jìn)行干預(yù)治療，運(yùn)用流式細(xì)胞儀測定諸方對(duì)腫瘤細(xì)胞周期和凋亡的影響。結(jié)果表明六君二陳解毒湯及其拆方皆可干預(yù)Lewis肺癌移植瘤腫瘤細(xì)胞周期，使阻滯在G0/G1期的細(xì)胞比例增加，進(jìn)入S期的細(xì)胞減少，從而抑制Lewis肺癌細(xì)胞的增殖。曹勇等［10］采用流式細(xì)胞術(shù)觀察健脾補(bǔ)腎解毒方不同劑量藥物血清對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞周期的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)健脾補(bǔ)腎解毒方含藥血清能提高G0/G1期細(xì)胞比例，降低S期細(xì)胞比例，抑制A549細(xì)胞的增殖周期。閆瑢玓等［11］制備小鼠Lewis肺癌模型，觀察肺抑瘤合劑對(duì)肺癌的抑制作用及其對(duì)肺癌組織細(xì)胞cyclinD1表達(dá)的影響，結(jié)果表明肺抑瘤合劑可通過降低腫瘤細(xì)胞cyclinD1的表達(dá)使腫瘤細(xì)胞停止于G1期，從而起到抗腫瘤的作用。

3 調(diào)控細(xì)胞增殖與凋亡相關(guān)基因的表達(dá)

目前的實(shí)驗(yàn)研究［12］表明:中藥復(fù)方及復(fù)方制劑可通過調(diào)控Bcl-2/Bax基因和腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)抑制肺癌的增值和轉(zhuǎn)移。梁朝暉［13］等運(yùn)用細(xì)胞凋亡原位末斷標(biāo)記及免疫組化法等分析中藥扶正祛邪復(fù)方對(duì)小鼠Lewis肺癌細(xì)胞周期及凋亡的影響，發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方可下調(diào)bcl-2的表達(dá)使肺癌細(xì)胞凋亡。王三虎［14］等制備小鼠Lewis肺癌模型，以免疫組化法檢測潤肺散結(jié)膠囊(RSC)對(duì)肺癌組織中Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的影響，結(jié)果表明RSC可通過影響肺瘤細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞凋亡。鄭翠娥等［15］用免疫組化法測定C57BLP6純系小鼠灌服肺抑瘤合劑后p16p53、cyclin的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)表明肺抑瘤合劑配合化療能有效抑制腫瘤細(xì)胞cyclinDl、p53的表達(dá)，增強(qiáng)p16的表達(dá)。賈彥燾等［16］運(yùn)用MTT法測定肺一丸對(duì)La-795肺腺癌細(xì)胞增值的抑制作用，采用PCR-ELISA法測定細(xì)胞端粒酶活性，結(jié)果表明肺一丸抑制腫瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制之一可能是其降低了腫瘤細(xì)胞端粒酶的活性。趙曉珍等［17］采用Real-time PCR及Western blot方法檢測肺巖寧血清對(duì) E-Cadherin、N-cadherin、Fibronectin、Vimentin等表達(dá)的影響，結(jié)果表明，肺巖寧方可通過上調(diào)E-Cadherin、下調(diào)N-cadherin、Fibronectin和Vimentin的表達(dá)達(dá)到抑制肺癌轉(zhuǎn)移的作用。

4 影響細(xì)胞微環(huán)境

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的表達(dá)和活性的增高與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并影響腫瘤生長的多個(gè)環(huán)節(jié)［18］。某些黏附分子(如E-cad)和某些黏附因子(如CD44、CD54)的表達(dá)在腫瘤細(xì)胞在侵襲轉(zhuǎn)移過程中也起著重要的作用［19］。中藥復(fù)方和復(fù)方制劑可以通過抑制MMPs的表達(dá)和活性、干預(yù)細(xì)胞粘附因子(CAM)改變細(xì)胞微環(huán)境，從而抑制惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。王治寬等［20］用免疫組織化學(xué)法檢測中藥參七湯對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中藥參七湯能通過下調(diào)肺癌小鼠肺組織MMP-9的表達(dá)，減少腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。蔣士卿等［21］研究發(fā)現(xiàn)益肺清化膏可有效地提高E-cad的表達(dá)，降低CD44、CD44v6的表達(dá)水平，從而增加腫瘤細(xì)胞間的粘附能力，降低腫瘤細(xì)胞脫落進(jìn)入周圍組織和血管的幾率，影響腫瘤細(xì)胞的遷移和運(yùn)動(dòng)。孫宏新等［22］采用免疫組化法檢測消瘤保肺丸作用下Lewis肺癌細(xì)胞表達(dá)E－cad、CD44V6的情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)消瘤保肺丸可通過提高E-cad和降低CD44V6的表達(dá)水平達(dá)到抗腫瘤轉(zhuǎn)移的目標(biāo)。

5 抑制腫瘤血管形成

腫瘤血管生成是腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，抗腫瘤血管生成的治療策略是對(duì)腫瘤血管調(diào)控因子及其作用環(huán)節(jié)進(jìn)行干預(yù)。中藥復(fù)方和復(fù)方制劑可通過抑制VEGF、COX-2等血管生長因子達(dá)到抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的目的［19］。韓志鵬［23］等通過檢測荷S180瘤小鼠灌服中藥復(fù)方抑瘤飲后不同時(shí)間點(diǎn)腫瘤組織內(nèi)VEGF、VEGFR-2和ES等的動(dòng)態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)抑瘤飲可以通過下調(diào)VEGF、VEGFR-2和上調(diào)ES表達(dá)抑制腫瘤組織內(nèi)血管生成而抗腫瘤。剛宏林等［24］運(yùn)用S-P免疫組化法檢測靈芪膠囊對(duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠bFGF、COX-2表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)靈芪膠囊可通過下調(diào)bFGF和COX-2減少血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖影響腫瘤生長和浸潤。王中奇等［25］建立C57BL/6小鼠肺癌模型觀察肺巖寧方及其組分對(duì)小鼠Lewis腫瘤MVD與MMP-2等表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)肺巖寧方中的抗癌和補(bǔ)腎中藥有抑制血管生成的作用。王瑞平［26］等研究發(fā)現(xiàn)，克瘤丸能抑制Lewis肺癌小鼠的腫瘤生長及肺轉(zhuǎn)移，下調(diào)Lewis肺癌小鼠瘤體MVD、VEGF的表達(dá)，進(jìn)而抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。

6 調(diào)節(jié)免疫狀態(tài)

目前，對(duì)中藥復(fù)方和復(fù)方制劑抗腫瘤免疫的研究，主要有免疫細(xì)胞活性的變化、免疫分子的表達(dá)和腫瘤抗原的表達(dá)等方面［19］。卞方［27］等觀察不同劑量補(bǔ)腎益肺解毒方對(duì)肺癌大鼠脾指數(shù)及肺指數(shù)的影響，發(fā)現(xiàn)中、高劑量組與肺癌對(duì)照組相比，脾指數(shù)明顯提高，肺指數(shù)降低，表明補(bǔ)腎益肺解毒方能增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。潘玉真［28］等通過檢測Lewis肺癌小鼠脾上清液中IFN-γ、IL-10的含量，脾臟NK細(xì)胞活性和脾T淋巴細(xì)胞亞群，發(fā)現(xiàn)柴胡龍牡湯可提高IFN-γ的水平，降低IL-10的優(yōu)勢表達(dá)，增強(qiáng)NK細(xì)胞活性，提高CD4+水平，顯著升高CD4+/CD8+比值，改善機(jī)體細(xì)胞免疫功能。梁靚靚等［29］觀察小柴胡湯和順鉑等藥物對(duì)Lewis肺癌小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響，結(jié)果顯示小柴胡湯對(duì)免疫器官無損害作用，又能提高宿主免疫功能。張樹涌等［30］采用ELISA雙抗體夾心法，觀察不同劑量復(fù)方桂術(shù)膠囊作用于肺癌荷瘤小鼠后血清中TNF-α及IFN-γ變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)復(fù)方桂術(shù)膠囊既影響荷瘤小鼠外周血清TNF-α及IFN-γ細(xì)胞因子水平，又能抑制小鼠肺癌，表明復(fù)方桂術(shù)膠囊對(duì)動(dòng)物肺癌的抑制作用與增強(qiáng)荷瘤小鼠細(xì)胞因子TNF-α及IFN-γ的免疫作用有關(guān)。

7 問題與展望

國內(nèi)開展的中藥復(fù)方和復(fù)方制劑治療肺癌機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究，深入地探索了中藥多靶點(diǎn)、多途徑、多層次作用于肺癌細(xì)胞的機(jī)理，為進(jìn)一步研究中藥治療腫瘤的機(jī)理和指導(dǎo)臨床用藥提供了依據(jù)，也將對(duì)中藥復(fù)方的應(yīng)用和推廣起到一定的積極作用。由于中藥復(fù)方和復(fù)方制劑有效成分復(fù)雜，很難界定發(fā)揮作用的具體成分，且影響因素的可控性和實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差;國內(nèi)大量臨床和藥理實(shí)驗(yàn)研究中所涉及的治法和方藥，缺少系統(tǒng)性和一致性。因此，利用計(jì)算機(jī)模擬技術(shù)和分子對(duì)接法對(duì)顯效中藥的多靶點(diǎn)抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行分析，并針對(duì)肺癌的臨床常見證型，系統(tǒng)地探索出一系列療效顯著的腫瘤治法和方藥，構(gòu)建一個(gè)規(guī)范地利用中醫(yī)藥治療肺癌的理論體系，是我們推進(jìn)中醫(yī)藥治療腫瘤事業(yè)邁向科學(xué)化、系統(tǒng)化和規(guī)范化的有效途徑之一。

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