Syndecan-1在視網(wǎng)膜脫離患者玻璃體液中的表達(dá)△

王靜波 宋宗明孫吉君

·基礎(chǔ)研究·

Syndecan-1在視網(wǎng)膜脫離患者玻璃體液中的表達(dá)△

王靜波 宋宗明＊孫吉君＊

目的檢測(cè)孔源性視網(wǎng)膜脫離（RRD）及增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變（PDR）并發(fā)牽拉性視網(wǎng)膜脫離（TRD）患者玻璃體液中syndecan-1的濃度。方法酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)對(duì)照組正常人、RRD組、PDR合并TRD組患者玻璃體液中syndecan-1的濃度。采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。結(jié)果9例正常人玻璃體液中syndecan-1的濃度［中位數(shù)（四分位數(shù)間距）］為0.31（0.22）ng/mL，10例RRD患者玻璃體液中syndecan-1的濃度為1.89（1.89）ng/mL，29例PDR并發(fā)TRD患者玻璃體液中syndecan-1的濃度為3.64（4.00）ng/mL。3組間syndecan-1濃度的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=23.65，P＜0.000 1）。與對(duì)照組syndecan-1的濃度相比，RRD玻璃體液（χ2=8.18，P=0.0167）及PDR并發(fā)TRD玻璃體液（χ2=23.57，P＜0.000 1）中的濃度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論在RRD及PDR并發(fā)TRD的玻璃體液中，syndecan-1的水平較正常均顯著升高。（中國(guó)眼耳鼻喉科雜志，2013，13：357-358，364）

Syndecan-1；視網(wǎng)膜脫離；玻璃體液

syndecan-1屬于黏附分子整聯(lián)蛋白跨膜硫酸肝素蛋白多糖家族成員，調(diào)控細(xì)胞的黏附、移行和增生，參與炎癥、組織器官分化發(fā)育、組織的損傷修復(fù)和再生、血管形成、脂質(zhì)代謝等一系列病理生理過(guò)程［1-3］。我們既往的研究［4］表明，干擾素和腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）等多種炎癥相關(guān)的因子可調(diào)控體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）細(xì)胞syndecan-1的表達(dá)，使細(xì)胞的黏附、移行和增生發(fā)生變化。但目前國(guó)內(nèi)罕有關(guān)于syndecan-1與視網(wǎng)膜脫離的相關(guān)研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)中，我們檢測(cè)了孔源性視網(wǎng)膜脫離（rhegmatogenous retinal detachment，

RRD）及增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變（proliferative diabetic retinopathy，PDR）合并牽拉性視網(wǎng)膜脫離（tractional retinal detachment，TRD）患者的玻璃體液中syndecan-1的濃度情況。

1 材料與方法

1.1 材料 玻璃體液取自2012年8～10月于我院眼科和溫州醫(yī)科大學(xué)附屬眼視光醫(yī)院眼底病外科連續(xù)行玻璃體視網(wǎng)膜手術(shù)的RRD合并增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變（proliferative vitreoretinopathy，PVR）、PDR合并TRD的患眼。手術(shù)時(shí)，建立標(biāo)準(zhǔn)的經(jīng)扁平部玻璃體切除三通道，在關(guān)閉灌注口狀態(tài)下切除玻璃體，并用無(wú)菌試管收集，棄去帶血的玻璃體液。實(shí)驗(yàn)納入9例（9眼）正常對(duì)照者、10例（10眼）RRD合并PVR、29例（29眼）PDR合并TRD的患者。10例RRD患者中，男性7例（70.0％）、女性3例（30.0％），平均年齡44.1歲（21～51歲）。29例PDR合并TRD患者中，男性17例（58.6％）、女性12例（41.4％），平均年齡58.3歲（44～75歲）。10例RRD合并PVR的患者中，PVR C級(jí)2例，PVR D級(jí)8例。健康的對(duì)照組玻璃體液取自同期行角膜移植術(shù)的健康供體成人眼，眼部無(wú)病變。死后6 h內(nèi)收集玻璃體液，以降低離體后玻璃體的生物化學(xué)改變［5］。

1.2 方法 人syndecan-1酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒購(gòu)自法國(guó)Diaclone公司。RRD及PDR的診斷包括手術(shù)前的病史詢問(wèn)及臨床檢查，擴(kuò)瞳后間接檢眼鏡檢查，PDR患者必要時(shí)行熒光素眼底血管造影。PVR的分級(jí)依照1983年的國(guó)際分類法。

收集的玻璃體液用低溫離心機(jī)快速短暫離心，分裝后迅速凍存于-80℃。收集的標(biāo)本按照ELISA試劑盒說(shuō)明書的步驟進(jìn)行syndecan-1檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄為中位數(shù)（四分位數(shù)間距），用SAS 9.2統(tǒng)計(jì)分析軟件統(tǒng)計(jì)分析。組間比較用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

對(duì)照組、RRD組、PDR合并TRD組玻璃體液中syndecan-1的濃度分別為0.31（0.22）ng/mL、1.89（1.89）ng/mL和3.64（4.00）ng/mL。3組間syndecan-1濃度的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=23.65，P＜0.000 1）。與正常對(duì)照組syndecan-1的濃度相比，RRD并發(fā)PVR組（χ2=8.18，P=0.0167）及PDR并發(fā)TRD組（χ2= 23.57，P＜0.000 1）玻璃體液中syndecan-1濃度的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

脊椎動(dòng)物syndecan家族包括4個(gè)成員，即syndecan-1、2、3和4，每個(gè)成員分子可分為3個(gè)區(qū)：胞外區(qū)、單個(gè)跨膜區(qū)和高度保守的短胞質(zhì)區(qū)［4］。生理狀態(tài)下，在蛋白酶等的作用下，syndecan-1胞外區(qū)可自發(fā)脫落；在外傷、炎癥等的狀態(tài)下，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生保護(hù)性反應(yīng)，syndecan-1胞外區(qū)的脫落增加［1-3，6］。而脫落的syndecan-1胞外區(qū)在炎癥反應(yīng)中起重要作用，可結(jié)合并中和炎前因子（趨化因子和細(xì)胞因子等）的潛在有害作用［7］。因而，syndecan-1與炎癥之間的作用是雙向的：炎性因子可調(diào)控syndecan-1的表達(dá)、改變?cè)摲肿影鈪^(qū)的脫落速度，而脫落的可溶性syndecan-1胞外段又可反過(guò)來(lái)調(diào)控炎癥。

研究［1，3，4，8-10］表明，syndecan-1主要在上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和漿細(xì)胞表達(dá)。在炎癥性腸病，腸上皮細(xì)胞syndecan-1的表達(dá)減低［14］，而且這種減低可導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞的屏障功能破壞。在RPE細(xì)胞，TNF等炎性因子及玻璃體液可下調(diào)syndecan-1的表達(dá)，并降低細(xì)胞的黏附［4］。與正常視網(wǎng)膜RPE層syndecan-1的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)相比，在PVR增殖膜、PDR增殖膜及糖尿病大鼠的視網(wǎng)膜中，syndecan-1的表達(dá)明顯降低［4，8，10］。本研究表明，在RRD合并PVR患者的玻璃體液中，syndecan-1胞外段的脫落增加。研究［11］發(fā)現(xiàn)，炎癥刺激后syndecan-1胞外區(qū)脫落的增加與細(xì)胞膜表面syndecan-1表達(dá)的缺失有關(guān)。根據(jù)這一機(jī)制，我們分析，在RRD的病變過(guò)程中，進(jìn)入神經(jīng)感覺層與RPE層間的炎性因子和玻璃體液等因素共同刺激RPE細(xì)胞，細(xì)胞對(duì)這一刺激產(chǎn)生了防御反應(yīng)，導(dǎo)致syndecan-1胞外區(qū)自RPE細(xì)胞表面的脫落增加，細(xì)胞表面syndecan-1的表達(dá)降低，而玻璃體液中可溶性syndecan-1的水平增加；水平增高的可溶性syndecan-1可與一些炎性因子結(jié)合，調(diào)控眼局部的炎癥，并調(diào)控RPE細(xì)胞等多種細(xì)胞的增生和黏附，從而參與PVR的發(fā)生、發(fā)展。

慢性炎癥在糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展中起重要的作用［1-3］。我們既往的研究［1-3，8-9］表明，syndecan-1參與糖尿病的炎癥過(guò)程，并可能在糖尿病的血管并發(fā)癥中起一定的作用。syndecan-1是血管內(nèi)皮細(xì)胞與白細(xì)胞的負(fù)性調(diào)控劑［1-2，9］。在syndecan-1基因敲除的小鼠，視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞與白細(xì)胞的黏附增加［12］。在PDR的發(fā)病中，有RPE細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞的過(guò)度增生。我們分析并推測(cè)，在糖尿病的慢性炎癥刺激下，RPE細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞表面syndecan-1的表達(dá)會(huì)降低，細(xì)胞syndecan-1胞外段的脫落會(huì)增加，脫落的syndecan-1胞外段又進(jìn)一步調(diào)控局部的炎癥。

我們此次的研究表明：在RRD合并PVR及PDR合并TRD患者的玻璃體液中，syndecan-1胞外段的脫落明顯增加。推測(cè)這是眼內(nèi)的RPE細(xì)胞等細(xì)胞對(duì)于炎癥損傷的一種防御反應(yīng)，而增多的可溶性syndecan-1會(huì)進(jìn)一步調(diào)控局部的炎癥反應(yīng)。由于我們收集的特發(fā)性黃斑裂孔患者的玻璃體液標(biāo)本困難且例數(shù)過(guò)少，因而未將特發(fā)性黃斑裂孔患者的玻璃體液作為對(duì)照組，而采用了角膜移植供體的玻璃體液作為正常對(duì)照。因?yàn)闊o(wú)法獲取角膜移植供體患者的年齡而無(wú)法進(jìn)行年齡配對(duì)，這是我們實(shí)驗(yàn)的不足。但我們的研究結(jié)果仍可以充分證明，可溶性syndecan-1在視網(wǎng)膜脫離患者玻璃體液中的濃度是增加的。在隨后的實(shí)驗(yàn)中，我們會(huì)進(jìn)一步研究syndecan-1胞外段在視網(wǎng)膜脫離中的確切作用及其與其他因素之間的相互作用。

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The expression level of syndecan-1 in the vitreous fluid of retinal detachment

WANG Jing-bo，SONG Zong- ming＊，SUN Ji-jun＊.Departmentof Ophthalmology，the309th Hospital of Chinese People′s Liberation Army，Beijing 100091，China

WANG Jing-bo，Email：jingbo.wang＠yahoo.cn

Objective To detect the expression level of syndecan-1 in the vitreous fluid from patients with rhegmatogenous retinal detachment（RRD）and proliferative diabetic retinopathy（PDR）accompanied with tractional retinal detachment（TRD）.M ethods Concentration of syndecan-1 was examined by Enzyme Linked Immunosorbent Assay.Kruskal-Wallis rank sum test was used to compare syndecan-1 level among groups.Results Vitreous fluid sampleswere collected from 9 healthy persons（the controls），10 patientswith RRD and 29 patientswith PDR and TRD.Average syndecan-1 level of the controls，RRD and PDR with TRD was 0.31（0.22）ng/mL，1.89（1.89）ng/mL and 3.64（4.00）ng/mL，respectively.Difference of concentration of syndecan-1 among 3 groups was significant（χ2= 23.65，P＜0.000 1）.Compared with the control group，levels of syndecan-1 in the RRD（χ2=8.18，P=0.0167）and PDR accompanied with TRD（χ2=23.57，P＜0.000 1）enhanced significantly.Conclusions Syndecan-1 enhanced significantly in the vitreous fluid from RRD and PDRwith TRD.（Chin JOphthalmoland Otorhinolaryngol，2013，13：357-358，364）

Syndecan-1；Retinal detachment；Vitreous fluid

2013-05-08）

（本文編輯 諸靜英）

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81100684）；首都衛(wèi)生發(fā)展科研專項(xiàng)（首發(fā)2011-5007-02）

中國(guó)人民解放軍第309醫(yī)院眼科 北京 100091＊溫州醫(yī)科大學(xué)附屬眼視光醫(yī)院眼科 溫州 325000

王靜波（Email：jingbo.wang＠yahoo.cn）