光激化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)測定孕婦促甲狀腺激素的性能評價

錢 俊，胡德宇，張向輝，宋 芳，趙衛(wèi)國

(1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院國際和平婦幼保健院，上海200030;2.博陽生物科技(上海)有限公司，上海201210)

促甲狀腺激素(thyroid stimulating hormone，TSH)是由腺垂體嗜堿細(xì)胞中的S-細(xì)胞分泌的一種糖蛋白激素，其值隨正常的生理活動相應(yīng)波動，是反映甲狀腺功能的一個最敏感的指標(biāo)［1］。妊娠期合并甲狀腺功能亢進(jìn)癥(簡稱甲亢)的發(fā)生率約為0.02% ～0.2%［2］，合并甲狀腺功能減退癥(簡稱甲減)的發(fā)生率約為0.05% ～2.3%［3-6］，妊娠期并甲亢或甲減易造成流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎兒生長受限、死產(chǎn)等，是引起孕婦和胎兒死亡率升高的一個重要原因，因此準(zhǔn)確定量妊娠婦女血清中TSH的水平對于孕婦和胎兒的健康具有重要意義。目前，國內(nèi)TSH的定量分析大多采用的是進(jìn)口的電化學(xué)發(fā)光(electro-chemiluminescence，ECL)試劑。國內(nèi)研發(fā)的光激化學(xué)發(fā)光(light initiated chemiluminescence assay，LiCA)檢測TSH等項(xiàng)目的試劑于近年問世［7-9］。我們評價了國產(chǎn)LiCA TSH定量檢測試劑的臨床應(yīng)用性能，并與ECL TSH檢測試劑做比較，以探討前者的臨床適用性。

材料和方法

一、材料

1.樣本 2011年10月26日至11月1日，上海市國際和平婦幼保健院產(chǎn)檢孕婦的TSH血清樣本384份。

2.儀器 博陽LiCA HT和SP化學(xué)發(fā)光免疫分析儀;Roche E170 ECL免疫分析儀。

3.試劑 Roche ECL TSH檢測試劑盒(批號163973-01)，參考區(qū)間為 0.27 ～4.2 μIU/mL;博陽LiCA TSH檢測試劑盒(批號A1013)，參考區(qū)間為0.4 ～4.51 μIU/mL。

二、方法

1.分析敏感性 方法參考EP17-A文件［10］，質(zhì)控在控的情況下，同批LiCA TSH試劑一次運(yùn)行空白樣本或零值校準(zhǔn)品20次，計(jì)算均值()及標(biāo)準(zhǔn)差(s)，以空白±2s來計(jì)算方法的分析敏感性。

2.功能敏感性 參考美國國家臨床生化學(xué)院(NACB)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)應(yīng)用準(zhǔn)則［11］中的功能敏感性測定方案，使用≥2批以上的試劑，在6～8周的時間內(nèi)盲測不低于10例且涵蓋整個分析范圍的人血清樣本，共20 d，每天測1次，每次復(fù)孔。以此方法計(jì)算變異系數(shù)(CV)為20%時對應(yīng)的濃度值，即為該方法檢測的功能敏感性。

3.批內(nèi)精密度 參考EP5-A2文件［12］，采用同一批試劑、校準(zhǔn)品，以各自配套的質(zhì)控血清作為測試樣本，一次運(yùn)行對樣本重復(fù)測定至少20次。計(jì)算、s及CV。

4.線性 參考EP6-A文件［13］線性參數(shù)驗(yàn)證方案，采用高低濃度樣本倍比稀釋混合，在已知線性范圍內(nèi)選擇5～7個濃度水平，每個濃度測3～4次。以樣本號為X軸，測定均值為Y軸，做圖進(jìn)行回歸分析。樣本的制備按照等濃度間隔設(shè)計(jì)，見表1。

5.混合回收 待測樣本等體積分為3份，取2份分別以等體積與高、低濃度質(zhì)控品(QCH和QCL)等體積混合，分別測定待測樣本、混合后樣本、QCH和QCL各測3次，取，計(jì)算回收率，回收率=實(shí)際檢測濃度/理論濃度×100%。

表1 5個濃度水平的樣本制備

6.干擾 參考EP7-A文件［14］的配對差異法測定干擾影響。試驗(yàn)樣本制備:分別向QCL和QCH中加入一定量干擾物儲存液，使得其干擾物濃度為檢測所允許的最大干擾物濃度，即血紅蛋白為250 mg/dL，膽紅素為10 mg/dL，甘油三酯為500 mg/dL;對照樣本制備:分別向QCL和QCH加入與干擾物儲存液相同體積的干擾物儲存液的溶劑;交替測定試驗(yàn)樣本和對照樣本，每份樣本重復(fù)測5次;由(試驗(yàn)樣本-對照樣本)計(jì)算干擾值，根據(jù)干擾值是否落在對照樣本±1.96s(95%可信區(qū)間)以內(nèi)，判定干擾物對檢測是否有顯著影響。

7.方法學(xué)對比 同一天內(nèi)分別采用LiCA TSH檢測試劑盒和ECL TSH檢測試劑盒對384例樣本進(jìn)行檢測。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用配對t檢驗(yàn)對兩系統(tǒng)的TSH定量結(jié)果做回歸和相關(guān)性分析，χ2檢驗(yàn)對定性結(jié)果做一致性分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、分析敏感性和功能敏感性

LiCA的分析敏感性和功能敏感性分別為0.001 1和 0.017 μIU/mL。

二、批內(nèi)精密度

LiCA檢測QCL和QCH的批內(nèi)精密度分別為1.42%和1.55%，ECL檢測QCL和QCH的批內(nèi)精密度分別為1.50%和1.20%。

三、線性

采用LiCA測定1～5號樣本的TSH水平分別為0.02、27.33、51.52、77.60 和97.82 μIU/mL，做回歸分析，Y=24.58X-22.9(r=0.998，P ＜0.05)。

四、混合回收

測得待測樣本、QCL和 QCH濃度分別為0.51、0.83、20.52 μIU/mL，待測樣本與 QCL 等體積混合后的樣本為樣本 1，測得 TSH濃度為0.65 μIU/mL，回收率為 97.01%;待測樣本與QCH等體積混合后的樣本為樣本2，測得TSH濃度為10.68 μIU/mL，回收率為101.57%。

五、干擾

表2 LiCA干擾試驗(yàn)數(shù)據(jù)

六、定量相關(guān)分析

以ECL檢測結(jié)果為基準(zhǔn)，同時用LiCA檢測384例血清樣本的TSH值并做配對t檢驗(yàn)，結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);做回歸分析，Y=0.923X+0.205(r=0.906 5，P ＜0.05)。見圖1。

圖1 ECL和LiCA TSH檢測結(jié)果相關(guān)性

七、LiCA與ECL的診斷性能比較

1.敏感性、特異性以及總符合率 384例血清樣本以ECL TSH檢測結(jié)果為判定標(biāo)準(zhǔn)，LiCA TSH診斷甲亢的敏感性、特異性和總符合率分別為100.00%、98.61%和98.70%;診斷甲減的敏感性、特異性和總符合率分別為78.95%、100.00%和98.96%。

表3 LiCA和ECL甲亢診斷結(jié)果比較 (例)

表4 LiCA和ECL甲減診斷結(jié)果比較 (例)

討 論

ECL是將在電極表面引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)同免疫測定相結(jié)合的分析方法［15］，以Roche為代表。LiCA是繼發(fā)光氧通道免疫分析(luminescent oxygen channeling immunoassay，LOCI)技術(shù)問世之后，在國內(nèi)建立、發(fā)展并應(yīng)用于臨床檢測的一種新型檢測技術(shù)［16］。其檢測原理簡而言之就是“結(jié)合則發(fā)光”，該技術(shù)以其獨(dú)特的檢測方法，實(shí)現(xiàn)了均相、一步、免洗和高通量檢測，在保持高敏感性、高特異性的同時徹底避免了清洗和分離所帶來的誤差，是標(biāo)記免疫技術(shù)發(fā)展進(jìn)程中一個新的里程碑。

正常人的甲狀腺功能會隨著年齡、性別和環(huán)境的改變而發(fā)生一定的變化。TSH在血清中的含量很低，臨床上一般對于甲狀腺功能紊亂患者的治療需要監(jiān)測6～8周的TSH水平變化，所以要求TSH檢測方法有著相對比較高的批間精密度和敏感性，能夠在TSH低值水平區(qū)分非甲狀腺疾病和甲亢［17-18］。本研究對LiCA TSH定量試劑盒的分析性能進(jìn)行評估，發(fā)現(xiàn)其具有優(yōu)異的分析敏感性、精密度、線性、混合回收和抗干擾能力，尤其是功能敏感性，LiCA 為0.017 μIU/mL，與 Roche TSH說明書標(biāo)示的功能敏感性(0.014 μIU/mL)非常接近，這表明國產(chǎn)LiCA TSH定量檢測試劑臨床分析性能優(yōu)異。

另外，本研究還對384例孕婦TSH的結(jié)果作對比，定量相關(guān)性優(yōu)異，臨床符合率無差異:384例樣本中有5例樣本在甲亢的判定上有差異，4例樣本在甲減的判斷上有差異，經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)都是由于試劑的參考區(qū)間設(shè)定的不同而造成的判定差異。

綜上所述，國產(chǎn)LiCA試劑性能與進(jìn)口ECL試劑無差異，且LiCA試劑有均相、免清洗和試劑成本較低等優(yōu)點(diǎn)，適合用于臨床。

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