幽門螺旋桿菌感染與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移及血漿核黃素水平的關系

張煒煒 阿布力克木·毛拉尤甫 阿仙姑·哈斯木 鄭 超瑪依努爾·艾力

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，居惡性腫瘤死亡率第3位［1-2］。新疆是一個多民族聚集的地區(qū)，具有其獨特的地理文化環(huán)境和生活方式，是胃癌高發(fā)區(qū)之一。胃癌的發(fā)生是感染、飲食、環(huán)境、營養(yǎng)狀況和遺傳等多種致病因素共同作用的結果［3］。大量的動物實驗、臨床觀察及干預實驗都已證實幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）是人胃癌最主要的致癌原［4］。國內(nèi)外研究［5］結果顯示，胃賁門癌與食管癌有著相似的發(fā)病風險因素如營養(yǎng)缺乏、蔬菜水果的低攝入量等。研究［6］發(fā)現(xiàn)C20orf54是賁門癌和食管癌的高易感基因。C20orf54位于常染色體20p13，共有5個外顯子，編碼的蛋白為核黃素轉(zhuǎn)運蛋白［7］，其主要功能是將核黃素由細胞外轉(zhuǎn)入細胞內(nèi)［8］。因此，研究Hp感染、核黃素缺乏與胃癌預后具有一定臨床應用意義。本研究對胃癌患者進行了Hp感染檢測和血漿核黃素水平的測定，通過統(tǒng)計學處理，進一步探討Hp感染與胃癌患者侵襲轉(zhuǎn)移及血漿核黃素水平的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取本院2010年1月至2011年2月入院手術胃癌患者60例，均經(jīng)胃鏡、手術及病理檢查證實。其中Hp感染組32例，中位年齡61（25～83）歲，組織學類型為低分化腺癌18例、中分化腺癌12例、高分化腺癌2例。無Hp感染組28例，中位年齡52（36～75）歲，組織學類型為低分化腺癌12例、中分化腺癌10例、高分化腺癌6例。兩組年齡、性別、胃癌組織學類型差異無統(tǒng)計學意義。血液樣本采集：分別抽取60例胃癌患者血液標本5 mL，選擇EDTA作為抗凝劑，混合3～5 min，2 000～3 000 r/min離心20 min，收集上清液，-20℃凍存待測。

1.2 研究儀器與試劑

美國Waters公司的Waters2695高效液相色譜儀和Waters2475熒光檢測器、蛋白沉淀板、正壓裝置、色譜柱、美國離博中國有限公司的液相專用純化水（MILLIQ，serial0002）。

1.3 方法

1.3.1 Hp檢測 近2周內(nèi)未用抗菌素、抑酸藥物，胃鏡檢查時行Hp快速尿素酶試驗、Warthin-starry組織學染色及14C-UBT，其中任意2項以上結果陽性為Hp感染［9］，3項均陰性為無Hp感染，僅1項陽性者于病例入選時已剔除。

1.3.2 血漿核黃素測定（高效液相色譜） 用高效液相色譜法（HpLC）檢測胃癌患者血漿核黃素水平，高效液相色譜系統(tǒng)自動進樣器設置在28℃，并配置蛋白沉淀板（SiroccoTM96孔，waters，89013B），正壓裝置（96孔waters）。使用液相專用純化水（MILLIQ，serial0002），所有的化學試劑均為分析純。使用三個臨床血清分組并保存在-80℃冰箱中，進行質(zhì)量控制。核黃素儲備液（5 mmol/L）儲存在-20℃的黑暗中以待備用。使用激發(fā)波長為450 nm，發(fā)射波長為520 nm的熒光檢測器檢測核黃素。色譜柱：SymmetryshieldTM RP-C18，色譜柱（4.6 μm×25 cm，5 μm）；流動相：甲醇（5 mmol/L）-乙酸銨（體積比35∶65，pH 5.75），流速0.60 mL/min，測量峰面積并量化。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件包，計量資料兩樣本間均數(shù)比較用獨立樣本t檢驗，計數(shù)資料用χ2檢驗，Logistic回歸分析多因素結果。

2 結果

2.1 Hp感染與胃癌漿膜侵襲、淋巴結轉(zhuǎn)移的關系

單因素分析中顯示Hp感染、核黃素水平、淋巴結轉(zhuǎn)移均影響胃癌漿膜侵襲，Hp感染、核黃素水平、漿膜侵襲均影響胃癌淋巴結轉(zhuǎn)移（均P＜0.05）。而多因素分析結果顯示Hp感染、核黃素水平均為影響胃癌漿膜侵襲、淋巴結轉(zhuǎn)移的獨立因素（表1～3）。

表1 各觀察指標與胃癌漿膜侵襲、淋巴結轉(zhuǎn)移的單因素分析結果Table1 Univariate analysis results of the observed indicators and serosal invasion and lymph node metastasis

（Continued Table1） N metastasis Positive case Positive rate χ2 P20 16 50.00%80.00%5.000 0.025

表2 各觀察指標與胃癌淋巴結轉(zhuǎn)移的多因素分析結果Table2 Logistic regression analysis results of the factors influencing lymph node metastasis

表3 各觀察指標與胃癌漿膜侵襲的多因素分析結果Table3 Logistic regression analysis results of the factors influencing serosal invasion

32例Hp感染組中，20例有漿膜侵襲（62.5%），24例有淋巴結轉(zhuǎn)移（75.0%）。28例無Hp感染組僅4例有漿膜侵襲（14.3%），12例有淋巴結轉(zhuǎn)移（42.9%）。兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001，P=0.001 1，表1）。

2.2 血漿核黃素水平與胃癌漿膜侵襲、淋巴結轉(zhuǎn)移的關系

胃癌無漿膜侵襲組、無淋巴結轉(zhuǎn)移組血漿核黃素水平分別為1.870 6 ng/mL、2.381 1 ng/mL，高于漿膜侵襲組、淋巴結轉(zhuǎn)移組（分別為0.733 1 ng/mL與0.795 0 ng/mL），兩組血漿核黃素水平差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05，表4）。

表4 血漿核黃素水平與胃癌漿膜侵襲、淋巴結轉(zhuǎn)移及Hp感染的關系Table4 Relationship among the plasma riboflavin level,serosal invasion,lymph node metastasis,and Hp infection

2.3 Hp感染與血漿核黃素水平的關系

胃癌無Hp感染組的血漿核黃素水平（1.667 4±0.3700 9）ng/mL高于Hp感染組（1.220 7±0.177 27）ng/mL，血漿核黃素水平差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，表4）。

3 討論

胃癌的形成機制非常復雜，受到飲食、環(huán)境、免疫、遺傳等多種因素的影響，經(jīng)證實其與幽門螺桿菌感染密切相關。但其致癌機制尚不清楚，許多研究證實Hp感染者胃癌前病變的發(fā)生率顯著高于無感染者。胃癌患者中存在Hp感染的胃竇黏膜中細胞凋亡和增殖均增加，且增加的程度與炎癥的程度密切相關。在胃癌發(fā)生發(fā)展中，Hp可能通過促進某些調(diào)控基因的異常表達，導致胃黏膜上皮細胞增殖與凋亡失衡，引起胃黏膜異常，最終導致胃癌［10-11］。目前公認Hp感染可使癌基因激活和使抑癌基因失活，從而導致胃癌的發(fā)生。從本研究可以看出胃癌組織中Hp感染組的漿膜侵襲率、淋巴結轉(zhuǎn)移率明顯高于無Hp感染組，而Hp感染組血漿核黃素水平低于無Hp感染組，證明Hp感染可促進胃癌的侵襲與轉(zhuǎn)移，影響核黃素的吸收，加快胃癌的惡化，縮短生存期。已有報道，胃癌Hp陽性者5年生存期短于Hp陰性者［12］。Hp感染胃癌漿膜侵襲和淋巴結轉(zhuǎn)移增多，血漿核黃素水平偏低，提示有效防治Hp感染，增加核黃素攝入，可能對胃癌的預防、治療和改善預后具有重要意義。核黃素又稱維生素B2，是人體內(nèi)兩種黃素輔酶，即黃素單核苷酸和黃素腺嘌呤二核苷酸的重要組成部分。這兩種輔酶與多種蛋白結合形成黃素蛋白，參與機體的生物氧化反應及能量代謝。核黃素缺乏可以引起體內(nèi)多種代謝障礙。理由是核黃素缺乏與上皮損傷有關，因此核黃素是維持組織完整所必需的。核黃素缺乏過程中，小鼠上皮組織病理變化是胃黏膜上皮萎縮、過度角化和過度增生，并認為核黃素缺乏的病理變化與食管癌、胃癌的發(fā)生有一定聯(lián)系，因為核黃素有維持食管、胃上皮完整性的功能。本研究表明，無漿膜侵襲、無淋巴結轉(zhuǎn)移的胃癌組血漿核黃素水平高于漿膜侵襲、淋巴結轉(zhuǎn)移組。與文獻報道一致［13］，說明維生素B2缺乏與胃癌高發(fā)及胃癌預后有密切的關系。就目前的資料而言，提倡在癌癥特別是食管癌、胃癌高發(fā)區(qū)較普遍地增加膳食中核黃素的攝入量，可能對于預防癌癥和保證健康具有一定的益處。迄今，國內(nèi)僅進行過食管癌高發(fā)區(qū)正常人群血液維生素A、B2、C水平的測定，未行過胃癌幽門螺旋桿菌與血液核黃素水平之間關系的研究工作；至于胃癌與維生素關系的現(xiàn)場調(diào)查研究，國內(nèi)未見報道［14］。本研究為胃癌的病因?qū)W和預防措施，提供了有價值的客觀資料。

綜上所述，Hp感染胃癌漿膜侵襲和淋巴結轉(zhuǎn)移增多，表明在慢性胃炎→胃黏膜萎縮→腸化生→異型增生→胃癌→癌變模式中［15］，Hp可能起著先導作用，提示有效防治Hp感染，可能對胃癌的預防、治療和改善預后具有重要意義?；颊哐獫{核黃素水平低，胃癌漿膜侵襲和淋巴結轉(zhuǎn)移增多，表明核黃素缺乏導致體內(nèi)多種代謝障礙，從而可能影響胃上皮完整性的功能，增加胃癌的風險。Hp感染組的胃癌患者血漿核黃素水平低于非Hp感染組，提示胃癌患者中有Hp感染，且血漿核黃素水平低的患者腫瘤分期晚、預后差。近些年又發(fā)現(xiàn)，Hp還可造成人體鐵、銅、維生素等微量營養(yǎng)素的缺乏，進而誘發(fā)缺鐵性貧血、惡性貧血，甚至可誘發(fā)某些腫瘤［16］，與文獻報道一致。但Hp感染引起核黃素吸收障礙的機制尚不清楚，但可能與下列因素有關。Hp感染后破壞胃上皮的正常功能，從而影響核黃素的吸收；血漿核黃素水平低，不能保證胃上皮完整性的功能，更易于引起Hp感染，因此明確Hp感染與核黃素的關系有至關重要的作用。相信隨著研究的深入將會從分子水平闡明幽門螺旋桿菌感染與胃癌患者侵襲轉(zhuǎn)移及血漿核黃素水平的關系，為胃癌的防治提供新的理論和方法。

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