轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白羊奶生物安全試驗

摘要：為了解轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白羊奶與普通羊奶之間的差異，將兩種羊奶的主要成分及其物理性狀進行了比較；同時，參考中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品食用安全檢測——大鼠 90 天喂養(yǎng)實驗》（NY/T 1102-2006）進行轉(zhuǎn)基因羊奶食用安全評價。實驗結(jié)果表明，90天灌喂轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白羊奶的大鼠與普通羊奶灌喂組血常規(guī)值差異不顯著（P>0.05）；灌喂轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白的羊奶中、高劑量組與自由采食對照組及普通羊奶中、高劑量灌喂組大鼠血清鐵含量及鐵蛋白含量差異顯著（P<0.05）。轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白羊奶與普通羊奶具有實質(zhì)等同性，轉(zhuǎn)基因成分沒有干擾機體對其它營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從營養(yǎng)學角度來評價，轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白羊奶是安全的。

關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白羊奶；安全性評價；血清鐵；鐵蛋白

中圖分類號：S879.1；X954文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2013）02-0023-05

轉(zhuǎn)基因植物以及轉(zhuǎn)基因植物為原料的提取物近年來逐漸進入人類的食物鏈。自2010年美國生物科技公司AquaBounty研發(fā)出的生長快、個頭大的轉(zhuǎn)基因“超級三文魚”，并獲得美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）安全證書[1]，相信在不遠的將來動物轉(zhuǎn)基因食品也會進入人們的餐桌，與此同時，轉(zhuǎn)基因食品的安全性備受爭議。目前，國內(nèi)還沒有對轉(zhuǎn)基因食品進行安全評價的標準，國際上有63個國家遵循1993年國際經(jīng)濟合作組織（OEDC）提出的實質(zhì)性等同原則對轉(zhuǎn)基因食品的安全性進行評價。

乳鐵蛋白（Lactoferrin， LF）是一種相對分子量約為80ku的鐵結(jié)合性糖蛋白，主要存在于乳汁、唾液、精液、鼻腔分泌物等外分泌液或血漿中[2]，乳鐵蛋白分子生物學結(jié)構(gòu)決定其具有結(jié)合鐵的能力，由此帶來了其它一些重要的生物學功能，如具有抑菌[3]、殺菌[4]、 抗病毒[5]、抗感染[6]和調(diào)節(jié)機體免疫功能[7]，直接或間接激活轉(zhuǎn)錄、誘導基因表達作用，對消化道腫瘤具有化學預(yù)防作用。泌乳初期人乳中的乳鐵蛋白含量明顯高于牛乳與羊乳，因此，動物乳人源化，將提高動物乳鐵蛋白含量，目前已經(jīng)獲得轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白的動物種類很多，本實驗即涉及到轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白基因羊奶。

筆者從兩個主要方面對轉(zhuǎn)基因羊奶與普通羊奶進行分析，利用統(tǒng)計學方法對轉(zhuǎn)基因羊奶與普通羊奶的主要生產(chǎn)性能指標進行比較，參考中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品食用安全檢測——大鼠 90 天喂養(yǎng)實驗》（NY/T 1102 — 2006）進行飼喂大鼠實驗。

1材料與方法

1.1供試材料

含有轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白的鮮羊奶由上海杰隆生物制品有限公司贈送，普通羊奶取自山東省農(nóng)業(yè)科學院奶羊場，SD大鼠、基礎(chǔ)日糧購自山東大學新藥評價中心。大鼠血清鐵試劑盒、大鼠鐵蛋白試劑盒購自上海麥莎生物科技有限公司。

Integrated Milk Testing Fossomatic 5000全自動體細胞測定儀，Integrated Milk Testing Milkoscan FT 6000 FOSS ELECTRIC 乳成分聯(lián)合測定儀（丹麥 FOSS公司）；7020 型全自動生化分析儀（日本日立公司）；TaKaRa PCR Thermal Cycler （日本TaKaRa公司）。

1.2實驗方法

1.2.1奶樣分析上海杰隆生物制品公司提供轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白奶山羊羊只泌乳2個月的樣品共計24份〔含量為（4.2±0.3） mg/ml〕，取普通泌乳2月的山羊羊奶，分別測定其乳脂率、乳蛋白率、乳糖、冰點、均質(zhì)度和總干物質(zhì)，重復(fù)測定3次。

1.2.2實驗動物與分組選取SD大鼠210只，體重約為120～160 g，將實驗動物隨機分為7組，每組30只，雌雄各半分籠飼養(yǎng)。同種性別的每籠3只，自由進食、飲水，環(huán)境溫度21～25℃，空氣相對濕度40%～60%。

空白對照組（C組）：飼喂基礎(chǔ)日糧，自由進食、飲水。

普通羊奶灌喂組：根據(jù)灌喂的奶量分為 NL組（飼喂基礎(chǔ)日糧，自由進食、飲水，灌喂普通羊奶0.5 ml）；NM組（飼喂基礎(chǔ)日糧，自由進食、飲水，灌喂普通羊奶1 ml）；NH組（飼喂基礎(chǔ)日糧，自由進食、飲水，灌喂普通羊奶3 ml）。

轉(zhuǎn)乳鐵蛋白羊奶灌喂組：根據(jù)灌喂的奶量分為TL組（飼喂基礎(chǔ)日糧，自由進食、飲水，灌喂轉(zhuǎn)乳鐵蛋白羊奶0.5 ml）；TM組（飼喂基礎(chǔ)日糧，自由進食、飲水，灌喂 轉(zhuǎn)乳鐵蛋白羊奶1 ml）；TH組（飼喂基礎(chǔ)日糧，自由進食、飲水，灌喂轉(zhuǎn)乳鐵蛋白羊奶3 ml）。

1.2.3體重對各組大鼠進行90天灌喂，分別測定各組大鼠的體重增加量，重復(fù)3次，記錄數(shù)據(jù)。

1.2.4大鼠血清鐵含量與鐵蛋白含量測定飼喂90天后，空腹禁水禁食12 h后，將大鼠固定在采血固定套中，用大鼠尾預(yù)熱器對尾部進行預(yù)熱后進行大鼠尾靜脈采血，然后用大鼠血清鐵試劑盒、大鼠鐵蛋白試劑盒進行檢測，方法參考試劑盒說明書進行，重復(fù)3次。

1.2.5大鼠血常規(guī)測定飼喂90天后，空腹禁水禁食12 h后，肌肉注射復(fù)方氯胺酮（1.2 ml/kg）麻醉，采用BD一次性真空采血器（肝素），心臟采血2 ml送檢。委托濟南舜天醫(yī)院進行血常規(guī)檢測，用Coulter-JT 全自動檢測儀（美國庫爾特儀器公司生產(chǎn)），庫爾特公司原配試劑，阻抗法檢測，重復(fù)3次。

1.2.6統(tǒng)計分析實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS統(tǒng)計軟件進行t檢驗