不同基因型高山杜鵑莖段離體培養(yǎng)及工廠化繁育體系優(yōu)化

摘要：為了優(yōu)化高山杜鵑莖段離體組織培養(yǎng)體系及其工廠化繁育體系，對(duì)10份不同基因型高山杜鵑離體培養(yǎng)與植株再生差異進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，供試高山杜鵑莖段外植體在WPM培養(yǎng)基上均能誘導(dǎo)出芽、增殖和生根。在誘導(dǎo)萌發(fā)階段，添加0.5～1.0 mg/L的ZT萌發(fā)效果較好，其中有7份材料在0.5 mg/L ZT時(shí)獲得最佳萌發(fā)誘導(dǎo)。在增殖階段，最佳增殖激素配比為ZT 0.5～0.7 mg/L+NAA 1.0 mg/L，其中6份材料在 ZT 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L激素配比下增殖達(dá)6～9倍。生根階段，培養(yǎng)基最佳激素配比則為NAA 0.25 mg/L+IBA 0.25 mg/L。并且試管外生根效果好于試管內(nèi)生根，平均成活率為80.95%，而試管內(nèi)平均成活率僅為57.94%。在最佳激素配比下供試所有高山杜鵑采用試管外生根成活率均在98%以上，并且試管外生根成本低，操作簡(jiǎn)便快速，適用于工廠化生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：高山杜鵑；組織培養(yǎng)；體系優(yōu)化

中圖分類號(hào)：S685.210.36文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2013）02-0053-04

高山杜鵑（Rhododendron lapponicum L.）是杜鵑花科杜鵑屬灌木類，具有很高的觀賞價(jià)值，原產(chǎn)于我國(guó)中西部地區(qū)，后經(jīng)國(guó)外引種栽培馴化出許多優(yōu)良品種[1]。高山杜鵑經(jīng)人工催化等園藝措施可在春節(jié)前后開花，滿足了人們春節(jié)期間賞花需求，具有廣闊的市場(chǎng)前景。

高山杜鵑扦插及嫁接均不易成活，目前市面上出售的高山杜鵑主要依靠進(jìn)口，進(jìn)口成品花費(fèi)用高[2]，因此解決這一問題的主要措施便是應(yīng)用組培技術(shù)繁殖，組培繁殖不受季節(jié)氣候等因素影響，繁殖速度快。而組培繁殖的培養(yǎng)基及激素配比是組培成功與否的重要因素，因此本試驗(yàn)對(duì)10 個(gè)高山杜鵑品種進(jìn)行了激素配比試驗(yàn)以期篩選合適的激素配比。同時(shí)，為進(jìn)一步節(jié)約成本，適應(yīng)工廠化生產(chǎn)，本試驗(yàn)探索了試管外生根技術(shù)在高山杜鵑上的應(yīng)用。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于 2008～2011年在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)進(jìn)行。10 份高山杜鵑材料取自威海市七彩生物科技有限公司，分別為錦緞、諾娃、騎士、優(yōu)雅、凱特、羅伯特、薩曼特、紅杰克、紅寶石、火箭，依次編號(hào)為 GD1～GD10。

將種苗栽植在塑料花盆中養(yǎng)護(hù)，成活后剪去枝條頂部，以促進(jìn)分枝生長(zhǎng)。取幼嫩莖段作為外植體，流水沖洗 2～4 h，然后加入幾滴洗滌劑浸泡 10 min，并用自來水沖洗至無泡沫為止，用濾紙吸干水分。在無菌室超凈臺(tái)上用 75% 乙醇消毒 1 min；用 1/500 新潔爾滅液消毒 20 min；再用 0.1% 氯化汞消毒 15 min，最后用無菌蒸餾水沖洗 3 遍，用滅菌濾紙吸干外植體表面水分，備用。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1不定芽誘導(dǎo)將滅菌莖段切成長(zhǎng)約 2.0 cm，分別接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：WPM+（0.10、0.50、1.00、5.00） mg/L玉米素（ZT），30 g/L蔗糖，7 g/L瓊脂，pH 5.0。后置于25℃、光培養(yǎng)12 h/d、光照強(qiáng)度2 000 lx下培養(yǎng)。每處理30個(gè)莖段外植體，每個(gè)外植體接1瓶，定期觀察記錄，清理感菌材料，5 周后調(diào)查褐變數(shù)、污染外植體數(shù)和不定芽數(shù)，計(jì)算褐變率、污染率、成活率和不定芽再生率。存活材料7周后用相同培養(yǎng)基繼代1次，繼代2次后的外植體用作適宜基本培養(yǎng)基篩選的外植體材料。

1.2.2不定芽增殖將不定芽均切成小塊接入增殖培養(yǎng)基。增殖培養(yǎng)基WPM +（0.5、 0.7、1.0） mg/L ZT+ 1.0 mg/L NAA，30g/L蔗糖，7 g/L瓊脂，pH 5.0。每個(gè)處理30 株苗，5 周后統(tǒng)計(jì)結(jié)果。增殖系數(shù)=誘導(dǎo)產(chǎn)生芽的總數(shù)/接種外植體的總數(shù)。每處理30個(gè)外植體。

1.2.3生根與移栽將試管苗切成帶1～2個(gè)節(jié)位的小段， 長(zhǎng)約3 cm， 進(jìn)行試管內(nèi)和試管外生根培養(yǎng)。

試管內(nèi)生根：增殖后的試管苗接種在生根培養(yǎng)基上。3周后將生根苗的瓶蓋打開， 于25℃、散射光下煉苗1周， 洗凈根部培養(yǎng)基后將生根的試管苗栽入泥炭∶珍珠巖為2∶1的基質(zhì)中作穴盤苗培育，并加蓋薄膜。

試管外生根：將新誘導(dǎo)的不定芽直接轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基，誘導(dǎo)1周后用苔蘚包裹莖基部，栽入泥炭∶珍珠巖為2∶1 的基質(zhì)中作穴盤苗培育，并加蓋薄膜，溫度約25℃，保持相對(duì)濕度90%以上，光照2 000 lx，每天噴霧2次。

生根率（%）=生根株數(shù)/接種株數(shù)×100。

生根培養(yǎng)基的激素配比篩選：每處理30個(gè)外植體。采用一種高山杜鵑分別接種在激素為NAA（0.1、0.5 mg/L），IBA（0.1、0.5 mg/L）和NAA（0.05 mg/L）+IBA（0.05 mg/L），NAA（0.25 mg/L）+IBA（0.25 mg/L）及NAA（0.5 mg/L）+IBA（0.5 mg/L）的培養(yǎng)基上。

篩選出最佳生根培養(yǎng)基后采用試管外生根接種所有供試高山杜鵑觀察試管外生根效果，每個(gè)品種接種100個(gè)小段。

1.3數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行方差分析和多重比較（Duncan’s法）。

2結(jié)果與分析

2.1基因型、激素濃度對(duì)莖段外植體誘導(dǎo)不定芽的影響

高山杜鵑莖段接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基后，大約2周可誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽，但培養(yǎng)情況因ZT濃度和品種基因型差異而不同。

表1所示，不同基因型高山杜鵑外植體莖段接入培養(yǎng)基后，污染率均很高，最高污染率達(dá)62.22%（GD9，ZT 0.10 mg/L），最低污染率26.67%（GD1，ZT 0.50 mg/L）；高山杜鵑外植體成活率較低，最低僅為3.33%（GD10，ZT 0.10 mg/L）。高污染率和低成活率導(dǎo)致增殖倍數(shù)較低，最低增殖0.04倍（GD2，ZT 5.00 mg/L），最高增殖0.94倍（GD3，ZT 0.50 mg/L）。全部10個(gè)品種高山杜鵑外植體在ZT 0.50 mg/L和1.00 mg/L濃度下增殖效果較好，在0.10 mg/L和5.00 mg/L的濃度下，增殖效果均很差；7個(gè)品種（GD1、GD2、GD3、GD5、GD6、GD7、GD10）高山杜鵑外植體在0.50 mg/L時(shí)增殖倍數(shù)最高，3個(gè)品種（GD4、GD8、GD9）在1.00 mg/L時(shí)增殖倍數(shù)最高（P<0.05）。由此可見，高山杜鵑的基因型不同，最佳誘導(dǎo)條件不同；同時(shí)，不同基因型品種對(duì)相同的誘導(dǎo)條件有一致的適用性。