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    外植體類型和植物生長調(diào)節(jié)劑濃度對紅金銀花愈傷組織誘導(dǎo)的影響

    2012-12-31 00:00:00王文靜王鵬李偉強(qiáng)
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2012年19期

    摘要:以紅金銀花(Lonicera japonica var. chinensis)頂芽、當(dāng)年生幼莖和葉片為試驗材料,利用仿自然氣候的培養(yǎng)條件,采用L9(34)正交試驗設(shè)計,考察了外植體類型和培養(yǎng)基中添加植物生長調(diào)節(jié)劑的濃度對愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明,外植體類型對紅金銀花組織培養(yǎng)的污染率及愈傷組織的誘導(dǎo)率均有影響,以頂芽為外植體時污染率低,愈傷組織誘導(dǎo)率高,為最佳外植體。優(yōu)化后的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中KT、6—BA、α—NAA濃度分別為1.5、1.5、0.5 mg/L。

    關(guān)鍵詞:紅金銀花(Lonicera japonica var. chinensis);外植體類型;植物生長調(diào)節(jié)劑;愈傷組織;正交試驗

    中圖分類號:S685.99;S339.4+1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:0439—8114(2012)19—4391—02

    金銀花(Lonicera japonica Thund.)又名忍冬,是忍冬科忍冬屬多年生半常綠藤本植物,是一種珍貴的觀賞樹種和綠化材料,也是臨床常用中草藥,具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效[1]。紅金銀花(L. japonica var. chinensis)為忍冬科忍冬屬木本植物,是金銀花的野生變種。其枝、葉、莖淡紫色,葉久寒而不落,花蕾紅色,香味濃郁,且生長快、適應(yīng)性強(qiáng)、耐旱、耐澇、耐寒、耐瘠薄,是集藥用、觀賞、水土保持于一體的優(yōu)良品種[2]。目前,生產(chǎn)上金銀花和紅金銀花的主要繁殖方式是扦插,也可用種子繁殖,關(guān)于金銀花的組織快繁已有少量報道[3—5],而紅金銀花相關(guān)方面的研究則較少[6,7]。為加快紅金銀花的繁育,探討了外植體類型和植物生長調(diào)節(jié)劑濃度對紅金銀花愈傷組織誘導(dǎo)的影響,旨在優(yōu)化紅金銀花的組培快繁技術(shù),為紅金銀花工廠化育苗和規(guī)?;耘嗵峁┘夹g(shù)參考。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    紅金銀花當(dāng)年生幼嫩枝條采自河南省封丘縣金銀花基地。

    1.2 實驗方法

    將取回的紅金銀花枝條置于水槽中,用軟毛刷刷洗表面塵土,無菌水反復(fù)沖洗干凈,剪取頂芽部位,保留幼莖和葉片。放入清洗液中浸泡15~20 min,無菌水沖洗,在無菌室用紫外燈照射20 min后,再用體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇浸泡30 s,2 g/L的升汞溶液消毒3~5 min,最后用無菌水沖洗5~8次,用無菌紗布吸干水分,備用。

    頂芽部位保留1.0 cm長左右,幼莖切成1.0~1.5 cm長且?guī)в幸秆康男《?,葉片切成0.5 cm×0.5 cm的小塊,接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基(MS+30 g/L蔗糖+8 g/L瓊脂粉+3 g/L活性碳,pH 6.0),每瓶接種一種外植體,操作均在超凈工作臺上進(jìn)行。在人工智能氣候箱中仿自然條件培養(yǎng),培養(yǎng)條件為光照度1 500~2 000 lx、光照時間12~14 h/d、溫度23~26 ℃。接種培養(yǎng)30 d后觀察記錄外植體的污染率、死亡率和愈傷組織的誘導(dǎo)率。

    設(shè)計L9(34)正交試驗,考察培養(yǎng)基中的KT、6—BA和α—NAA濃度以及外植體類型4個因素對愈傷組織誘導(dǎo)率的影響,因素與水平見表1,每個處理10瓶,重復(fù)3次。

    2 結(jié)果與分析

    頂芽在接種后3 d即可發(fā)現(xiàn)切口處有膨大現(xiàn)象,6 d后所有頂芽基部切口均膨大,并開始出現(xiàn)愈傷組織,結(jié)構(gòu)緊密、質(zhì)地青翠,呈淡綠色半透明狀。葉片切口處膨大現(xiàn)象最早出現(xiàn)在4 d后,8 d后所有葉片切口處均有膨大現(xiàn)象,10 d后有顆粒狀愈傷組織出現(xiàn),愈傷組織以深綠色和淡黃色為主,深綠色的愈傷組織結(jié)構(gòu)緊密、質(zhì)地較硬、呈不透明狀;淡黃色的愈傷組織結(jié)構(gòu)松散、質(zhì)地松軟、呈透明狀。而幼莖切口處膨大現(xiàn)象最早出現(xiàn)在6 d后,10 d后所有切口處均有膨大現(xiàn)象,12 d后有愈傷組織出現(xiàn),以淡黃色為主,質(zhì)地較硬,一般呈不透明狀。

    接種培養(yǎng)30 d后各處理外植體污染率和愈傷組織誘導(dǎo)率結(jié)果見表2。由極差分析可知,4因素中外植體類型對愈傷組織的誘導(dǎo)率和外植體的污染率影響最大。單獨分析外植體類型對愈傷組織誘導(dǎo)的影響見表3,可以看出,污染率和死亡率均以幼莖最高,其次是葉片,頂芽最低,這可能是由于幼莖木質(zhì)化程度相對較高,而葉片與空氣接觸的時間較長,且組織分化程度較高,被空氣中的微生物浸染的機(jī)率明顯高于頂芽。同時,由于葉片組織柔軟,用消毒劑消毒時易破壞葉片組織,造成污染和死亡。3種類型的外植體中愈傷組織的誘導(dǎo)率以頂芽最高,達(dá)92.92%,其次是葉片,為87.39%(表3)。

    3種植物生長調(diào)節(jié)劑中,對愈傷組織誘導(dǎo)影響最大的是KT濃度,其次是α—NAA濃度,6—BAA濃度的影響最小。最佳的培養(yǎng)條件組合為A2B3C3D1,即以頂芽為外植體,KT、6—BA和α—NAA的濃度分別為1.5、1.5、0.5 mg/L。

    3 小結(jié)與討論

    試驗表明,外植體類型對紅金銀花愈傷組織的啟動和形成有較大影響,頂芽啟動愈傷組織時間短、生長速度快,成活率最高,為最佳外植體。不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對紅金銀花愈傷組織誘導(dǎo)和形成的影響不同,誘導(dǎo)率最高的植物生長調(diào)節(jié)劑組合為1.5 mg/L KT+1.5 mg/L 6—BA+0.5 mg/L α—NAA。

    目前,紅金銀花組織培養(yǎng)的研究較少,尚未規(guī)?;瘧?yīng)用于生產(chǎn),主要原因是組培苗移栽成活率較低,育苗成本偏高。如何進(jìn)一步提高繁殖系數(shù)、誘導(dǎo)生根效率和試管苗的移栽成活率,還有待于進(jìn)一步深入研究。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 梁小敏,贛 豐,吳淼生. 金銀花快繁技術(shù)比較研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,36(32):13964—13965.

    [2] 靳維榮,李廣華,孫 強(qiáng),等.自然誘變品種紅金銀花中木犀草苷含量初探[J]. 現(xiàn)代中藥研究與實踐,2011,25(5):22—24.

    [3] 李永興,張麗云.金銀花灰氈毛忍冬組培快繁技術(shù)研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2010(12):101—102,106.

    [4] 方華舟,易慶平,沈 超.金銀花離體快繁技術(shù)的初步研究[J]. 農(nóng)業(yè)科技通訊,2007(9):43—45.

    [5] 趙賢慧,劉慶華,王奎玲,等.誘導(dǎo)紅金銀花愈傷組織的影響因素研究[J].山東林業(yè)科技,2007(1):9—11.

    [6] 王文靜,張寶獻(xiàn),王 鵬.紅金銀花不同外植體組織培養(yǎng)直接成苗培養(yǎng)基篩選[J].北方園藝,2010(13):180—182.

    [7] 趙賢慧.紅金銀花組織培養(yǎng)試驗研究[J].北方園藝,2009(9):71—73.

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