精制銀翹解毒片中對(duì)乙酰氨基酚含量的測定

摘要：建立了精制銀翹解毒片中對(duì)乙酰氨基酚含量的HPLC檢測方法。采用Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇—水—冰乙酸（體積比為20∶80∶0.5）為流動(dòng)相，流速為1 mL/min，檢測波長為249 nm，進(jìn)樣量10 μL，外標(biāo)法定量，結(jié)果顯示，該法專屬性好、簡便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適合于精制銀翹解毒片的質(zhì)量分析。對(duì)乙酰氨基酚在0.016 26～0.081 30 mg/mL的范圍內(nèi)峰面積與測定濃度呈良好的線性關(guān)系，R2=0.999 9（n=5），平均回收率為96.2%，RSD為8.0%（n=9）。

關(guān)鍵詞：HPLC；精制銀翹解毒片；對(duì)乙酰氨基酚；測定

中圖分類號(hào)：R969.1；TS255.36 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439—8114（2012）19—4358—03

精制銀翹解毒片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第三冊(cè)[1]，是由對(duì)乙酰氨基酚、桔梗、連翹、淡豆豉、甘草、淡竹葉、金銀花、牛蒡子、荊芥穗、薄荷腦等組成的復(fù)方制劑，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)乙酰氨基酚的含量測定采用丙酮提取后蒸干，再用無水乙醇溶解，用紫外分光光度計(jì)測定，此方法由于操作繁瑣、時(shí)間長、所用試劑揮發(fā)性較大，造成測定誤差較大。為了保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，根據(jù)現(xiàn)行藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和大量試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)精制銀翹解毒片中對(duì)乙酰氨基酚含量的測定方法進(jìn)行了改進(jìn)。

1 材料與方法

1.1 儀器

高效液相色譜儀（威瑪龍LC9000）。

1.2 材料

對(duì)乙酰氨基酚（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100018—200408，供含量測定用）；精制銀翹解毒片（廣西大力神制藥股份有限公司提供，批號(hào)為100601）；甲醇（色譜純，天津四友）；水為重蒸餾水；冰乙酸（分析純）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱選用杭州環(huán)球色譜科技有限公司的C18（AP）色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇—水—冰乙酸（體積比為20∶80∶0.5）；流速為1 mL/min；檢測波長為249 nm[2]；進(jìn)樣量為10 μL。在該色譜條件下，對(duì)乙酰氨基酚峰形良好，前、后均無雜峰影響。

考慮到樣品溶劑對(duì)色譜的干擾，根據(jù)《中國藥典》附錄中樣品溶劑宜盡量采用流動(dòng)相作溶劑的要求[1，3]，采用本方法的流動(dòng)相作為溶劑，而且經(jīng)試驗(yàn)證明該溶劑在該色譜條件下無干擾。

1.3.2 專屬性試驗(yàn)（空白試驗(yàn)） 按處方制成不含對(duì)乙酰氨基酚的樣品，按上述方法進(jìn)行測定，結(jié)果表明在對(duì)乙酰氨基酚出峰處無吸收峰出現(xiàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系與范圍考察

稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品8.13 mg，置100 mL容量瓶中加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為0.081 3 mg/mL的對(duì)照品溶液。精密量取5.0、10.0、12.5、20.0、25.0 mL上述溶液分別置于25 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。以對(duì)乙酰氨基酚的峰面積（y）對(duì)進(jìn)樣量（x）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：y=5×107x—15 956，R2=0.999 9（n=5）。測定結(jié)果（表1）表明，在0.016 26～0.081 30 mg/mL的范圍內(nèi)峰面積與測定濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

取同一批號(hào)樣品（批號(hào)：100 601）6份，按含量測定項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下，測定對(duì)乙酰氨基酚的含量，結(jié)果顯示方法重復(fù)性良好，結(jié)果見表2。

2.3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

取對(duì)照品溶液（濃度為0.040 65 mg/mL）10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定對(duì)乙酰氨基酚的峰面積，結(jié)果顯示方法精密度良好，結(jié)果見表3。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

取對(duì)照品溶液（0.040 65 mg/mL），于0、2、4、8、12 h分別進(jìn)樣，依法測定對(duì)乙酰氨基酚峰面積值，結(jié)果顯示，溶液至少在12 h內(nèi)是穩(wěn)定的。結(jié)果見表4。

2.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

精密稱取已知含量的同一批供試品（批號(hào)：100 601，含量為100.4%）3份，各精密加入一定量的對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品，研磨均勻后精密稱取3份做平行試驗(yàn)，計(jì)算加樣回收率。測定結(jié)果（表5）較好。

3 小結(jié)與討論

為了保證藥品的質(zhì)量，準(zhǔn)確對(duì)對(duì)乙酰氨基酚的含量進(jìn)行監(jiān)控，本研究在參考有關(guān)報(bào)道和大量試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)精制銀翹解毒片中含量測定方法進(jìn)行改進(jìn)。確定最佳條件為：采用Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇—水—冰乙酸（體積比為20∶80∶0.5）為流動(dòng)相，流速為1 mL/min，檢測波長為249 nm， 進(jìn)樣量為10 μL，以外標(biāo)法測定含量，對(duì)乙酰氨基酚在0.016 26～0.081 30 mg/mL的范圍內(nèi)峰面積與測定濃度呈良好的線性關(guān)系，R2=0.999 9（n=5），平均回收率為96.2%，RSD為8.0%（n=9）。試驗(yàn)結(jié)果顯示該方法靈敏、專屬性強(qiáng)、操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，完全可應(yīng)用于精制銀翹解毒片中對(duì)乙酰氨基酚的質(zhì)量分析。

流動(dòng)相的選擇上，有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道不盡相同，如甲醇—水（體積比35∶65）、甲醇—水（體積比20∶80）等。由于精制銀翹解毒片與銀翹片的處方組成基本一致，因此選擇銀翹片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3—B—4000—98—2003）中的流動(dòng)相甲醇—水—冰乙酸（體積比為20∶80∶0.5）作為流動(dòng)相，得到較好的結(jié)果。

對(duì)乙酰氨基酚的溶劑選擇上，因?qū)σ阴０被右兹苡跓崴?、乙醇，分別采用乙醇、水、甲醇及流動(dòng)相溶解，其中流動(dòng)相和乙醇、甲醇的效果較好[4]。用乙醇做溶劑時(shí)所得峰形較差，用甲醇作溶劑峰形有所改善，但各項(xiàng)條件均不能滿足《中國藥典》的要求；而用流動(dòng)相作溶劑得到的色譜峰峰形好，各項(xiàng)條件均滿足《中國藥典》的要求，因此選流動(dòng)相作為溶劑。

相關(guān)報(bào)道對(duì)乙酰氨基酚在200～400 nm處有最大吸收[5]，取對(duì)照品溶液進(jìn)樣在此波段進(jìn)行掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在249 nm處有最大吸收，且此波長處其他輔料沒有吸收[2]，同時(shí)參考維C銀翹片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（《中國藥典》2010年版一部，其處方組成除多了馬來酸氯苯那敏和維生素C外，其余與精制銀翹解毒片一樣），確定249 nm為檢測波長且得到較好的檢測結(jié)果[2，6]。

參考文獻(xiàn)：

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