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    土壤改良對平地栽參人參莖葉總皂苷含量的影響

    2012-12-31 00:00:00尹敏晶趙巖張連學
    湖北農(nóng)業(yè)科學 2012年19期

    摘要:以人參(Panax ginseng C.A.Mey)莖葉總皂苷為評價指標,研究平地栽參不同土壤改良的最優(yōu)方案。試驗以二次回歸正交旋轉(zhuǎn)設計為基本數(shù)學模型,研究玉米秸稈、豬糞、鹿糞、拮抗菌、菌糠5種基質(zhì)的不同組合對人參莖葉總皂苷含量的影響。模型解析發(fā)現(xiàn),在相同的栽培條件下,5種基質(zhì)對人參莖葉總皂苷含量的貢獻從大到小為豬糞、鹿糞、玉米秸稈、菌糠、拮抗菌。計算機模擬尋優(yōu)表明,玉米秸稈施用量6.64 kg/m2,豬糞施用量3.24 kg/m2,鹿糞施用量3.48 kg/m2,拮抗菌施用量6.87 g/m2,菌糠施用量7.02 kg/m2條件下,人參莖葉總皂苷含量預測值為17.81%。綜上這些栽培因素的組合可以作為平地栽培人參的推薦方案。

    關鍵詞:人參(Panax ginseng C.A.Mey)莖葉;土壤改良;總皂苷;二次回歸正交旋轉(zhuǎn)設計

    中圖分類號:S567.5+1;S156 文獻標識碼:A 文章編號:0439—8114(2012)19—4302—06

    人參(Panax ginseng C.A.Mey)是我國的傳統(tǒng)中藥,為五加科(Araliaceae)人參屬(Panax)多年生草本植物,人參皂苷為人參中最主要的活性成分之一[1,2]。人參根中總皂苷含量約為4%[3],人參莖葉中總皂苷含量則更高。大量研究結(jié)果表明,人參皂苷具有抗疲勞、利尿、抗炎、抗缺氧、提高記憶、延緩衰老、提高機體免疫功能、抗癌等生物活性[4—7]。所以人參皂苷的生理活性決定了其具有很高的食用和藥用價值。

    目前,我國人參種植面積迅速擴大,傳統(tǒng)的人參種植仍是伐林栽參方式,這樣不僅破壞了森林資源,威脅了很多物種的生存環(huán)境,還會造成大面積的水土流失,嚴重破壞生態(tài)環(huán)境[8]。由此擴大人參種植面積和產(chǎn)量與現(xiàn)有土地資源短缺矛盾日益嚴重,所以推廣平地栽參技術,節(jié)省森林土地資源迫在眉睫,平地栽參將成為人參業(yè)可持續(xù)發(fā)展的必由之路[9]。試驗以不同栽參土壤中五年生人參莖葉的總皂苷含量為評價指標,對平地栽參的土壤進行改良。探討平地栽參土壤改良對人參皂苷含量的影響,以推動平地栽參技術的發(fā)展。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    人參:人參采自吉林農(nóng)業(yè)大學人參實驗基地,每塊處理按對角線原則取樣,經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)大學張連學教授鑒定均為人參(Panax ginseng C.A.Mey)正品,符合試驗要求。將選取好的人參莖葉陰干,粉碎備用。人參皂苷Re標準品由吉林省人參工程技術研究中心提供。

    主要試劑:正丁醇、乙醚、濃硫酸、香草醛、高氯酸。

    儀器:DHG—9246A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海精宏試驗設備有限公司);UV—754型紫外分光光度計(山東高密彩虹分析儀器有限公司);TG628A型分析天平(日本島津公司);6孔恒溫水浴鍋(常州奧華儀器有限公司);KQ—250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司); RE—52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);予華牌SHZ—CD型循環(huán)水真空泵(鞏義市予華儀器有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 試驗設計 試驗采用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)設計,以玉米秸稈(x1)、豬糞(x2)、鹿糞(x3)、拮抗菌(x4)、菌糠(x5)為栽培因子,按5因子1/2實施、25型1/2實施試驗,總次數(shù)36次,5次重復。小區(qū)面積3 m2,因素水平設計見表1。收獲后各小區(qū)單獨測人參莖葉總皂苷含量,以結(jié)果的平均數(shù)進行回歸計算。

    1.2.2 樣品溶液制備及總皂苷含量的測定

    1)對照品溶液的制備。精密稱取一定量的人參皂苷Re標準品,用甲醇溶解,配制成5 mg/mL的溶液備用。

    2)供試品溶液的制備。稱取過60目篩的人參莖葉粉末0.5 g,用20 mL去離子水浸泡過夜,超聲(功率100 Hz、溫度30 ℃)提取20 min,提取3次,過濾,合并濾液。乙醚脫脂兩次,每次使用乙醚30 mL,再用水飽和正丁醇60、60、30 mL萃取3次,合并正丁醇層,蒸干,殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中,甲醇定容備用。

    3)總皂苷含量的測定。分別吸取供試品溶液和對照品溶液50 μL,置于具塞試管中,低溫揮干溶劑,加入1%的香草醛高氯酸試液0.5 mL,充分搖勻后置60 ℃恒溫水浴上加熱10 min,立即冰水浴冷卻15 min,加入77%硫酸溶液5 mL,搖勻,以試劑作空白,消除氣泡后用紫外—可見分光光度計檢測,在540 nm處測定吸光度。采用外標一點法計算總皂苷的含量[10]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 試驗方案及結(jié)果

    試驗方案及結(jié)果詳見表2,共進行36個獨立試驗。

    2.2 響應面分析

    采用SAS軟件的RSREG(二次響應面回歸模型)程序?qū)υ囼灲Y(jié)果進行響應面分析,經(jīng)二次回歸擬合,得到回歸模型參數(shù)估計值(表3)、方差分析表(表4)、脊嶺分析表(表5)。

    由表3可知,回歸方程為:y=—1.844 202+0.908 137x1+1.932 413x2+1.405 607x3+0.296 346x4+0.622 170x5—0.044 592x1x1—0.007 113x1x2—0.086 398 x2x2

    —0.108 663x1x3+0.055 639x2x3—0.037 455x3x3+0.083 164x1x4

    —0.187 329x2x4—0.076 851x3x4+0.058 143 x4x4+0.012 629x1x5

    —0.120 621x2x5—0.086 555x3x5+0.113 699x4x5—0.006 216x5x5。

    從表4回歸方程的方差分析可以看出,各項對皂苷含量影響的順序是線性項>交互項>平方項。但由于人參的生長及皂苷的合成受許多因素影響,造成P值均大于0.05,表明其對總皂苷含量的影響均不顯著。相關性分析中,總模型的復相關系數(shù)R2=0.590 6,表明回歸方程與總皂苷的含量具有一定的相關性。

    嶺脊分析結(jié)果(表5)表明,回歸方程預測的土壤最佳條件為:玉米秸稈施用量6.64 kg/m2,豬糞施用量3.24 kg/m2,鹿糞施用量3.48 kg/m2,拮抗菌施用量6.87 g/m2,菌糠施用量7.02 kg/m2,此條件下人參莖葉總皂苷含量預測值為17.81%。

    為了更直觀地體現(xiàn)各因素對提取率的影響,運用ORIGIN軟件繪制了響應面圖形,即人參莖葉總皂苷含量Y對應的玉米秸稈(x1)、豬糞(x2)、鹿糞(x3)、拮抗菌(x4)、菌糠(x5)構成的三維空間圖形,為了更好地表現(xiàn)兩個因素同時對人參莖葉總皂苷提取率的影響,可以令其他因素水平值在中心點(即編碼水平為0),僅考慮這兩個因素對提取率的影響。得到的二元二次方程繪制的相應響應面圖形見圖1至圖10。

    從圖1可以看出,人參莖葉總皂苷含量隨著玉米秸稈施用量的增加而增加,當玉米秸稈施用量在7~9 kg/m2時達到最大值。而總皂苷含量與豬糞的施用呈向下的拋物線型,當豬糞的施用量在4~6 kg/m2時,總皂苷的含量達到最大。

    從圖2可以看出,當玉米秸稈的用量為0時,人參莖葉總皂苷的含量隨著鹿糞施用量的增加而增加,鹿糞用量為10 kg/m2時,總皂苷的含量達到最高。若此時加入玉米秸稈,總皂苷的含量反而會減小。而當鹿糞的施用量為0時,總皂苷的含量也會隨著玉米秸稈施用量的增加而增加,當玉米秸稈的用量為10 kg/m2時,總皂苷的含量達到最高,若此時加入鹿糞,總皂苷的含量反而會隨著鹿糞用量的增加而減小。

    從圖3可以看出,當玉米秸稈用量為0時,拮抗菌的施用對人參莖葉總皂苷含量的影響不大,當玉米秸稈用量為10 kg/m2時,總皂苷的含量會隨著拮抗菌施用量的增加而顯著增加。當拮抗菌的用量為0時,玉米秸稈的施用對總皂苷含量的影響也不是很明顯,當拮抗菌的用量為8 g/m2時,總皂苷的含量會隨著玉米秸稈施用量的增加而顯著增加。

    從圖4可以看出,當玉米秸稈的用量為0時,菌糠的施用量對人參莖葉總皂苷含量幾乎沒有影響,隨著玉米秸稈施用量的增加,總皂苷的含量也會隨之增加,但不論菌糠施用量為多少,總皂苷含量均保持在一個水平的位置,變化不明顯,當玉米秸稈的用量為6~8 kg/m2時,總皂苷含量達到最大值。而當菌糠用量為0時,總皂苷的含量隨著玉米秸稈施用量的增加而增加,在菌糠用量為6~8 kg/m2時,總皂苷的含量達到最大,當用量超過8 kg/m2時,總皂苷的含量反而逐漸減少。

    從圖5可以看出,當豬糞的施用量為0時,總皂苷的含量隨著鹿糞施用量的增加而減少,豬糞用量為10 kg/m2時,總皂苷的含量隨著鹿糞施用量的增加而增加。而當鹿糞的施用量為0時,豬糞施用量為3~5 kg/m2時的總皂苷含量最高,之后當豬糞施用量繼續(xù)增加時,總皂苷的含量反而減小。

    從圖6可以看出,當豬糞的用量為0時,拮抗菌的施用量對總皂苷含量的影響較小,但是隨著豬糞施用量的增加,并且施用少量的拮抗菌時,總皂苷的含量大幅度增加,拮抗菌過多時反而抑制了豬糞對總皂苷的影響,使總皂苷含量減少。當豬糞用量為10 kg/m2時,隨著拮抗菌用量的增加,總皂苷的含量由最高值猛然下降。而當拮抗菌的施用量為0時,總皂苷的含量隨著豬糞施用量的增加而劇烈增加達到最大值。

    從圖7可以看出,當豬糞的用量為0時,總皂苷的含量隨著菌糠施用量的增加而增加,菌糠用量為10 kg/m2時總皂苷的含量達到最高。而當菌糠施用量為0時,總皂苷的含量隨著豬糞施用量的增加而增加,豬糞用量在6~8 kg/m2時,總皂苷的含量達到最大值。

    從圖8可以看出,當鹿糞的用量為0時,拮抗菌的施用量對總皂苷含量的影響較小,但是隨著鹿糞施用量的增加,并且施用少量的拮抗菌時,總皂苷的含量比較高,加入拮抗菌過多時反而抑制了鹿糞對總皂苷的影響,使總皂苷含量減少。當鹿糞用量為10 kg/m2時,隨著拮抗菌用量的增加,總皂苷的含量會逐漸減少。當而拮抗菌的施用量為0時,總皂苷的含量隨著鹿糞施用量的增加而劇烈增加達到最大值。

    從圖9可以看出,當鹿糞的用量為0時,總皂苷的含量會隨著菌糠施用量的增加而增加,菌糠用量為10 kg/m2時,總皂苷的含量達到最高。而當菌糠施用量為0時,總皂苷的含量也會隨著鹿糞施用量的增加而增加。若菌糠的施用量為10 kg/m2時,總皂苷的含量會隨著鹿糞施用量的增加而減少達到最低值。

    從圖10可以看出,當拮抗菌的用量為0時,總皂苷的含量隨著菌糠施用量的增加而減少。當拮抗菌的用量為8 g/m2時,總皂苷的含量隨著菌糠施用量的增加而增加。而當菌糠用量為0時,拮抗菌的施用量對總皂苷含量的影響不明顯。而當菌糠用量為10 kg/m2時,總皂苷含量隨著拮抗菌施用量的增加而增加。

    3 小結(jié)與討論

    人參產(chǎn)業(yè)是吉林省的優(yōu)勢戰(zhàn)略新興產(chǎn)業(yè)。吉林省是中國人參地道藥材的主產(chǎn)區(qū)。其中人參栽培面積3 500 hm2,年產(chǎn)鮮參1.2萬t,占全國產(chǎn)量的85%,占世界的70%。人參作為名貴藥材和補品,在我國中醫(yī)藥及其他國家民族醫(yī)學中一直占有重要地位。在我國醫(yī)藥保健領域也一直發(fā)揮著積極作用,是吉林省中藥經(jīng)濟的重要組成部分。近年來吉林省委省政府對人參產(chǎn)業(yè)給予了高度重視,出臺了一系列政策,促進吉林省人參產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。實施了振興人參產(chǎn)業(yè)工程,確定了人參產(chǎn)業(yè)的發(fā)展目標,到2012年參業(yè)產(chǎn)值要實現(xiàn)200億元,參農(nóng)收入平均要增長20%,60%的人參要達到綠色和有機的標準。精深加工量要占到總量的40%以上。到2015年,參業(yè)產(chǎn)值達到400億元。

    因人參忌連作,多年來一直是沿用伐林栽參的方式培育人參,吉林省平均每年要砍伐3 000 hm2森林,最多的年份達5 000 hm2,伐林栽參已經(jīng)造成森林生態(tài)平衡失調(diào)等一系列問題,對長白山的生態(tài)環(huán)境構成了嚴重威脅。因此,實行平地栽參對于恢復長白山的生態(tài)環(huán)境,促進我國參業(yè)的可持續(xù)發(fā)展意義重大。

    平地栽參的優(yōu)點,一是人為可控的因素增多;二是便于使用機械,同時也便于規(guī)范化種植和管理。對保護林地生態(tài),提高人參質(zhì)量,特別是提高科技含量大有好處。通過對玉米秸稈、豬糞、鹿糞、拮抗菌、菌糠5個因素對人參莖葉總皂苷含量影響的考察,運用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)設計—響應面分析方法,建立了最適合人參栽培的數(shù)學模型。最優(yōu)的栽培條件是:玉米秸稈施用量6.64 kg/m2,豬糞施用量3.24 kg/m2,鹿糞施用量3.48 kg/m2,拮抗菌施用量6.87 g/m2,菌糠施用量7.02 kg/m2,在該條件下人參莖葉總皂苷含量預測值為17.81%。這些栽培因素的組合可以作為平地栽培人參的推薦方案。

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