3種消毒劑對煙草漂浮育苗中TMV的鈍化效果

摘要：為指導(dǎo)煙草（Nicotiana tabacum L.）漂浮育苗中剪葉工具和舊苗盤消毒劑的使用，采用半葉法測定了3種消毒劑對煙草普通花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）病葉汁液和病苗干根、干葉中TMV的鈍化效果，同時運(yùn)用葉面噴霧法測定了消毒劑常用濃度下煙苗的藥害發(fā)生率和癥狀。結(jié)果表明，兆冠50倍稀釋液處理20 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒、50倍稀釋液可完全鈍化病苗風(fēng)干的細(xì)側(cè)根和葉片細(xì)條中的病毒；錦鈺50倍稀釋液處理5 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒、50倍稀釋液可完全鈍化病苗風(fēng)干的細(xì)側(cè)根和葉片細(xì)條中的病毒；金百萬20倍稀釋液處理20 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒、20倍稀釋液可完全鈍化病苗風(fēng)干的細(xì)側(cè)根和葉片細(xì)條中的病毒。常用濃度下金百萬基本不產(chǎn)生藥害；錦鈺和兆冠易產(chǎn)生藥害，癥狀主要表現(xiàn)為退綠斑點(diǎn)、壞死和葉片畸形。

關(guān)鍵詞：煙草（Nicotiana tabacum L.）；漂浮育苗；煙草普通花葉病毒（TMV）；消毒劑；藥害

中圖分類號：S572 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439—8114（2012）19—4280—04

目前煙草（Nicotiana tabacum L.）漂浮育苗技術(shù)已在我國煙草生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用，漂浮育苗的一個突出病害就是由煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）引起的煙草花葉病毒病[1]。在煙草漂浮育苗過程中，TMV污染的苗盤和剪葉工具是煙草普通花葉病毒的重要初侵染源[2]。生產(chǎn)上使用的育苗盤具有多孔特性，清洗和消毒較困難，常常黏附有煙苗殘體，而TMV在病殘體和環(huán)境中穩(wěn)定性強(qiáng)，可在干殘體中存活多年[3]；同時在煙草育苗期間需剪葉3～5次，且育苗集中度高，一旦有毒源存在，很容易傳播，造成病毒大面積侵染。因此，篩選安全、有效的消毒劑對煙草漂浮育苗中病毒病的防控具有重要意義。

前人對育苗過程中的剪葉工具和池水消毒劑分別進(jìn)行過篩選[4—6]，評價了蒸汽[7]、部分藥劑對舊漂浮盤殘留物中TMV的鈍化效果[8]，但未對有效消毒劑同時進(jìn)行病苗殘留物（根、葉）和剪葉工具中的TMV鈍化效果評價，而消毒劑如能同時用于苗盤和剪葉工具消毒，在實際生產(chǎn)上將更為經(jīng)濟(jì)和方便。結(jié)合生產(chǎn)實際，選用3種消毒劑模擬剪葉工具和舊育苗盤病苗殘留物消毒，比較3種消毒劑鈍化病葉汁液和病苗干根、葉中TMV的效果及在常用濃度下接觸煙苗的藥害癥狀，以期為煙草漂浮育苗消毒劑的選擇和科學(xué)使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 消毒劑

聚維酮碘水溶劑（金百萬），北京東旺農(nóng)藥廠；10%的二氧化氯粉劑（兆冠），濰坊兆冠化工有限公司；中性消毒粉劑（錦鈺），貴州遵義泉通化工有限公司。消毒劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2 供試煙草和病毒

供試煙草品種K326和Coker 176由貴州省煙草科學(xué)研究所提供。K326、Coker 176按常規(guī)育苗規(guī)程進(jìn)行管理，K326于成苗期進(jìn)行藥害試驗；Coker 176成苗后于室內(nèi)防蟲網(wǎng)盆栽，7～8片葉時用于接種，接種前打頂，去除其他葉片，保留生長整齊一致的3～4片葉；TMV毒源由貴州省煙草科學(xué)研究所保存。

1.3 TMV體外抑制效果測定

稱取2 g典型TMV病葉，加去離子水和600目金剛砂研磨并稀釋100倍，用滅菌紗布過濾后取上清做接種病液。將一定濃度的消毒劑稀釋液與TMV病葉汁液等量混合，室溫分別接觸5、20 min后摩擦接種，接種前噴灑適量金剛砂于葉片表面。左半葉接種去離子水處理的TMV病葉汁液（對照），右半葉接種經(jīng)消毒劑處理的TMV病葉汁液，每半片葉接種200 μL。接種后清水噴霧沖洗葉面，重復(fù)3次。接種5～7 d后統(tǒng)計枯斑數(shù)（6個半葉的平均值），計算抑制率。

抑制率=[1—（處理平均枯斑數(shù)/對照平均枯斑數(shù)）]×100%。

1.4 病苗干根和干葉的消毒劑浸泡處理

根據(jù)1.3的試驗結(jié)果，選用病葉汁液病毒抑制率達(dá)100%的消毒劑濃度模擬舊育苗盤的消毒。將風(fēng)干的TMV病苗的細(xì)側(cè)根和葉細(xì)條置于小燒杯中，分別加入材料鮮重20倍體積的消毒液浸泡20 min，倒去消毒液，用塑料薄膜密封燒杯口，放置2 d后加入材料鮮重20倍體積的去離子水研磨，過濾取上清液人工接種；對照加入去離子水，其余同處理。

1.5 藥害試驗

采用160孔苗盤育苗，常規(guī)管理，在煙苗成苗期進(jìn)行試驗。消毒劑設(shè)200倍、400倍稀釋液兩個濃度，每一濃度消毒劑設(shè)兩種處理，施藥5 min后清水噴霧沖洗（W）和施藥后不用清水沖洗（NW），每處理160株煙苗。采用手持噴霧器每盤噴施消毒液7～8 mL，葉面霧滴均勻無流失。以去離子水處理為對照，藥后第7天調(diào)查顯癥株數(shù)和藥害癥狀，調(diào)查時無明顯侵染性病害癥狀的不正常現(xiàn)象均記錄為藥害癥狀。

藥害率=（顯癥株數(shù)/總株數(shù)）×100%。

1.6 消毒液的腐蝕作用觀察

把鐵釘、銅絲和漂浮盤泡沫塑料放入玻璃器皿內(nèi)，分別加入金百萬、兆冠、錦鈺100倍稀釋液和自來水密封浸泡，1、3、5 d后觀察腐蝕結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒劑對TMV的體外抑制效果

不同稀釋倍數(shù)消毒劑與等量病葉汁液混合并放置一定時間后接種Coker 176，以測試消毒劑對TMV的鈍化效果。由表1可知，在消毒劑50、100、400、800倍稀釋液條件下，混合液接觸5 min后接種，兆冠對TMV的抑制率分別為95.80%、68.88%、28.20%、4.31%，錦鈺對TMV的抑制率分別為100.00%、76.10%、72.08%、53.04%；混合液接觸20 min后接種，兆冠對TMV的抑制率分別為100.00%、84.82%、46.09%、45.11%，錦鈺對TMV的抑制率分別為100.00%、81.01%、75.18%、59.09%；在20、100、400、800倍稀釋液條件下，混合液接觸5 min后接種，金百萬對TMV的抑制率分別為93.83%、61.19%、28.67%、10.81%；混合液接觸20 min后接種，金百萬對TMV的抑制率分別為100.00%、73.67%、49.74%、43.39%。消毒劑對病毒的抑制率均隨使用濃度的降低而下降。

2.2 消毒劑對病苗干根和干葉中TMV的抑制效果

根據(jù)2.1的試驗結(jié)果，在稀釋20～50倍的高濃度條件下，測試了3種消毒劑對帶毒煙苗干根和干葉的鈍化效果。結(jié)果表明，錦鈺50倍稀釋液、兆冠50倍稀釋液和金百萬20倍稀釋液處理2 d后可完全滅活病苗干根和干葉中的病毒。

2.3 常用濃度下3種消毒劑對煙苗的藥害情況

施藥7 d后調(diào)查常用濃度下3種消毒劑對K326的藥害情況，結(jié)果見表2。從表2可以看出，在200倍、400倍稀釋液處理下（產(chǎn)品推薦使用濃度），施兆冠后不用清水沖洗藥害率分別為95.7%和88.6%，藥后用清水沖洗藥害率分別為7.1%和2.9%；施錦鈺后不用清水沖洗藥害率分別為71.4%和42.9%，藥后用清水沖洗藥害率分別為2.9%和0；施金百萬不用清水沖洗藥害率分別為4.3%和0，藥后用清水沖洗煙苗正常。錦鈺主要引起煙苗出現(xiàn)退綠斑點(diǎn)，一般不產(chǎn)生畸形和壞死；兆冠可導(dǎo)致煙苗出現(xiàn)畸形和壞死，葉片多產(chǎn)生褐色斑點(diǎn)；金百萬對煙苗基本不產(chǎn)生藥害。表明煙苗對兆冠和錦鈺兩種消毒劑均較敏感，易產(chǎn)生藥害，在相同藥液濃度下錦鈺藥害程度輕于兆冠，在生產(chǎn)上兩者均不宜用作煙苗直接消毒和育苗池水消毒。

2.4 消毒劑對鐵釘、銅絲和漂浮盤泡沫塑料的腐蝕作用

消毒劑均使用100倍稀釋液，與自來水相比，兆冠100倍稀釋液對鐵釘、銅絲具有較強(qiáng)的腐蝕作用，1 d后觀察即可見明顯的腐蝕現(xiàn)象，隨時間的延長腐蝕加劇且嚴(yán)重，漂浮盤泡沫塑料無明顯的腐蝕現(xiàn)象；錦鈺100倍稀釋液在浸泡1 d后觀察無明顯的腐蝕現(xiàn)象，3 d后觀察可見鐵釘、銅絲有腐蝕現(xiàn)象，隨時間延長腐蝕加劇，對漂浮盤泡沫塑料無明顯腐蝕作用；金百萬對漂浮盤泡沫塑料無腐蝕作用，浸泡3 d后對鐵釘和銅絲有一定的腐蝕作用，程度輕于錦鈺和兆冠。表明消毒劑對金屬類材料均有一定的腐蝕作用，應(yīng)用時不宜用金屬類器具長時間盛放藥液，若使用噴霧器噴施，用藥后應(yīng)立即清洗噴霧器。

3 小結(jié)與討論

在危害煙草的諸多種病毒中，就病毒的體外保毒期、稀釋限點(diǎn)[2]、鈍化溫度和傳播方式比較而言，TMV是最頑固、最容易通過剪葉等途徑傳播的病毒，通過測定消毒劑對TMV的抑制效果，對于指導(dǎo)生產(chǎn)中利用消毒劑防治其他常見煙草漂浮育苗的病毒是可行的[4，5]。酶聯(lián)免疫法是病毒檢測最為常用的方法，但病毒粒子滅活、鈍化后仍具有抗原性，同時消毒劑可干擾檢測，因此試驗通過寄主枯斑的抑制率來評價消毒劑對TMV的抑制效果。

兆冠50倍稀釋液處理20 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒，50倍稀釋液處理2 d可完全鈍化煙苗風(fēng)干的細(xì)側(cè)根和葉片細(xì)條中的病毒；錦鈺50倍稀釋液處理5 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒，50倍稀釋液處理2 d可完全鈍化風(fēng)干的煙苗細(xì)側(cè)根和葉片細(xì)條中的病毒；金百萬20倍稀釋液處理20 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒，20倍稀釋液處理2 d可完全鈍化煙苗風(fēng)干的細(xì)側(cè)根和葉片細(xì)條中的病毒。錦鈺和兆冠消毒劑對煙苗均易產(chǎn)生藥害、對金屬類材料均有一定的腐蝕作用。從3種消毒劑對病毒的鈍化效果來看，從大到小為錦鈺、兆冠、金百萬；就消毒劑對煙苗的藥害程度和對金屬類材料的腐蝕作用來看，金百萬優(yōu)于兆冠和錦鈺。

試驗使用的病毒濃度較高（2 g TMV病葉加去離子水和600目金剛砂研磨后稀釋100倍），實際生產(chǎn)中剪葉工具、苗盤和人為操作的帶毒濃度遠(yuǎn)低于試驗濃度，因此試驗確定的消毒劑使用濃度和使用時間在實際應(yīng)用中是可靠的。根據(jù)試驗結(jié)果，綜合考慮消毒對象可能存在的病毒量、使用成本等因素，錦鈺和兆冠對育苗盤、剪葉工具和育苗場地的消毒應(yīng)不低于100、150和500倍稀釋液的濃度；金百萬對育苗盤、剪葉工具和育苗場地的消毒應(yīng)不低于50、100和400倍稀釋液的濃度。為保證徹底殺滅病毒，3種消毒劑對育苗盤、剪葉工具的接觸時間應(yīng)不低于20 min。錦鈺和兆冠對煙苗可產(chǎn)生一定的藥害現(xiàn)象，生產(chǎn)上均不宜用作煙苗直接消毒和育苗池水消毒，只可用于育苗盤、剪葉工具和育苗場地的消毒。試驗中金百萬對煙苗基本不產(chǎn)生藥害，但未涉及施用金百萬對煙苗生長和育苗池水的影響，因此是否能用于煙苗直接消毒及育苗池水消毒還有待研究。3種消毒劑對金屬類材料均有一定的腐蝕作用，應(yīng)用時不宜用金屬類器具長時間盛放藥液，若使用噴霧器噴施，用藥后應(yīng)立即清洗噴霧器。

在漂浮育苗過程中，使用消毒劑進(jìn)行煙草病毒病的防治只是諸多手段之一，同時上述方法還需要田間試驗進(jìn)一步完善和驗證。

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