超聲提取—氣相色譜法測定曲克蘆丁中甲醇

摘 要：提出了采用乙腈作為溶劑漩渦混合超聲提取-氣相色譜外標法定量測定曲克蘆丁中甲醇的方法。結(jié)果顯示，提取方式選擇漩渦混合提取5分鐘加超聲提取20分鐘，提取率最高，甲醇濃度在0.05～2mg/ml呈線性關(guān)系，甲醇的定量限為0.0042mg/ml。在2個標準加入水平下進行回收率和精密度實驗，加標回收率均處于98.1%～101.2%之間，相對標準偏差（n=6）小于1.95%。

關(guān)鍵詞：曲克蘆丁 甲醇 超聲提取 氣相色譜法

中圖分類號：O6文獻標識碼：A文章編號：1674-098X（2012）09（a）-0013-03

曲克蘆?。╰roxerutin）為一種抗凝血藥和溶栓藥，具有抑制紅細胞和血小板凝聚作用，防止血栓形成，同時能增加血中氧的含量，改善微循環(huán)，促進新血管生成以增進側(cè)支循環(huán)[1]。曲克蘆丁是蘆丁和環(huán)氧乙烷經(jīng)過醚化反應后得到的羥乙基蘆丁的有效成分[2，3]。要達到注射要求的曲克蘆丁必需經(jīng)過精制，目前，通過甲醇對曲克蘆丁進行精制提純是曲克蘆丁純化的通用手段。然而，甲醇對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有麻醉作用；對視神經(jīng)和視網(wǎng)膜有特殊選擇作用，引起病變；可致代射性酸中毒，食用5～10mL能雙目失明，大量食用會導致死亡。

甲醇殘留于曲克蘆丁中不可避免，曲克蘆丁中甲醇含量檢測是優(yōu)化其生產(chǎn)工藝必備的前提條件之一。目前，國內(nèi)只有藥典中有提到曲克蘆丁中甲醇的檢測方法，但是其方法中存在很多弊端，本方法采用乙腈作為溶劑，漩渦混合超聲提取，氣相色譜外標法定量測定曲克蘆丁中甲醇，該法線性范圍寬、重復性好、準確度高等優(yōu)點。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

安捷倫7890A氣相色譜儀（帶FID檢測器）；超聲波萃取儀（寧波新芝生物科技股份有限公司）；漩渦混合器（浙江金壇市金城教學儀器廠）等。

乙腈為優(yōu)級純（天津市科密歐化學試劑有限公司）；甲醇為優(yōu)級純（天津市科密歐化學試劑有限公司）；曲克蘆?。ㄊ惺郏?。

1.2 色譜條件

載氣為99.99%高純氮氣；色譜柱：DB-WAX （30m-0.25mm-0.32mm）；分流不分離進樣口溫度為150℃，分流比20：1；檢測器溫度為200℃；柱流量為4ml/min，柱箱溫度條件：初始溫度60℃保持3min，以20℃/min升溫至120℃，保持5min。

1.3 標準溶液的制備

精密稱取甲醇0.5000g至100ml容量瓶中，用乙腈定容，混勻，得5mg/ml甲醇標準儲備液。將儲備液用乙腈稀釋成0.05、0.1、0.2、0.5、1、2mg/ml的系列標準溶液。

1.4 供試品溶液的制備

精密稱取曲克蘆丁樣品0.5000g，用乙腈作為溶劑，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，用乙腈定容，漩渦混合器混合2min，超聲波超聲20min，0.45μm微孔濾膜過濾于進樣瓶中，待測。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化與選擇

2.1.1 進樣口條件選擇

選擇進樣口溫度為120、150、180、200℃時，用10mg/ml標準溶液分別進樣5次，結(jié)果顯示，當進樣口溫度在120℃和150℃時，峰形及峰面積穩(wěn)定性較好，當進樣口溫度在180℃和200℃時，峰形及峰面積穩(wěn)定性波動較大。實驗結(jié)果表明，溫度越低，實驗穩(wěn)定性越好，主要原因可能是甲醇分子量小，沸點低，本身穩(wěn)定性較低，當氣化溫度低時，其膨脹系數(shù)相對小些，穩(wěn)定性就會更好。但是，如果溫度太低，供試溶液中其它雜質(zhì)就無法排除，因此進樣口溫度選150℃更好。

2.1.2 柱箱溫度條件選擇

當柱箱溫度從60℃至120℃之間變化時，甲醇出峰時間一般在1分鐘到2分鐘之間，溫度為60℃時峰形更好，考慮到供試溶液中雜質(zhì)較多，采用程序升溫，最終溫度升溫至120℃，保持5min后再無雜質(zhì)峰出現(xiàn)。實驗結(jié)果表明，柱箱溫度條件應該為：初始溫度60℃保持3min，以20℃/min升溫至120℃，保持5min。

2.2 實驗條件的選擇

2.2.1 溶劑的選擇

稱取樣品0.5000g，分別采用水、乙醇、乙腈作為溶劑進行比較實驗。其中水作為溶劑時，樣品能全部溶解，甲醇的峰拖尾嚴重，拖尾因子達到1.8，當多次進樣后，基線不穩(wěn)，雜峰增多，主要原因是大分子的曲克蘆丁無法去除，嚴重污染了進樣口。當采用乙醇作為溶劑時，甲醇峰拖尾，拖尾因子達到1.5，而且甲醇與乙醇出峰時間過于靠近，不便于分析。當采用乙腈作為溶劑時，峰形較好，拖尾因子1.2，雜質(zhì)較少，復合要求分析要求。因此，溶劑選擇乙腈。譜圖見圖1。

2.2.2 甲醇的提取方法選擇

稱取樣品0.5000g，采用乙腈作溶劑溶解，分別采用漩渦混合提取5min，漩渦混合提取10min，漩渦混合提取5min加超聲提取10min，漩渦混合提取5min加超聲提取15min，漩渦混合提取5min加超聲提取20min。檢測回收率結(jié)果見表1，實驗結(jié)果標明，單一采用漩渦混合方式，回收率一般只能達到74%，漩渦混合加超聲提取效果明顯提高，回收率能達到90%以上，當超聲時間達到20min時，已經(jīng)基本能夠滿足檢測要求，回收率能達到98.6%。因此，提取方式選擇漩渦混合提取5min加超聲提取20min。

2.3 方法的專屬性

在上述色譜條件和實驗條件下，分別取空白溶液、標準品溶液與供試品溶液進行測定，得到特征峰，結(jié)果表明，測定無干擾，譜圖見圖2。

2.4 標準曲線和定量限

將1.3節(jié)中所制備的甲醇標準溶液進行分析，以質(zhì)量濃度（mg/ml）為橫坐標X，甲醇鋒面積為縱坐標進行線性回歸，得甲醇標準曲線Y=1546.9X+2154.6（R=0.9998），結(jié)果表明，甲醇濃度在0.05～2mg/ml內(nèi)線性關(guān)系良好。甲醇的定量限為0.0042mg/ml。

2.5 精密度試驗

取一定量的甲醇儲備液，用乙腈稀釋，得到濃度分別為1.2mg/ml的甲醇標準溶液各5份進行分析，計算得到相對標準偏差（RSD），結(jié)果見表2。結(jié)果表明，兩個濃度的標準溶液的RSD均小于1.95%，符合檢測方法要求。

2.6 回收試驗

稱取0.5000g已知甲醇含量的曲克蘆丁樣品6份，分別加入質(zhì)量濃度分別為1、2mg/ml的甲醇標準溶液1ml，每個濃度3份，在2.1和2.2的條件下進行分析，計算回收率，結(jié)果見表3。甲醇的回收率均處于98.1%～101.2%之間。

2.7 樣品分析

稱取不同樣品8批次，按1.4的方法處理，在2.1的色譜條件下測定，得到各樣品的甲醇含量。結(jié)果見表4。

本方法建立了曲克蘆丁中甲醇的檢測方法，具有操作簡單、靈敏度高、雜質(zhì)含量低、回收率良好和穩(wěn)定性好的優(yōu)點，用于實際樣品的測定，結(jié)果滿意。

參考文獻

[1]周昌奎，吳曉華.曲克蘆丁臨床研究新進展[J].中國生化藥物雜志，2005.26（5）：56-58

[2]李玉山.曲克蘆丁的合成工藝研究[J].應用化工，2008.38（8）：1060-1062

[3]王厚全，任慧霞，程秀民，等.曲克蘆丁的精制[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志2002.33（8）：368-369