養(yǎng)血榮筋丸中橙皮苷含量測定

王慧

（哈藥集團(tuán)中藥二廠質(zhì)檢中心，黑龍江 哈爾濱 150078）

前言

養(yǎng)血榮筋丸由鐵絲威靈仙（酒炙）、伸筋草、補(bǔ)骨脂（鹽炒）、油松節(jié)、赤芍、黨參、何首烏（黑豆酒炙）、陳皮、雞血藤、透骨草等組成。養(yǎng)血榮筋丸具有養(yǎng)血榮筋、祛風(fēng)通絡(luò)的作用。養(yǎng)血榮筋丸主要用于筋骨疼痛、關(guān)節(jié)不利、肢體麻木、肌肉萎縮、腫脹等。陳皮，別名：廣橘皮、新會皮、廣陳皮、橘皮、貴老等。陳皮常用于便溏泄瀉、脾虛飲食減少、胸腹脹滿、濕阻中焦、脘腹痞脹、消化不良、納呆便溏，痰濕壅肺之咳嗽氣喘等癥狀。陳皮具有抗炎、抗?jié)儭⒗?、冠狀血管擴(kuò)張、促進(jìn)消化液的分泌、消除腸道積氣等作用。本文采用高效液相法測定養(yǎng)血榮筋丸中橙皮苷含量。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對養(yǎng)血榮筋丸中的橙皮苷的進(jìn)行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：Waters515高效液相色譜儀；N3000色譜工作站；Waters可變波長檢測器。賽多利斯BPZn-D分析天平；)；KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；十萬分之一電子分析天平 (德國塞多利斯)；PHS一3TC(0.01級)精密數(shù)顯酸度計(jì)(上海天達(dá)儀器有限公司)；PL5124 型純水機(jī)(PALL)；索氏提取器。

1.2 色譜柱：安捷倫 C18色譜柱（218 mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：橙皮苷 購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4 試劑：甲醇、乙腈為色譜純；水為純化水，其它試劑均為分析純。

1.5 試藥：養(yǎng)血榮筋丸（批號：100801，100802，100803）

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

2.1.1 流動相的選擇：分別考察甲醇-水 (15∶85)，甲醇一醋酸一水(35:4：61)，甲醇-水(18∶92)不同比例的流動相，結(jié)果以甲醇一醋酸一水(35:4：61)為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇一醋酸一水(35:4：61)為流動相為流動相。

2.1.2 檢測波長的選擇：制備橙皮苷對照品稀釋液照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010版一部 附錄Ⅴ A），于190～900nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行全波長光譜掃描，記錄吸收光譜。在283nm處有最大吸收峰，故選用283nm為檢測波長。

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動相：甲醇一醋酸一水(35:4：61)，檢測波長：283nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取橙皮苷對照品適量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得。

2.3 提取方法確定

2.3.1 提取溶媒的選擇

在供試品溶液制備中，分別選用了乙醇、石油醚脫色后甲醇提取、甲醇進(jìn)行加熱回流提取，結(jié)果表明石油醚脫色后甲醇提取分離效果、峰形及含量為最好，所以選擇石油醚脫色后甲醇進(jìn)行熱回流提取。

2.3.2 提取時(shí)間的選擇

取供試品適量，用石油醚加熱回流提取分別提取2、3、4小時(shí)，棄石油醚，加適量甲醇，再加熱回流至提取液無色，放冷，過濾，揮干甲醇提取液，殘?jiān)?0ml甲醇溶解，搖勻，濾過。供試品溶液的含量結(jié)果表明：三種提取時(shí)間結(jié)果無明顯差異，為保證脫色完全并縮短處理時(shí)間，采用石油醚加熱回流提取3小時(shí)后，棄石油醚，加適量甲醇，再加熱回流至提取液無色。

2.3.3 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的供試品，剪碎，混勻，稱取24g，置具索氏提取中，加入石油醚適量，加熱回流提取3小時(shí)，棄石油醚，藥渣用適量甲醇熱回流提取至提取液無色，放冷，過濾，揮干甲醇提取液，殘?jiān)?0ml甲醇溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 專屬性試驗(yàn)

依照處方取除陳皮以外的藥材，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，照2.3.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結(jié)果在橙皮苷出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇使溶解，制成濃度為0.4mg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.91%，表明本方法精密度良好。

2.6 對照品的線性考察

精密稱取橙皮苷對照品15mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取 0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為：y=11351.89x-1213.86（r=0.99992）。結(jié)果表明，橙皮苷在 0.12～0.6mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的養(yǎng)血榮筋丸樣品6份，按測定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為1.01%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的橙皮苷對照品，上述方法進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.0%，RSD=0.95%。結(jié)果表明此方法的回收率良好。

2.9 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批養(yǎng)血榮筋丸樣品，按2.3項(xiàng)下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第 0、2、4、6、8、10 小時(shí)，精密吸取供試品溶液10μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定養(yǎng)血榮筋丸中橙皮苷的RSD=0.81%。結(jié)果表明供試品10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定養(yǎng)血榮筋丸三批樣品中橙皮苷的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為 5.2、5.3、5.2mg·g-1。

討論

本實(shí)驗(yàn)表明此方法可用于養(yǎng)血榮筋丸中橙皮苷的含量測定。養(yǎng)血榮筋丸中橙皮苷的含量為每克不低于5.2mg.

[1]袁丹,王青,王啟隆,謝媛媛,潘英妮,畢開順;枳實(shí)及其提取物質(zhì)量評價(jià)法的研究[J];中國藥學(xué)雜志;2005，15.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].北京：二部，化學(xué)工業(yè)出版社，2010.