不同產地西紅花開花與有效成分含量研究

徐象華，施林妹，朱 波，潘永年

(1.浙江省麗水市農業(yè)科學研究院，浙江 麗水 323000;2.麗水職業(yè)技術學院，浙江 麗水 323000)

西紅花 (Crocus sativus L.)系鳶尾科番紅花屬植物，花柱上部及柱頭入藥，被稱為植物黃金，具有活血化瘀，涼血解毒，解郁安神等功效［1-3］。目前西紅花栽培品系混雜、品質差、產量低，篩選品質好、產量高的優(yōu)良適栽品系意義重大。本試驗旨在研究產地對西紅花有效成分與開花的影響，以期為優(yōu)良品系篩選提供依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料與儀器

2011年7月收集青田、建德、海門、南匯4個產地西紅花資源，精心挑選種球，剔除小種球(＜15 g)與病害種球。試驗設在麗水市蓮都區(qū)百果園試驗基地。

試驗儀器與試劑:Waters1525高效液相色譜儀(美國Waters公司)，SWB5200型超聲清洗機 (上海必能信超聲有限公司)，Milli-QAcademic超純水儀 (美國 Millipore公司)，FA1104分析天平 (上海天平儀器廠)。對照品購于國藥集團化學試劑有限公司，水為去離子水，其他試劑為分析純。

1.2 觀察方法

1.2.1 立地條件觀察

調查蓮都百果園、遂昌云峰與縉云南弄3個基地立地條件，包括海拔高度、經緯度、年平均溫度等，觀察記錄3個基地西紅花種球出芽與開花情況。

1.2.2 開花情況與花朵性狀觀察

統(tǒng)計上架種球個數，稱量上架種球總重量，觀察4個產地西紅花種球開花情況，統(tǒng)計每天開花數，稱量花朵總鮮重與柱頭總干重，計算折干率(柱頭總干重/花朵總鮮重)。

1.3 西紅花苷含量測定

1.3.1 色譜條件

色譜柱 Agligent eclipse XDB-C18(5 μm，4.6 m×150 mm)，流動相為甲醇∶水 (48∶52)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長440 nm，柱溫30℃，進樣量 10 μL。

1.3.2 對照品溶液的制備

精密稱取對照品西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ，置于25 mL棕色容量瓶中，用乙醇溶解并稀釋至刻度，得濃度為0.312 mg·mL-1西紅花苷Ⅰ和0.158 mg·mL-1西紅花苷Ⅱ對照品溶液。

1.3.3 供試品溶液的制備

取本品粉末約10 mg，置25 mL棕色容量瓶中，加乙醇適量，超聲處理30 min，放至室溫，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，經0.45 μm微孔膜濾過備用。

1.3.4 標準曲線與線性關系

取西紅花苷Ⅰ (0.312 mg·mL-1)和西紅花苷Ⅱ (0.158 mg·mL-1)的混合對照品溶液，移取0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL置于10 mL棕色容量瓶中，加乙醇稀釋，在1.3.1色譜條件下測定。分別以西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ對照品溶液的質量濃度為縱坐標Y，峰面積為橫坐標X繪制標準曲線。求得西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ線性范圍分別為 3.118 ～31.178 μg·mL-1及 1.579 ～15.792 μg·mL-1，回歸方程及相關系數分別為 Y=0.016 1X+0.314 4，R2=0.999 8;Y=0.011 2X+0.193 9，R2=0.999 5。1.3.5 精密度試驗

取同一標準品，在1.3.1節(jié)色譜條件下連續(xù)進樣5次，測得西紅花苷Ⅰ的色譜峰面積RSD=0.38%，西紅花苷Ⅱ的色譜峰面積RSD=1.06%，表明儀器精密度良好。

1.3.6 重復性試驗

取同一樣品5份，按1.3.3節(jié)供試品的制備操作，1.3.1節(jié)的色譜條件測定含量。西紅花苷Ⅰ的平均RSD為2.19%，西紅花苷Ⅱ的平均RSD為3.98%。

1.3.7 穩(wěn)定性試驗

取某樣品制備供試品溶液，置于室溫避光保存，分別于 0，1，2，4，6，8，12，24 h進樣，測定峰面積，計算得西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ峰面積的RSD(n=8)分別為1.61%和1.60%，表明供試品溶液室溫保存24 h內穩(wěn)定。

1.3.8 加樣回收率試驗

取某已知含量樣品9份，各5 mg，精密稱定，分低、中、高3組，每組3個，分別加入西紅花苷Ⅰ (0.312 mg·mL-1)和西紅花苷Ⅱ (0.158 mg·mL-1)的混合對照品溶液1.07，1.39，1.64 mL，按照1.3.3節(jié)供試品的制備操作，制成所需溶液;依照1.3.1節(jié)的色譜條件，進樣測定，計算回收率。結果西紅花苷Ⅰ的平均回收率為101.4%，RSD為1.41%，西紅花苷Ⅱ的平均回收率為96.6%，RSD為0.90%。

2 結果與分析

2.1 立地條件對西紅花出芽與開花的影響

溫度是影響植物生長與開花的主導因素，試驗地的緯度與海拔對溫度影響最大［4］。西紅花性喜氣候溫和、空氣濕潤、光照充足環(huán)境條件，開花適溫16～20℃［5］。高海拔地區(qū)種球大田生長期長，種球養(yǎng)分更充足，有利于提高笠年新種球產量。從開花角度看，貯藏期所選基地應盡量位于中高海拔地區(qū)。

影響開花因素主要是海拔，海拔越高，溫度越低，開花時間越早。3個試驗地中，縉云南弄基地海拔最高，夏季室內最高溫度僅為26℃，西紅花出芽與開花時間最早，分別在8月30日與10月5日;蓮都與遂昌基地西紅花出芽與開花時間稍慢，較縉云基地晚約15 d，西紅花出芽時間與開花時間規(guī)律大體一致，出芽35～40 d后花朵陸續(xù)開放(表 1)。

2.2 不同產地對西紅花開花的影響

西紅花在浙江生長至10月下旬開始開花，初花期延續(xù)到11月上旬，11月中下旬陸續(xù)進入盛花期。4個不同產地的西紅花開花時間不盡相同 (表2)。

表1 不同立地條件與西紅花出芽開花的關系

表2 不同產地西紅花開放時間和開花數量

由表2可知，4個產地中，青田與建德西紅花開花時間最早，分別在10月23日與10月24日就有花朵開放，海門與南匯西紅花開花稍晚，最早開花時間在10月30日。

高溫影響西紅花開放，容易導致花朵萎縮，11月5-6日溫度均在23℃以上，導致11月5-9日期間，花朵出現較多萎蔫，高溫不僅影響當天花朵開放，對后幾日開花亦造成嚴重影響，是導致花朵萎蔫的主要因素?；ǘ湮栌绊懳骷t花有效成分含量［6-7］，增加了日后采摘工作量，浙產西紅花在進入11月初花期后，室內溫度必須控制在20℃以下，直至所有花朵完全開放。

2.3 不同產地西紅花性狀比較

不同產地西紅花開花性狀存在差異 (表3)。建德西紅花種球平均重量、開花總數、花朵總鮮重、柱頭總干重與單位種球開花數均最高，分別為28.9 g，4 099朵，180.4 g，37.30 g與 157.6朵，南匯種球折干率與單位種球柱頭干重數值最高，折干率達22.3%，單位種球柱頭干重為1.50 g，海門種球開花性狀表現一般，青田種球開花性狀表

表3 不同產地西紅花開花性狀比較

現最差，折干率僅為19.1%，單位種球柱頭干重僅為0.72 g。

2.4 不同產地西紅花總苷含量測定

2.4.1 樣品含量測定

取11批不同產地的西紅花樣品22份各10 mg，每批2份，分別按照1.3.3節(jié)供試品的制備操作，制成供試品溶液，依照1.3.1節(jié)的色譜條件進行HPLC分析，按照外標法以峰面積計算，含量測定結果見表4。

表4 不同產地西紅花有效成分含量比較

2.4.2 不同產地西紅花有效成分含量比較

浙產西紅花有效成分含量均滿足藥典要求［1］，平均總西紅花苷含量為15.247%，不同產地西紅花西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ與總苷含量均存在極顯著差異 (P＜0.01)(表4)。海門西紅花西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ與總苷含量均最高，分別為13.314%，4.139%與17.453%，總苷含量是其他產地西紅花的1.11～1.27倍。建德西紅花有效成分含量最低，總苷含量僅為13.716%。從有效成分含量看，浙產西紅花有效成分含量高，滿足藥典西紅花總苷含量不得少于10.0%的要求，為進一步篩選適栽品系奠定了基礎。

3 小結與討論

高溫顯著影響西紅花開花，持續(xù)高溫易導致西紅花花朵萎蔫，影響有效成分積累，增加人工采摘成本。浙江產西紅花在10月底進入初花期后，貯藏室溫度需控制在20℃以下。選擇中高海拔地區(qū)貯藏西紅花種球，能適當提早西紅花開花，減少高溫襲擾，提早移栽大田，延長種球大田生長期。

產地顯著影響西紅花開花時間與花朵性狀。建德產西紅花開花時間早，開花數多，柱頭產量高，綜合性狀表現良好。浙產西紅花總西紅花苷成分較高，滿足藥典西紅花總苷含量不得少于10.0%的要求，為良種選育與推廣提供了依據。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (第一部) ［M］.北京:化學工業(yè)出版社，2010:120-121.

［2］ 劉紹華，黃世杰，胡志忠，等.藏紅花揮發(fā)油的GC-MS分析及其在卷煙中的應用 ［J］.中草藥，2010，41(11):1790-1792.

［3］ 車建，唐琳，劉彥君，等.ITS序列鑒定西紅花與其易混中藥材 ［J］.中國中藥雜志，2007，32(8):668-671.

［4］ 馮學民，蔡德利.土壤溫度與氣溫及緯度和海拔關系的研究 ［J］.土壤學報，2004，41(3):489-491.

［5］ 周珠揚，強小林，朱磊，等.西紅花人工栽培與種球繁育技術 ［J］.西藏科技，2011(2):25-27.

［6］ 蘭衛(wèi)，陶寧.新疆產西紅花的質量評價 ［J］.中草藥，2012，43(2):380-38.

［7］ 上海華宇藥業(yè)有限公司.西紅花種植方法:中國，200410025470.X［P］.2004-06-25.