Tenascin－C在人原發(fā)性肝細(xì)胞癌浸潤、轉(zhuǎn)移和血管生成中的作用＊

尹傳昌， 廖曉峰， 陳 雯， 郭躍清， 易繼林， 李興?！?/p>

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院 1 普外科，2 婦產(chǎn)科，武漢 430030

腫瘤組織中細(xì)胞外基質(zhì)是一種由膠原蛋白、糖蛋白和蛋白多糖構(gòu)建成的復(fù)雜小梁結(jié)構(gòu)。該結(jié)構(gòu)參與細(xì)胞間相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附、增殖和分化［1］。腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的相互作用對(duì)于腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移起著很重要的作用。Tenascin（TN）是細(xì)胞外基質(zhì)中具有獨(dú)特六臂體結(jié)構(gòu)的高分子糖蛋白［2－3］，共有3種異構(gòu)分子，主要由幼稚時(shí)期的成纖維細(xì)胞合成［4－5］。研究表明Tenascin－C是細(xì)胞外基質(zhì)中調(diào)節(jié)上皮和間質(zhì)組織生長的重要成分［6］。盡管Tenascin－C在正常組織中表達(dá)很低，但在人體惡性實(shí)性腫瘤中，如乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌和黑色素瘤中均呈高表達(dá)［7－11］。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明Tenascin－C與腫瘤浸潤相關(guān)，它可促進(jìn)腫瘤血管生長、腫瘤細(xì)胞繁殖以及抑制腫瘤免疫反應(yīng)［12］。原發(fā)性肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是全球最常見惡性腫瘤之一［13］。HCC 血供極為豐富，故新生血管的形成可能對(duì)該類腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移都有很大影響。微血管密度（MVD）是評(píng)估腫瘤新生血管的金指標(biāo)，與各種腫瘤預(yù)后密切相關(guān)［14－16］。HCC 中MVD 越高，其進(jìn)展速度就越快，預(yù)后就越差。MVD也可以作為生物學(xué)標(biāo)記來區(qū)分良惡性肝臟病變［17］。至今為止，人們對(duì)Tenascin－C 在HCC 中的表達(dá)及其相關(guān)作用了解甚微。本研究，我們不僅對(duì)HCC、肝硬化以及正常肝組織中Tenascin－C 的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)評(píng)估，同時(shí)也對(duì)Tenascin－C 表達(dá)與臨床病理指標(biāo)和MVD 相關(guān)性進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，以了解其在HCC浸潤、轉(zhuǎn)移和血管生成中的作用。

1 材料與方法

1.1 患者一般情況

所有病例均來自2000年至2005年武漢市同濟(jì)醫(yī)院普外科HCC手術(shù)患者標(biāo)本。54例HCC患者，其中女性35例，男性19例；平均年齡（44.6±11.6）歲（24～77歲）；其中29例發(fā)生轉(zhuǎn)移；3例合并肝硬化。術(shù)前檢查甲胎蛋白（AFP）陰性患者（＜400μg／mL）19例，陽性患者35例。手術(shù)后，對(duì)54例HCC患者進(jìn)行為時(shí)30個(gè)月的隨訪，收集到46例患者資料，其他8例患者失訪。隨訪期間，46例HCC患者中有37 例（80.4%）死亡。此外，取肝硬化標(biāo)本32例和肝臟外傷標(biāo)本17例作為對(duì)照，其中包括34例男性標(biāo)本和15例女性標(biāo)本，患者平均年齡（43.4±10.4）歲。本研究獲同濟(jì)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 組織標(biāo)本處理

將HCC手術(shù)切除標(biāo)本中一部分儲(chǔ)存于－70℃環(huán)境，備用于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT－PCR）。其余的用10%多聚甲醛溶液固定，再用石蠟包埋待用。對(duì)HCC 標(biāo)本進(jìn)行Edmondson－Steiner標(biāo)準(zhǔn)分期：Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期24例。并記錄標(biāo)本腫瘤大小及有無包膜侵犯。每一個(gè)標(biāo)本組織塊均勻切成4μm 薄片用于蘇木精－伊紅染色。所有的HCC病理診斷均由2位病理學(xué)研究人員獨(dú)自完成。

1.3 Tenascin－C的免疫組織化學(xué)染色

組織切片用二甲苯進(jìn)行脫蠟，水化。切片經(jīng)PBS水浴10min再冷卻20min行修復(fù)抗原，然后浸泡在3%過氧化氫內(nèi)5min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。隨后，加一抗即抗Tenascin－C 小鼠單克隆抗體孵育（NeoMarkers公司，美國）4℃過夜。次日用抗鼠生物素二抗（SP試劑盒，晶美公司）孵育30min，然后與親和素－生物素復(fù)合物（SP 試劑盒，晶美公司）反應(yīng)，并用二氨聯(lián)苯胺四鹽酸鹽（DAB，晶美公司）處理。標(biāo)本玻片通過蘇木精染色，無水乙醇脫水，固定于玻片上。以PBS緩沖液取代一抗作為陰性對(duì)照；用明確診斷的乳腺癌標(biāo)本作為陽性對(duì)照。Tenascin－C陽性產(chǎn)物為細(xì)胞質(zhì)中的棕黃色顆粒，且在細(xì)胞外基質(zhì)中形成微小的、連續(xù)的或不連續(xù)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。隨機(jī)選擇5處陽性區(qū)域進(jìn)行分析。采用HPIAS－1000高精度彩色圖像測(cè)量系統(tǒng)（同濟(jì)強(qiáng)平形象工程公司）測(cè)定吸光度值，以此反映Tenascin－C免疫反應(yīng)表達(dá)量。.

1.4 血管密度分析

用內(nèi)皮細(xì)胞表面分子（CD34）單克隆抗體（Dako公司，丹麥），根據(jù)說明書使用鏈霉素抗生物素－免疫過氧化物酶技術(shù)來進(jìn)行微血管的鑒別。切片脫蠟和水化，用3%過氧化氫處理10min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。用PBS洗滌后，在4℃下一抗孵育過夜備用。在PBS洗滌后，采用二抗（試劑C）和鏈霉素過氧化物酶復(fù)合物進(jìn)一步清洗（試劑A ＋B），各用時(shí)30min。標(biāo)本玻片通過蘇木精染色，無水乙醇脫水，封片。按照Araya等［18］制定的標(biāo)準(zhǔn)來衡量MVD 數(shù)值大小。染為棕色的單細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)，無論是否具備血管腔結(jié)構(gòu)，均稱為微血管。先在100倍光學(xué)顯微鏡下觀察玻片，選擇HCC 脈管最多的區(qū)域，接著在200倍光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)高倍鏡視野下的脈管平均數(shù)記為MVD 值。

1.5 RT－PCR檢測(cè)

依據(jù)說明書用Trizol 試劑（Life Technologies，Grand Island，NY）提取總RNA，通過M－MLV逆轉(zhuǎn)錄酶以及Oligo dT引物（晶美公司）逆轉(zhuǎn)錄為cDNA［19］。取逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物行PCR 擴(kuò)增。Tenascin－C 引物序列為：上游5′－GAGATTTAGCCGTGTCTGAGGTTG－3′；下游5′－AGGAGAGATTGA－AGCTCTCG－3′，擴(kuò)增片段長度為2 237bp；以β－actin為內(nèi)參照，引物序列為：上游5′－CCTTCCTTCCTGGGCATG－3′，下游5′－GAGCAATGATCTTGATCTTC－3′，擴(kuò)增片段長度為287bp。將5μL cDNA 產(chǎn)物混入由PCR 緩沖液5 μL，2.5mmol／L的dNTP 2μL，5U／L Taq DNA 聚合酶0.5μL（晶美公司），以及2 種濃度均為10 μmol／L的引物溶液2μL 組成共計(jì)50μL 的混合物中。PCR反應(yīng)條件如下：預(yù)變性94℃2min，變性94℃30s，60℃30s和72℃60s，共計(jì)35個(gè)循環(huán)，延伸72℃2min。用含有溴化乙啶的2%瓊脂糖凝膠電泳分離PCR產(chǎn)物。以凝膠圖像分析系統(tǒng)計(jì)算電泳條帶的吸光度值，以Tenascin－C／β－actin吸光度比值作為定量分析指標(biāo)。

1.6 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料組間比較采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料組間比較采用t檢驗(yàn)。根據(jù)Kaplan－Meier法分析生存資料。使用Log－rank檢驗(yàn)法衡量生存組間的差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)MVD 和Tenascin－C 的相關(guān)性進(jìn)行線性回歸分析。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Tenascin－C在不同肝組織內(nèi)的表達(dá)情況

免疫組化染色結(jié)果顯示：54例HCC 組織中有34例（約63.0%）Tenascin－C（＋），32例肝硬化組織中有6 例（18.8%）Tenascin－C（＋），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝14.06，P＜0.01）。正常肝組織中除少部分管壁交叉反應(yīng)導(dǎo)致的弱陽性外，尚未發(fā)現(xiàn)Tenascin－C表達(dá)。Tenascin－C在不同肝臟組織內(nèi)的表達(dá)強(qiáng)度具有明顯差異，肝硬化組織內(nèi)Tenascin－C 的表達(dá)強(qiáng)度（149.24±8.25）明顯低于 HCC 組織［（162.15±9.77），t＝2.192，P＜0.05］。HCC 組織內(nèi)Tenascin－C主要位于癌灶細(xì)胞外間質(zhì)，形成灶性褐色的連續(xù)或者不連續(xù)的條索及網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。在HCC的癌巢內(nèi)和基底膜新生微小血管內(nèi)亦可見Tenascin－C（圖1）。Tenascin－C 在癌巢邊緣含量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于癌巢中心的含量［（165.23± 7.25）vs.（156.02±7.95），t＝2.119，P＜0.05］。

圖1 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)HCC和正常肝組織中的Tenascin－C表達(dá)（DAB顯色）Fig.1 Immunohistochemical detection of Tenascin－C in HCC and normal hepatic tissues（DAB staining）

2.2 Tenascin－C mRNA的表達(dá)

圖2為Tenascin－C mRNA 在不同的肝組織內(nèi)表達(dá)情況。HCC內(nèi)Tenascin－C mRNA 含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于肝硬化組織內(nèi)的含量［（0.593±0.110）vs.（0.138±0.089），t＝2.894，P＜0.05］。在正常肝組織中并未檢測(cè)到Tenascin－C表達(dá)。

圖2 RT－PCR檢測(cè)不同肝組織中Tenascin－C mRNA 的表達(dá)Fig.2 Expression of Tenascin－C mRNA detected by using RT－PCR

2.3 Tenascin－C表達(dá)與HCC病理特征的關(guān)系

由表1可見，HCC患者中Tenascin－C表達(dá)有包膜浸潤者明顯高于無浸潤者（P＜0.05），Edmondson－Steiner病理分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)者明顯高于Ⅰ～Ⅱ級(jí)者（P＜0.05）、腫瘤有轉(zhuǎn)移者明顯高于無轉(zhuǎn)移者（P＜0.01），而Tenascin－C表達(dá)在不同腫瘤大小者、AFP是否陽性者以及是否合并肝硬化者之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。隨訪的46例HCC患者平均隨訪時(shí)間為11.5個(gè)月（3～30個(gè)月），隨訪期間Tenascin－C陰性表達(dá)患者比Tenascin－C陽性表達(dá)患者的中位生存時(shí)間長［分別為（22.01±6.95）月vs.（15.08±7.06）月，P＜0.05，log－rank test，圖3］。

表1 Tenascin－C與HCC臨床病理特征之間的關(guān)系Table 1 Correlation of Tenascin－C immunostaning with clinicopathological features in HCC

圖3 隨訪的46例HCC患者的Kaplan－Meier生存曲線Fig.3 Kaplan－Meier survival curves of 46patients with HCC

2.4 MVD以及Tenascin－C的表達(dá)和HCC病理特征的關(guān)系

HCC組織內(nèi)微血管大量出現(xiàn)在癌旁組織，特別在毗鄰的浸潤性腫瘤的邊緣處（圖4）。Tenascin－C表達(dá)與MVD 呈正相關(guān)（r＝0.68，P＜0.05）。MVD 和HCC病理特征的關(guān)系見表2。HCC中腫瘤直徑＞5 cm、有包膜浸潤、Edmondson－Steiner分級(jí)為Ⅲ～Ⅳ、出現(xiàn)轉(zhuǎn)移者，其MVD 均分別大于腫瘤直徑≤5cm、無包膜浸潤、Edmondson－Steiner分級(jí)為Ⅰ～Ⅱ級(jí)及無轉(zhuǎn)移者（均P＜0.05）。而MVD 在AFP是否陽性者以及是否肝硬化者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖4 內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)CD34著色示HCC組織微血管（SP法，×200）Fig.4 Immunohistochemical staining of endothelial cells with CD34in HCC（SP，×200）

表2 MVD與HCC臨床病理特征之間的關(guān)系Table 2 Correlation of MVD with clinicopathological features in HCC

3 討論

一直以來，大家在腫瘤研究中只關(guān)注于腫瘤細(xì)胞的研究，而忽略了細(xì)胞外基質(zhì)的重要性，而基質(zhì)細(xì)胞及其產(chǎn)物在復(fù)雜的腫瘤生物學(xué)級(jí)聯(lián)反應(yīng)中起著重要作用［20］。腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移，不僅取決于腫瘤細(xì)胞本身，而且與細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)相互作用而產(chǎn)生的復(fù)雜改變有關(guān)。腫瘤內(nèi)部及外周的細(xì)胞外基質(zhì)與正常組織的細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)關(guān)鍵分子功能的上調(diào)、下調(diào)影響明顯不同［21］。具有上述調(diào)節(jié)功能的Tenascin－C分子，能夠通過影響細(xì)胞間的相互作用促進(jìn)腫瘤浸潤和生長［22］。盡管已經(jīng)證實(shí)很多腫瘤表達(dá)Tenascin－C［23－25］，但是對(duì)Tenascin－C 在HCC 內(nèi)表達(dá)，及其對(duì)HCC 浸潤、轉(zhuǎn)移和血管生成等的影響了解并不多。

如同其他惡性腫瘤內(nèi)一樣［26－27］，免疫組織化學(xué)和RT－PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示Tenascin－C 在HCC內(nèi)高表達(dá)，而正常組織中未見Tenascin－C 表達(dá)。在胚胎發(fā)育時(shí)期時(shí)常見到Tenascin－C 高表達(dá)，在成熟組織中Tenascin－C表達(dá)很少，但是在惡性腫瘤的基質(zhì)中卻發(fā)現(xiàn)有大量Tenascin－C 表達(dá)。研究表明腫瘤組織中的Tenascin－C由間質(zhì)成纖維細(xì)胞合成，且在局部腫瘤播散和旁分泌作用上起著至關(guān)重要作用［3，28］。進(jìn)一步研究Tenascin－C 和HCC 臨床病理特征之間的聯(lián)系發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)與HCC 病理學(xué)分級(jí)，腫瘤轉(zhuǎn)移和胞膜浸潤之間存在相關(guān)性。進(jìn)展越快的腫瘤，Tenascin－C 的表達(dá)越高。我們觀察到Tenascin－C表達(dá)呈陰性患者較Tenascin－C 表達(dá)呈陽性患者的預(yù)后明顯要好，這提示Tenascin－C 可作為預(yù)測(cè)HCC患者預(yù)后的因素。

在腫瘤中Tenascin－C 的作用仍未得到明確且存在很大爭(zhēng)議。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)表明Tenascin－C 通過增強(qiáng)成纖維細(xì)胞生長因子的有絲分裂效應(yīng)而促使腫瘤細(xì)胞生長。其中，成纖維細(xì)胞生長因子是誘導(dǎo)表皮生長因子增殖的先決條件［22］。體外實(shí)驗(yàn)表明Tenascin－C 能夠抑制T 細(xì)胞活化，推測(cè)Tenascin－C可以促進(jìn)腫瘤誘導(dǎo)的免疫抑制和助腫瘤逃脫T 細(xì)胞作用［29］。然而，其他一些報(bào)道認(rèn)為在腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中Tenascin－C 表達(dá)量增加將阻礙腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和生長［30］。本研究發(fā)現(xiàn)在HCC 癌巢邊緣Tenascin－C表達(dá)較強(qiáng)；癌浸潤處Tenascin－C 較癌巢中心明顯要高。HCC 邊緣高表達(dá)的Tenascin－C 是否能誘發(fā)或抑制HCC生長仍需要進(jìn)一步研究。

血管生成是指原血管長出的新生毛細(xì)血管，其對(duì)于除微小型之外的腫瘤生長至關(guān)重要。HCC 是血供豐富的腫瘤。已經(jīng)證實(shí)血管生成對(duì)于HCC 轉(zhuǎn)移和浸潤具有重要的作用［17］。MVD 目前被認(rèn)為是腫瘤血管生成程度組織學(xué)評(píng)估的金標(biāo)準(zhǔn)。MVD 是一個(gè)預(yù)測(cè)腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和發(fā)展的獨(dú)立指標(biāo)。早先進(jìn)行的一些實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)MVD 與腫瘤大小以及分化程度密切相關(guān)［31－32］。在本研究中發(fā)現(xiàn)MVD 與腫瘤大小和HCC 的Edmondson－Steiner分級(jí)有顯著的關(guān)系。此外，發(fā)現(xiàn)MVD 與HCC轉(zhuǎn)移和包膜侵犯相關(guān)，并且證實(shí)了血管生成對(duì)于HCC 進(jìn)展的重要性。在一些惡性腫瘤中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Tenascin－C 對(duì)其血管生成存在影響［33－34］。本研究發(fā)現(xiàn)在HCC 中存在Tenascin－C 表達(dá)，在癌巢和腫瘤浸潤處存在的MVD 最高。在HCC 中Tenascin－C（＋）區(qū)域微血管數(shù)目明顯增多，這就意味著血管生成和HCC 中Tenascin－C表達(dá)有明顯關(guān)系存在。已經(jīng)有實(shí)驗(yàn)證實(shí)Tenascin－C 能調(diào)節(jié)基質(zhì)中內(nèi)皮生長因子（VEGF）［35－36］。Tanaka等［35］在實(shí)行癌細(xì)胞移植以及共同培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)Tenascin－C 能趨化一些調(diào)節(jié)因子誘導(dǎo)癌細(xì)胞產(chǎn)生VEGF。我們推測(cè)在Tenascin－C表達(dá)和腫瘤血管生成之間存在起著重要調(diào)節(jié)作用的因子，因而需要進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：Tenascin－C 與腫瘤HCC 的浸潤、轉(zhuǎn)移和血管生成密切相關(guān)。Tenascin－C 和MVD 可以作為預(yù)測(cè)HCC 轉(zhuǎn)移和浸潤潛能的生物學(xué)指標(biāo)。

［1］ Slater M.Dynamic interactions of the extracellular matrix［J］.Histol Histopathol，1996，11（1）：175－180.

［2］ Chiquet－Ehrismann R，Mackie E J，Pearson C A，et al.Tenascin：an extracellular matrix protein involved in tissue interactions during fetal development and oncogenesis［J］.Cell，1986，47（1）：131－139.

［3］ Degen M，Brellier F，Schenk S，et al.Tenascin－W，a new marker of cancer stroma，is elevated in sera of colon and breast cancer patients［J］.Int J Cancer，2008，122（11）：2454－2461.

［4］ Erikson H P，Bourdon M A.Tenascin：an extracellular matrix protein prominent in specialized embryonic tissues and tumors［J］.Annu Rev Cell Biol，1989，5：71－92.

［5］ Chiquet M，F(xiàn)ambrough D M.Chick myotendinous antigen：A monoclonal antibody as a marker for tendon and muscle morphogenesis［J］.J Cell Biol，1984，98（6）：1926－1936.

［6］ Moch H，Torhorst J，Dürmüller U，et al.Comparative analysis of the expression of tenascin and established prognostic factors in human breast cancer［J］.Path Res Pract，1993，189（5）：510－514.

［7］ Mackie E J，Chiquet－Ehrismann R，Pearson C A，et al.Tenascin－C is a stromal marker for epithelial malignancy in the mammary gland［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1987，84（5）：4621－4625.

［8］ Ikeda Y，Mori M，Kajiyama K，et al.Immunohistochemical expression of tenascin in normal stomach tissue，gastric carcinomas and gastric carcinoma in lymph nodes［J］.Br J Cancer，1995，72（1）：189－192.

［9］ Soini Y，Paako P，Nuorva K，et al.Tenascin immunoreactivity in lung tumors［J］.Am J Clin Pathol，1993，100（2）：145－150.

［10］ Sakai T，Kawakatsu H，Hirota N，et al.Specific expression of Tenascin in human colonic neoplasms［J］.Br J Cancer，1993，67（5）：1058－1064.

［11］ Natali P G，Nicotra M R，Bigotti A，et al.Expression and production of tenascin in benign and malignant lesions of melanocyte lineage［J］.Int J Cancer，1990，46（4）：586－590.

［12］ Chiquet－Ehrismann R，Chiquet M.Tenascins：Regulation and putative functions during pathological stress［J］.J Pathol，2003，200（4）：488－499.

［13］ Blum H E.Liver cancer［J］.Eur J Gastroenterol Hepatol，2005，17（5）：475－476.

［14］ Poon R T，Ng I O，Lau C，et al.Tumor microvessel density as apredictor of recurrence after resection of hepatocellular carcinoma：aprospective study［J］.J Clin Oncol，2002，20（7）：1775－1785.

［15］ Ng I O，Poon R T，Lee J M，et al.Microvessel density，vascular endothelial growth factor and its receptor Flt1and Flk－1／KDR in hepatocellular carcinoma［J］.Am J Clin Pathol，2001，116（6）：838－845.

［16］ Zheng H C，Sun J M，Li X H，et al.Role of PTEN and MMP－7expression in growth，invasion，metastasis and angiogenesis of gastric carcinoma［J］.Pathol Int，2003，53（10）：659－666.

［17］ Lu J P，Wang J，Wang T，et al.Microvessel density of malignant and benign hepatic lesions and MRI evaluation［J］.World J Gastroenterol，2004，10（12）：1730－1734.

［18］ Araya M，Terashima M，Takagane A，et al.Microvessel count predicts metastasis and prognosis in patients with gastric cancer［J］.J Surg Oncol，1997，65（4）：232－236.

［19］ Katenkamp K，Berndt A，Hindermann W，et al.mRNA ex－pression and protein distribution of the unspliced Tenascin－CC isoform in prostatic adenocarcinoma［J］.J Pathol，2004，203（3）：771－779.

［20］ Koochekpour S，Merzak A，Pilkington G J.Extracellular matrix proteins inhibit proliferation，upregulate migration and induce morphological changes in human glioma cell lines［J］.Eur J Cancer，1995，31A（3）：375－380.

［21］ Ioachim E，Charchanti A，Briasoulis E，et al.Immunohistochemical expression of extracellular matrix components tenascin，fibronectin，collagen type Ⅳand laminin in breast cancer：their prognostic value and role in tumor invasion and progression［J］.Eur J Cancer，2002，38（18）：2362－2370.

［22］ Vollmer G.Biologic and oncologic implications of Tenascin－C／hexabracion proteins［J］.Crit Rev Oncol Hematol，1997，25（3）：187－210.

［23］ Kusagawa H，Onoda K，Namikawa S，et al.Expression and degeneration of Tenascin－C in human lung cancers［J］.Br J Cancer，1998，77（1）：98－102.

［24］ Verstraeten A A，Mackie E J，Hageman P C，et al.Tenascin－C expression in basal cell carcinoma［J］.Br J Dermatol，1992，127（6）：571－574.

［25］ Jahkola T，Toivonen T，von Smitten K，et al.Expression of Tenascin in invasion border of early breast cancer correlates with higher risk of distant metastasis［J］.Int J Cancer，1996，69（6）：445－447.

［26］ Zhao M，Laissue J A，Zimmermann A.Tenascin and type Ⅳcollagen expression in liver cell dysplasia and in hepatocellular carcinoma［J］.Histol Histopathol，1996，11（2）：323－333.

［27］ Pilch H，Schaeffer U，Schlenger K，et al.Expression of Tenascin in human cervical cancer－association of Tenascin expression with clinicopathological parameter［J］.Gynecol Oncol，1999，73（3）：415－421.

［28］ Ekblom P，Aufderheide E.Stimulation of Tenascin expression in mesenchyme by epithelial－mesenchymal interactions［J］.Int J Dev Biol，1989，33（1）：71－79.

［29］ Puente Navazo M D，Valmori D，Ruegg C.The alternatively spliced domain TnFnⅢA1A2of the extracellular matrix protein tenascin－C suppresses activation－induced T lymphocyte proliferation and cytokine production［J］.J Immunol，2001，167（11）：6431－6440.

［30］ Buyukbayram H，Arslan A.Value of tenascin－C content and association with clinicopathological parameters in uterine cervical lesions［J］.Int J Cancer，2002，100（6）：719－722.

［31］ Tanigawa N，Lu C，Mitsui T，et al.Quantitation of sinusoidlike vessels in hepatocellular carcinoma：its clinical and prognostic significance［J］.Hepatology，1997，26（5）：1216－1223.

［32］ Nakashima Y，Nakashima O，Hsia C C，et al.Vascularization of small hepatocellular carcinomas：correlation with differentiation［J］.Liver，1999，19（1）：12－18.

［33］ Ishiwata T，Takahashi K，Shimanuki Y，et al.Serum tenascin－C as a potential predictive marker of angiogenesis in non－small cell lung cancer［J］.Anticancer Res，2005，25（1B）：489－495.

［34］ Behrem S，Zarkovi?K，Eskinja N，et al.Distribution pattern of tenascin－C in glioblastoma：correlation with angiogenesis and tumor cell proliferation［J］.Pathol Oncol Res，2005，11（4）：229－235.

［35］ Tanaka K，Hiraiwa N，Hashimoto H，et al.Tenascin－C regulates angiogenesis in tumor through the regulation of vascular endothelial growth factor expression［J］.Int J Cancer，2004，108（1）：31－40.

［36］ Liu Z，Gao Q，Zhang S，et al.Expression of tenascin and fibronectin in nasal poyps［J］.J Huazhong Univ Sci Technol［Med Sci］，2002，22（4）：371－374.