杭白菊保肝作用研究

康文藝 ，黃 嬛，廉婷婷，許啟泰

1河南大學中藥研究所，開封475004;2 嘉興學院醫(yī)學院，嘉興314001

杭白菊［Dendranthema morifolium (Ramat)Tzvel，DM］是浙江馳名中外的道地藥材，為浙八味之一，其花序為傳統(tǒng)植物學飲料。杭白菊性辛、甘、苦，微寒;歸肺、肝經(jīng)。其主要成分揮發(fā)油、氨基酸、類黃酮及維生素B 等［1］。杭白菊不僅具有很高的營養(yǎng)價值，而且具有很高的藥用功效。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為見《藥典》菊花具有散風清熱、平肝明目的功效，可用于風熱感冒，發(fā)熱頭痛、目赤昏花、眩暈驚風、疔瘡腫毒?，F(xiàn)代醫(yī)學研究證明，杭白菊具有抗菌、抗氧化、清除生物體內(nèi)自由基、降血脂、抗心血管疾病等功能［2，3］。但對杭白菊提取物是否有保肝作用尚未見報道。為了證明杭白菊對肝臟是否有保護作用，我們采用四氯化碳急性肝損傷動物模型，觀察它的保肝降酶作用。

1 實驗材料

1.1 杭白菊樣品

杭白菊9.2 kg 水煎煮提取2 次，每次1 h，過濾，濾液調(diào)整酒精度65%，靜置6 h，離心得到沉淀，上清液調(diào)整酒精度70%，得到沉淀，二者合并，微波真空干燥，得到2. 06 kg，得率22. 4% (B:多糖部分);上清液濃縮后微波真空干燥，得到0.96 kg 得率1.04%(A:乙醇提取物)。

1.2 實驗動物

昆明種系實驗小白鼠，雄性，18～22 g，購于河南省醫(yī)學實驗動物中心。

1.3 主要試劑

谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOP)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)，超氧化物歧化酶(SOD)，丙二醛(MDA)測定試劑盒，均購于南京建成生物工程研究所;四氯化碳分析純(天津市紅巖化學試劑廠，批號:20091208);精制大豆油(市售金龍魚大豆油);實驗樣品(河南大學中藥研究所提供);聯(lián)苯雙酯(浙江萬邦藥業(yè)有限公司，批號:100311)。

1.4 主要儀器

UV-2000 型紫外可見分光光度計(尤尼克上海儀器有限公司);TGL-16 型高速離心機(江蘇金壇市中大儀器廠);AE24 型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

2 實驗方法

2.1 四氯化碳急性肝損傷模型的建立

綜合文獻［4-6］預試采用0.3%四氯化碳油溶液，腹腔注射方法建立急性肝損傷模型。0.3%四氯化碳油溶液要求先用現(xiàn)配，用磁力攪拌器強力攪拌2 h，按照0.1 mL/10 g 體重腹腔注射(ip)。

2.2 分組方法

健康KM 小鼠90 只，全部雄性，隨機分為9 組，分別為空白組、模型組、陽性對照組、杭白菊乙醇提取物高中低組和杭白菊多糖部分高中低組。每天灌胃相應的藥物，連續(xù)8 d，最后一次給藥后2 h 開始造模，禁食不禁水16 h 后，摘眼球取血，分離血清，0～3 ℃保存，測GPT 和GOT?？焖俜蛛x肝臟，制備10%和1%的勻漿液，離心取上清液，0～3 ℃保存，測MDA 和SOD，并用考馬斯亮藍法測定10%和1%組織勻漿液的蛋白含量。

2.3 數(shù)據(jù)處理

GPT、GOT、SOD 和MDA 的測定均按照試劑盒的要求進行，實驗數(shù)據(jù)± s 表示，實驗統(tǒng)計采用spss17.0 統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析。

3 實驗結(jié)果

杭白菊對四氯化碳急性肝損傷小鼠血清GPT和GOT 的影響見表1。由表1 可知，與空白組比較，四氯化碳急性肝損傷小鼠血清GPT 和GOT 的含量均顯著升高，證明造模成功。與模型組對比，乙醇提取物高劑量和多糖部分高劑量能明顯降低四氯化碳致急性肝損傷小鼠血清中GPT 和GOT 的含量。表明杭白菊高劑量對化學性肝損傷有保護作用。

表1 杭白菊提取物對肝損傷小鼠GPT 和GOT 的影響(±s，n=10)Table 1 Effect of D.morifolium on serum GPT and GOT inmice of liver injury (±s，n=10)

表1 杭白菊提取物對肝損傷小鼠GPT 和GOT 的影響(±s，n=10)Table 1 Effect of D.morifolium on serum GPT and GOT inmice of liver injury (±s，n=10)

注:與空白組比較，△△△P ＜0.001;與模型組比較，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01，＊＊＊P ＜0.001。下同。Note:△△△P ＜0.001 vs normal control group;* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01，＊＊＊P ＜0.001 vs liver injury model group.The same as follow.

組別Group 給藥量Dose (mg/kg)GPT(U/L)GOT(U/L)46.2275 ±8.9123 91.9556 ±9.5897模型組 880.4333 ±99.1554△△△ 952.9085 ±71.7397△△△A 高劑量組 600 577.1863 ±49.0927* 559.7265 ±76.5589＊＊＊A 中劑量組 300 632.2302 ±125.5977 679.5601 ±32.5820 A 低劑量組 150 622.7353 ±42.9355 693.8522 ±55.4017 B 高劑量組 600 618.5698 ±86.3813 597.3304 ±32.3903＊＊B 中劑量組 300 652.8191 ±122.5606 687.7121 ±51.0668 B 低劑量組 150 745.0755 ±130.9628 696.9161 ±42.9161聯(lián)苯雙酯 200 485.5809 ±43.4437* 339.8997 ±54.2074空白組＊＊＊

杭白菊對四氯化碳急性肝損傷小鼠血清MDA和SOD 的影響見表2。由表2 可知，與空白組比較，四氯化碳急性肝損傷小鼠血清MDA 顯著升高，SOD含量顯著降低，證明造模成功。與模型組對比，乙醇提取物高劑量能明顯降低四氯化碳致急性肝損傷小鼠血清中MDA 的含量。杭白菊所以提取物都有不同程度升高SOD 的作用。

表2 杭白菊提取物對肝損傷小鼠MDA 和SOD 的影響(±s，n=10)Table 2 Effect of D.morifolium on MDA and SOD in mice of liver injur in mice of liver injury (±s，n=10)

表2 杭白菊提取物對肝損傷小鼠MDA 和SOD 的影響(±s，n=10)Table 2 Effect of D.morifolium on MDA and SOD in mice of liver injur in mice of liver injury (±s，n=10)

組別Group 給藥量Dose (mg/kg)MDA(nmol/mgprot)SOD(nmol/mgprot)空白組0.7967 ±0.2398 339.1580 ±23.9330

模型組 2.0019 ±0.3931△△△ 132.2511 ±22.6864△△△A 高劑量組 600 1.3474 ±0.1768* 260.2039 ±41.1347＊＊＊A 中劑量組 300 1.4007 ±0.6727 257.6148 ±30.9572＊＊A 低劑量組 150 1.7863 ±0.9171 248.3827 ±28.7010*B 高劑量組 600 1.8273 ±0.3614 251.7397 ±14.1180＊＊B 中劑量組 300 1.5476 ±0.1995 254.6248 ±34.4352＊＊B 低劑量組 150 1.8111 ±0.6160 197.6813 ±11.0900*聯(lián)苯雙酯 200 1.1850 ±0.3216* 298.0469 ±16.4663＊＊

4 結(jié)論

肝損傷是由多種病因引起且有多種因素參與的復雜過程。體內(nèi)模型特別是化學性肝損傷模型，在形態(tài)學、病理生理學的某些方面與人慢性肝病較為相似［7］。CCl4引起肝損傷的機制是CCl4在肝微粒體細胞色素P450 激活下生成自由基CCI3·及Cl·，這些自由基可與肝細胞內(nèi)大分子發(fā)生共價結(jié)合，也可攻擊膜下不飽和脂質(zhì)，引起脂質(zhì)過氧化，使肝細胞損傷，細胞質(zhì)內(nèi)GPT、GOT 滲入血液，結(jié)果血清中GPT、GOT 的活性升高［8-10］。SOD 活性及MDA含量常可反映體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應程度，間接反映機體組織、細胞損傷的程度，通過檢測小鼠肝勻漿中的SOD 活性及MDA 含量可反映出藥物對肝細胞的保護作用。因此本實驗以血清GPT、GOT、肝組織SOD 活性及MDA 含量作為指標，探討杭白菊提取物的肝損傷的保護作用。給予杭白菊上清液高劑量和沉淀物高劑量后，CCl4所致小鼠血清GPT、GOT的升高可明顯降低。

本實驗觀察了杭白菊乙醇提取物和多糖部分對CCl4誘發(fā)的小鼠肝損傷的作用。杭白菊乙醇提取物和多糖部分高劑量組血清GPT、GOT 水平明顯降低。說明杭白菊乙醇提取物和多糖部分高劑量組對CCl4所致小白鼠肝損傷具有一定的保護作用，能特異性地降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量，減輕肝細胞損傷。杭白菊乙醇提取物高劑量組能顯著降低CC14所致急性肝損傷小鼠肝組織MDA 含量升高，提高肝組織SOD 活性，提示杭白菊對肝細胞的保護是通過抗自由基，抑制脂質(zhì)過氧化發(fā)揮作用的。

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