低溫環(huán)境對(duì)兔急性心肌缺血時(shí)血漿冷凝蛋白水平的影響*

李 江，邵同先，趙明蕊，趙汴霞，呂豐收，王書(shū)偉，李志強(qiáng)，李學(xué)玲，張?zhí)K亞

河南職工醫(yī)學(xué)院內(nèi)科學(xué)教研室 鄭州451191

#通訊作者，男，1956年12月生，本科，教授，研究方向:低溫環(huán)境對(duì)心肌缺血和心律失常的影響，E-mail:txshao@sina.com

環(huán)境溫度是一種基本的生態(tài)因素。人和哺乳動(dòng)物的適宜環(huán)境溫度為10～35℃，對(duì)代謝無(wú)明顯影響。當(dāng)環(huán)境溫度低于10℃時(shí)，機(jī)體代謝將出現(xiàn)明顯變化，故將10℃稱為臨界溫度［1］。何子安等［2］研究提出，冷凝蛋白(cold insoluble protein，CIP)是機(jī)體血漿經(jīng)低溫致冷后形成的大分子冷不溶性蛋白，37℃復(fù)溫后仍不溶解。在機(jī)體的血漿中CIP 以較大的顆粒存在，在微小血管中可能會(huì)造成淤積或堵塞，導(dǎo)致微循環(huán)障礙，加劇凍傷組織的病變。該研究中作者采用考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)不同低溫環(huán)境下家兔急性心肌缺血時(shí)心血及外周血CIP 水平，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及儀器 健康家兔112 只，雌雄不拘，體質(zhì)量2.0～2.5 kg，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。TGL-16G 離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，TU-1901 雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

1.2 動(dòng)物分組和處理 采用隨機(jī)數(shù)字表法將112只兔分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。參照韋方等［3］的方法，2組家兔在自然低溫環(huán)境(10℃、5℃、0℃、－5℃)分別暴露30 min 和60 min(每一溫度對(duì)應(yīng)一個(gè)暴露時(shí)間為7 只家兔)，均采用100 g/L 水合氯醛耳緣靜脈麻醉(5 mL/kg)，仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上。備皮，消毒，沿胸骨左緣切口切斷左側(cè)第3～4 肋軟骨，暴露縱隔和心臟。進(jìn)一步縱行切開(kāi)心包，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈左室支中下1/3 處，直視下確定結(jié)扎相應(yīng)供血區(qū)域心肌組織顏色變暗，確定急性心肌缺血模型制備成功。對(duì)照組開(kāi)胸但不阻斷冠脈血流。分別抽取心血和耳緣靜脈血各1 mL 于肝素鈉抗凝試管中。

1.3 CIP 水平測(cè)定 參照何子安等［4］的方法分離CIP 粗品，用生理鹽水反復(fù)洗滌，除去可溶性雜蛋白。用100 g/L 丁醇溶解CIP 后，采用考馬斯亮藍(lán)法，以牛血清白蛋白作標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定595 nm 處的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣品液蛋白濃度。

1.4 CIP 生化性質(zhì)鑒定 采用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行定性反應(yīng)，37℃水浴進(jìn)行溶解實(shí)驗(yàn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.5 處理數(shù)據(jù)。應(yīng)用4×2×2 析因設(shè)計(jì)的方差分析分別比較不同低溫環(huán)境下暴露不同時(shí)間2組家兔心血和外周血中CIP水平的差異，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 低溫環(huán)境下暴露不同時(shí)間2組家兔心血和外周血CIP 水平比較 見(jiàn)表1、2。

表1 低溫環(huán)境下暴露不同時(shí)間2組家兔心血CIP 水平比較(n=7)mg/L

表2 低溫環(huán)境下暴露不同時(shí)間2組家兔外周血CIP 水平比較(n=7)mg/L

2.2 CIP 生化性質(zhì) 將CIP 樣品做考馬斯亮藍(lán)定性反應(yīng)為陽(yáng)性，表明CIP 是蛋白質(zhì);又取CIP 樣品約500 μL 置于2 mL 生理鹽水中，離心后37℃水浴加熱2 h 未見(jiàn)溶解，表明CIP 不溶于水。提示CIP 是一種大分子冷不溶性蛋白。

3 討論

施永德等［5］研究發(fā)現(xiàn)，人血漿中存在著冷季增高、熱季降低的CIP。該研究是在冬季自然低溫狀態(tài)下進(jìn)行的，結(jié)果顯示2組家兔心血和外周血中均有CIP 生成。

孫方人等［6］研究發(fā)現(xiàn)，在低溫狀態(tài)下，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，凍傷大鼠血漿中CIP 水平逐漸增高。該研究結(jié)果顯示，低溫環(huán)境下兩組家兔心血及外周血CIP 水平均隨著環(huán)境溫度下降和時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增高，且實(shí)驗(yàn)組心血及外周血CIP 水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;其中溫度與組別交互作用顯著，溫度與暴露時(shí)間交互作用、暴露時(shí)間與組別交互作用較顯著，而溫度、暴露時(shí)間和組別三因素之間無(wú)交互作用，提示CIP 是一種冷應(yīng)激蛋白，低溫環(huán)境下CIP 的生成增加可能是引起微血管血流淤積和堵塞，導(dǎo)致心肌微循環(huán)障礙、心肌缺血加重的重要因素;心肌缺血在低溫環(huán)境下亦可促進(jìn)CIP 的生成。對(duì)CIP 的理化性質(zhì)及生物學(xué)效應(yīng)有待于進(jìn)一步研究和探討。

［1］邵同先，張?zhí)K亞.低溫醫(yī)學(xué)［M］.呼和浩特:遠(yuǎn)方出版社，2003:7

［2］何子安，孫方人，馬子敏.冷暴露大白鼠血漿中冷凝蛋白的含量測(cè)定及其分離鑒定［J］.解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，1996，14(4):257

［3］韋方，袁明蘭，王樹(shù)輝.冠狀靜脈竇逆行灌注VEGF 蛋白對(duì)兔心肌梗死模型心電圖演變及心律失常的影響［J］.實(shí)用心電學(xué)雜志，2008，17(4):263

［4］何子安.大白鼠血漿中冷凝蛋白的初步分離與生化性質(zhì)的鑒定［C］.第二屆全國(guó)低溫生物學(xué)大會(huì)論文匯編，1992:20

［5］施永德，步燕芳，唐鎮(zhèn)生.血漿冷凝蛋白與季節(jié)、疾病、血液流變學(xué)行為和其他蛋白成分間關(guān)系的研究［J］.生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào)，1989，21(2):134

［6］孫方人，劉嘉瀛，劉友梅，等.低氧條件下凍傷對(duì)大鼠血漿中冷凝蛋白含量的影響［J］.解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，1997，15(2):83