針?biāo)幉⒂脤?duì)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎滑膜IL-1b、IL-8的影響

金澤,張振營(yíng),姜珊珊,趙洪斌,陳靜,王玉琳

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,哈爾濱 150001;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),哈爾濱 150040)

痛風(fēng)是由于長(zhǎng)期嘌呤代謝紊亂及尿酸排泄減少所引起的一組疾病,其主要病理改變是尿酸鈉晶體在關(guān)節(jié)周?chē)M織沉積而引起的急性炎癥反應(yīng)。中醫(yī)針灸治療痛風(fēng)因其療效顯著[1],不良反應(yīng)少而得到廣泛的關(guān)注。在取得較好臨床效果的前提下,我們以自擬痛風(fēng)方配合針刺治療急性痛風(fēng)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察針?biāo)幉⒂弥委煂?duì)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎滑膜組織IL-1b、IL-8含量的影響,進(jìn)一步研究其對(duì)急性痛風(fēng)的抗炎機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3月齡健康雄性 wistar大鼠 96只,體重(250±20)g,清潔級(jí),由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,合格證號(hào)為2008004。

1.1.2 藥品與試劑

自擬痛風(fēng)方(為中藥配方顆粒,由土茯苓、生大黃、威靈仙、秦艽、薏苡仁、忍冬藤、防己、豬苓、蒼術(shù)、茯苓、黃柏等組成)由江陰天江藥業(yè)有限公司提供,用100℃熱水沖開(kāi)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)大鼠藥用劑量公式[2]計(jì)算出中藥制成濃度為0.2 g/mL的溶液,秋水仙堿制成濃度為0.1 mg/mL,兩者封瓶后置于冰箱中保存?zhèn)溆?。大鼠IL-1b、IL-8試劑盒由北京邦定生物制劑公司提供,秋水仙堿由西雙版納有限公司生產(chǎn)(批號(hào) 110217),尿酸鈉晶體購(gòu)于北京化學(xué)試劑公司,SIGMA CHEMICAL CO.(5gu- 2875 LotBCBF1330V)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 造模

痛風(fēng)動(dòng)物模型制作方法按國(guó)外Coderre等[3-4]經(jīng)典方法略作改進(jìn),將大鼠膝關(guān)節(jié)周?chē)撁?消毒皮膚,輕彎曲膝關(guān)節(jié),于關(guān)節(jié)正中垂直進(jìn)針,至針尖有落空感,用6號(hào)注射器將0.2 mL(濃度2.5 g/100 mL)尿酸鈉溶液,通過(guò)髕上韌帶注入到關(guān)節(jié)腔內(nèi)形成痛風(fēng)模型。

1.2.2 尿酸鈉結(jié)晶及尿酸鈉溶液的制備

取 1250 mg尿酸鈉結(jié)晶加 45 mL生理鹽水,再加5 mL吐溫80,加熱攪拌,配成50 mL尿酸鈉溶液。

1.2.3 分組及處理

將96只大鼠按照上述造模方法造模,并隨機(jī)分成空白組、模型組、治療組、對(duì)照組,每組24只,各組根據(jù)取材時(shí)間1 d、3 d、5 d隨機(jī)分成3組,并分別給予以下相應(yīng)處理?？瞻捉M不造模,不用藥,不施針,其余方法相同。模型組于造模后3 h予2 mL生理鹽水灌胃,不施針,余相同。對(duì)照組于造模后3 h予秋水仙堿懸浮液(0.2 g/mL)2 mL灌胃,每日1次,連續(xù)5 d,余相同。治療組于造模后 3 h予自擬痛風(fēng)方中藥懸浮液(0.2 g/mL)2 mL灌胃,每日1次,連續(xù)5 d;應(yīng)用從陽(yáng)引陰針?lè)ㄟx取足三里、陰陵泉進(jìn)行針刺,取穴參照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位圖譜》,用0.25 mm×25 mm毫針進(jìn)行針刺,針刺后接華佗牌 SDZ-Ⅱ電針儀,采用疏密波,每日1次,每次20 min,連續(xù)治療5 d,余相同。

1.3 觀察指標(biāo)

分別于造模后1、3、5 d后處死,檢測(cè)關(guān)節(jié)滑膜組織 IL-1b、IL-8含量變化。取滑膜組織,稱(chēng)取 20 mg加組織提取液(試劑盒提供),電動(dòng)勻漿,3000 rpm,15 min,按酶聯(lián)免疫法測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。采用單因索方差分析,組間比較選用LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

表1 各組治療前后關(guān)節(jié)滑膜組織IL-1b、IL-8含量比較(±s,ng/mL)

表1 各組治療前后關(guān)節(jié)滑膜組織IL-1b、IL-8含量比較(±s,ng/mL)

注:與空白組比較1)P＜0.05;與模型組比較2)P＜0.01,3)P＜0.05

組別 n 時(shí)間 IL-1b IL-8空白組 8造模后1 d 0.10±0.03 0.14±0.04造模后3 d 0.09±0.02 0.13±0.03造模后5 d 0.09±0.03 0.13±0.03模型組 8造模后1 d 0.26±0.041) 0.28±0.031)造模后3 d 0.25±0.041) 0.28±0.061)造模后5 d 0.22±0.041) 0.26±0.051)治療組 8造模后1 d 0.22±0.041)3) 0.24±0.031)2)造模后3 d 0.19±0.031)2) 0.22±0.041)2)造模后5 d 0.15±0.041)2) 0.17±0.041)2)對(duì)照組 8造模后1 d 0.21±0.041)3) 0.23±0.021)2)造模后3 d 0.18±0.031)2) 0.21±0.081)2)造模后5 d 0.15±0.041)2) 0.18±0.041)2)

模型組、治療組和對(duì)照組造模后關(guān)節(jié)滑膜組織IL-1b、IL-8含量與空白組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療組和對(duì)照組治療后關(guān)節(jié)滑膜組織IL-1b、IL-8含量與模型組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01,P＜0.05)。詳見(jiàn)表1。

3 討論

痛風(fēng)是由于長(zhǎng)期嘌呤代謝紊亂及尿酸排泄減少所引起的一組疾病。臨床和實(shí)驗(yàn)均證實(shí),尿酸鈉結(jié)晶在滑膜組織沉積并脫落是引起急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的病理基礎(chǔ),IL-1b、IL-8、TNF-a等參與炎癥過(guò)程。IL-1b、IL-8、TNF-a作為炎癥趨化因子和激活因子在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用。有文獻(xiàn)認(rèn)為IL-1b、TNF-a是前炎癥網(wǎng)鏈中的一級(jí)細(xì)胞因子,而 IL-8是由IL-1b、TNF-a誘導(dǎo)的二級(jí)炎癥細(xì)胞因子[5]。IL-1b作為炎癥趨化因子和激活因子在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[6]。IL-8的主要生物學(xué)活性是吸引和激活中性粒細(xì)胞,中性粒細(xì)胞與IL-8接觸后發(fā)生形態(tài)變化,定向游走到反應(yīng)部位并釋放一系列活性產(chǎn)物;這些作用可導(dǎo)致機(jī)體局部的炎癥反應(yīng),達(dá)到殺菌和修復(fù)細(xì)胞損傷的作用。所以本實(shí)驗(yàn)我們選取IL-1b、IL-8觀測(cè)針?biāo)幗Y(jié)合干預(yù)治療的抗炎療效。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為痛風(fēng)屬“痹證”范疇,病機(jī)是嗜食厚味,以致濕熱內(nèi)蘊(yùn),又兼外感風(fēng)寒,侵襲經(jīng)絡(luò),以致氣血津液運(yùn)行受阻,遂使煎熬成痰,痰凝絡(luò)道,致關(guān)節(jié)紅腫灼痛,故得此病。自擬痛風(fēng)方中用威靈仙、秦艽、防己祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛,蒼術(shù)、黃柏取二妙散清熱燥濕之意,豬苓、茯苓、薏苡仁以健脾利濕去濁,輔以土茯苓、忍冬藤以解毒除濕,并用生大黃瀉熱逐瘀,以上述諸藥共奏清熱、祛風(fēng)、除濕、消腫之功效。并配合透刺針?lè)ㄖ小皬年?yáng)引陰”針?lè)ㄒ曰钛⑼ńj(luò)、止痛。本實(shí)驗(yàn)證實(shí),運(yùn)用針?biāo)幉⒂弥委熆梢悦黠@降低 IL-1b、IL-8含量,與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異,說(shuō)明本治療方法具有顯著抗炎效果。

[1] Zhang QC, Huang QL. Clinical observation on treatment of acute gouty arthritis with acupuncture: a report of 60 cases[J]. J Acupunct Tuina Sci, 2004,2(3):32-33.

[2] 陳洪巖,夏長(zhǎng)友.簡(jiǎn)明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)[M].哈爾濱:哈爾濱出版社,2002:216.

[3] Coderre TJ, Wall PD. Ankle joint urate arthritis in rat: an alternative animal model of arthritis to that produced by freund’s adjuvant[J].Pain, 1987,28(3):379-393.

[4] Coderre TJ, Wall PD. Ankle joint arthritis in ratsprovide a useful tool for the evaluation of analgesis and anti-arthritis agents[J]. Pham Biochern Behav, 1988,29(3):461-466.

[5] Shrestha M, Chiu MJ, Martin RI,et a1. Treatment of acute gouty arthritis with intramuscular ketoralac tromethamine[J]. Am J Emerg Med, 1994,12(4):454-455.

[6] 王秋琴.痛風(fēng)證治探討[J].中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志,1999,7(4):52.