提高細(xì)胞學(xué)標(biāo)本陽性檢出率的制片技術(shù)探討

田玉旺 朱紅艷 邢 宜 朱培雙 李紅霞

提高細(xì)胞學(xué)標(biāo)本陽性檢出率的制片技術(shù)探討

田玉旺 朱紅艷 邢 宜 朱培雙 李紅霞

（北京軍區(qū)總醫(yī)院病理科，北京100700）

細(xì)胞學(xué)標(biāo)本；陽性檢出率；制片技術(shù)；探討

細(xì)胞學(xué)檢查以其簡便、快速、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)勢，對腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)發(fā)揮著重要的作用。細(xì)胞學(xué)的正確診斷對指導(dǎo)臨床診斷及治療也起到?jīng)Q定性作用。細(xì)胞學(xué)標(biāo)本包括痰、尿、胸腹水、婦科標(biāo)本等。高質(zhì)量的細(xì)胞學(xué)涂片及染色是獲得準(zhǔn)確診斷的重要環(huán)節(jié)。多數(shù)細(xì)胞學(xué)的漏診與誤診始于低劣的制片和染色技術(shù)。重視細(xì)胞學(xué)的制作質(zhì)量無疑是提高細(xì)胞學(xué)陽性檢出率的重要保證。

材料和方法

1.材料選取我院2010年10月至2011年10月臨床送檢的各種細(xì)胞學(xué)標(biāo)本。包括痰125例、胸腹水55例、尿50例及婦科標(biāo)本238例。

2.儀器液基薄層制片系統(tǒng)由震蕩儀，Shandon Cytospin4離心制片機(jī)和Shandon專用制片盒組成，購于北京弘泰嘉業(yè)科技發(fā)展有限公司。

3.試劑

3.1 涂片固定液的配制95%酒精100 ml＋冰醋酸1 ml混合液。

3.2 痰液溶解劑的配制 N-乙酰-L-半胱氨酸10g＋無水酒精50 ml＋蒸餾水50 ml。

3.3 溶血?jiǎng)┑呐渲?0 ml無水酒精＋50 ml蒸餾水。

3.4 宮頸細(xì)胞保存液購于北京弘泰嘉業(yè)科技發(fā)展有限公司。

4.方法

制片方法包括手工涂片和液基制片技術(shù)；染色方法包括HE染色和巴氏染色。

4.1 胸腹水、尿液手工制片方法

將臨床送檢的體液標(biāo)本上半部輕輕倒掉，保留底部沉淀物20 ml，搖均后注入50 ml錐形離心管中，平衡后，2000轉(zhuǎn)／分，離心5-10 min。若體液標(biāo)本含血量較多，需加入適量溶血?jiǎng)┖笤龠M(jìn)行離心。離心后將上清液吸出棄掉，留少許上清液與離心管底部的沉淀物混勻，采用推片涂片法進(jìn)行制片。涂片微干后，進(jìn)行固定，染色，脫水，透明，封片。

4.2 痰標(biāo)本和宮頸標(biāo)本的液基細(xì)胞學(xué)制片方法

4.2.1 痰標(biāo)本制片方法

用眼科鑷子挑取灰白色帶血絲樣病變痰標(biāo)本2-4 ml，置于盛有4-8毫升痰液溶解劑的錐形離心管內(nèi)，充分振蕩10-20min，對痰液標(biāo)本進(jìn)行消化處理，然后取出處理后的痰液0.5-4 ml，放入專用的制片盒中，同時(shí)在每個(gè)制片盒內(nèi)各放一張載玻片，然后將制片盒放入離心制片機(jī)內(nèi)，2250轉(zhuǎn)／分，離心5min，取出載玻片，待涂片微干后，固定，染色，脫水，透明，封片。

4.2.2 宮頸標(biāo)本制片方法

婦科取材后的宮頸細(xì)胞刷直接放入盛有宮頸細(xì)胞保存液的瓶中，充分振蕩10-20 min，混勻后，取出0.5-4 ml，放入專用的制片盒中，同時(shí)在每個(gè)制片盒內(nèi)各放一張載玻片，然后將制片盒放入離心制片機(jī)內(nèi)，2250轉(zhuǎn)／分，離心5 min，取出載玻片，待涂片微干后，固定，染色，脫水，透明，封片。

結(jié) 果

在胸腹水和尿標(biāo)本手工制片及痰和宮頸標(biāo)本液基制片過程中，注意文中所述細(xì)節(jié)后，制片質(zhì)量明顯提高。各種細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示清晰，核漿對比分明。血性胸水標(biāo)本，經(jīng)溶血?jiǎng)┨幚砗螅尘拜^干凈，癌細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示清楚（圖1）；痰標(biāo)本：經(jīng)痰液溶解劑處理后，背景較干凈，癌細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示清晰（圖2）。

討 論

根據(jù)多年的工作經(jīng)驗(yàn)，細(xì)胞學(xué)標(biāo)本在制片過程中，注意以下細(xì)節(jié)能夠顯著提高細(xì)胞學(xué)的陽性檢出率。

1.標(biāo)本取材的質(zhì)量決定診斷的準(zhǔn)確性

脫落細(xì)胞是指正?；虿±砬闆r下，自然脫落下的細(xì)胞，隨分泌物、排泄物排出體外。惡性腫瘤的組織細(xì)胞之間粘合力下降，加上常有出血壞死等情況，致使腫瘤細(xì)胞更易脫落。這是脫落細(xì)胞學(xué)用以臨床診斷的理論依據(jù)。

細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的正確采集是細(xì)胞學(xué)診斷的先決條件，是后續(xù)工作的基礎(chǔ)。只有采集到合格的標(biāo)本，才能做出可靠的細(xì)胞學(xué)病理診斷。

1.1 痰液細(xì)胞學(xué)標(biāo)本

痰液采集通常采用自然咳痰法。囑咐病人早晨咳痰前，應(yīng)用清水先漱口、刷牙，以避免食物殘?jiān)图?xì)菌的污染。務(wù)必要從肺部深處用力咳出痰液。方法：指導(dǎo)病人做幾次深呼吸后，用力咳痰。若開始無痰或少痰，可反復(fù)咳痰4-5次，直到咳出肺深部的痰液。關(guān)于留痰時(shí)間多主張留晨痰，因?yàn)榛颊呓?jīng)一夜睡眠后，異常分泌物常積聚在呼吸道內(nèi)，細(xì)胞來源較廣泛。但晨痰有如下缺陷：①晨痰在體內(nèi)停留時(shí)間較長，細(xì)胞往往發(fā)生不同程度的退變，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，影響診斷。②老年人尤其是慢性咽炎、鼻咽炎的人，清晨的頭幾口痰往往是上呼吸道的分泌物，使診斷的準(zhǔn)確性降低。因此，我們認(rèn)為晨痰并非最佳的檢材。如患者痰量較多或留痰并不困難的病例，我們主張最好在早晨排痰以后，留取上午8-9時(shí)的新鮮痰比較適宜。此痰細(xì)胞退變較少，利于細(xì)胞學(xué)檢查。某些患者很少或沒有自然排痰，囑咐患者叩擊患側(cè)胸背部，深呼吸，用力咳新鮮痰，或可采用高滲鹽水薄荷霧化吸入法促進(jìn)排痰，由于高滲鹽水稀釋痰液，薄荷引起刺激性咳嗽，使無痰者有痰，另外劇烈咳嗽病變部癌細(xì)胞有機(jī)會隨痰咳出。

1.1.1 痰液是從各支氣管所匯集的分泌物，其中包括從病變處來源的痰液。病變處痰液有特有的形狀，應(yīng)仔細(xì)挑選。若痰內(nèi)混有大量的食物殘?jiān)蛲僖旱臉?biāo)本，呈口水樣應(yīng)立即通知臨床及患者，建議重新采集。從肺部咳出的痰液一般是粘稠的，或有黏液絲。痰的性狀一般分為5種①粘液痰：多見于慢性支氣管炎的緩解期、支氣管哮喘或肺癌病例。痰液透明、無色、粘稠，用鑷子可牽拉成很長的細(xì)絲。如果其中有乳白色的顆粒狀物，往往提示有肺癌的可能，盡量取這部分痰液做涂片檢查。②黏液膿性痰：是在黏液痰的基礎(chǔ)上混有一部分膿液。必須仔細(xì)挑選粘液絲的部分做檢查，以提高癌細(xì)胞的檢出率。③膿性痰：為黃色或黃綠色的黏液，因細(xì)菌種類的不同，痰的粘稠度和顏色可有不同。常見于氣管、支氣管和肺化膿性感染。其中有大量中性粒細(xì)胞和核碎片。對這種痰最好經(jīng)抗感染治療后再送檢。④泡沫痰：即痰呈泡沫狀，除去泡沫后，取其中的粘液絲做涂片檢查。⑤血絲痰：即痰內(nèi)帶有少量的血液，是支氣管粘膜某個(gè)局部小血管破裂出血或肺泡內(nèi)出血所致。常見于肺癌或支氣管結(jié)核，有時(shí)也見于支氣管炎。為了明確出血的原因，應(yīng)將帶血絲的及其附近部分的痰全部制成涂片，進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。

1.1.2 痰液直接吐入痰盒或塑料杯內(nèi)，容器不得污染。采痰時(shí)應(yīng)采用內(nèi)面涂蠟的痰盒，可防止痰液被吸收而難于挑痰制片。

1.1.3 痰標(biāo)本應(yīng)盡快涂片，室溫下可以保存2-4小時(shí)，冰箱內(nèi)可保存2天。痰液量一般以2-3口痰為宜。

1.1.4 痰液細(xì)胞學(xué)檢查建議應(yīng)連送3次以上，這樣可明顯提高痰檢陽性率。

1.1.5 支氣管鏡活檢后痰檢法可明顯提高痰檢陽性率，其原因是由于支氣管原來被腫物阻塞，活檢后可能再通，脫落癌細(xì)胞也可隨痰咳出；二是活檢后腫瘤粘膜為一創(chuàng)面，癌細(xì)胞脫落機(jī)會較多，可隨痰排出。

1.2 尿液細(xì)胞學(xué)標(biāo)本

由于尿液往往量較大，而且稀薄，不含蛋白，細(xì)胞成分較少等原因，制片過程中容易發(fā)生細(xì)胞丟失或得不到有診斷意義的成分。為此，標(biāo)本的采集及細(xì)胞收集方法是尿細(xì)胞學(xué)最關(guān)鍵的步驟。標(biāo)本采集方法：①一般常規(guī)留尿，留取一次新鮮全尿即可。留尿前患者可適當(dāng)活動，留尿后即時(shí)送檢。②運(yùn)用叩擊腎區(qū)，按摩膀胱，按摩前列腺等處后留取全尿，促使瘤細(xì)胞脫落。③膀胱沖洗及輸尿管導(dǎo)尿和腎盂導(dǎo)尿，留尿后即時(shí)送檢，要特別注意分清左右側(cè)，分別離心制片，千萬不可混淆。女性病人應(yīng)避免陰道分泌物的污染，最好導(dǎo)尿，或者留取中段或后段尿送檢。

1.2.1 尿液標(biāo)本檢查以非晨尿的中段尿?yàn)榧?，晨尿中的上皮?xì)胞因在體內(nèi)停留時(shí)間較長容易退變。

1.2.2 尿液標(biāo)本要新鮮。采集后應(yīng)立即送檢，一般勿超過2小時(shí)，4℃冰箱可保留48h。標(biāo)本中加入適量10%福爾馬林或50%酒精作為防腐劑，可延長數(shù)小時(shí)到數(shù)天。

1.2.3 尿液采集量應(yīng)充足，一般尿液不應(yīng)少于50 ml為宜。

1.2.4 女性尿液病理檢查應(yīng)避開月經(jīng)期。

1.2.5 對一次尿檢呈陰性者，最好連續(xù)送檢尿液3次以上，以提高陽性檢出率。

1.2.6 因尿液中蛋白含量較少，沉淀不易粘附于載玻片上，使用膠片以防掉片。

1.3 漿膜腔積液標(biāo)本

1.3.1 首先要觀察標(biāo)本的性狀，若標(biāo)本是淡黃色清澈液，則在最底部分吸取30-40 ml于清潔的干燥試管內(nèi)，進(jìn)行離心。若沉淀物為淡紅色血性液時(shí)，底部取樣離心，取沉淀后涂片；若為純血性液如心包積液等，則在其中間部分取樣。這是因?yàn)榈S色與淡紅色胸腹水的有形細(xì)胞受重力影響多沉于底部；而純血性液中大量紅細(xì)胞沉于底部，粒細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞一般浮于紅細(xì)胞上層，故取中間部分離心可提高其陽性檢出率。離心后吸棄上清液，取沉淀物上面呈灰白色的細(xì)胞層制片。如看不見細(xì)胞層，輕輕吸棄上清液，仔細(xì)選取沉淀物最表面物制片；沉淀物極少，血與細(xì)胞成分混合，呈粉紅色，吸棄上清液后取所有沉淀物制片。

1.3.2 積液標(biāo)本送檢量一般為200-500 ml較好［1］。標(biāo)本送檢三次以上，腫瘤細(xì)胞的檢出率會明顯提高［2，3］。多涂片用于多種染色有助于明確診斷。

1.3.3 標(biāo)本抽吸后立即送檢，且立即進(jìn)行離心處理，以保持標(biāo)本的新鮮性。標(biāo)本無需加固定劑和防腐劑，因?yàn)榻?jīng)這樣處理的標(biāo)本離心沉淀后蛋白質(zhì)凝固與載玻片的粘著度降低，染色中易掉片，尤其在免疫組化染色時(shí)更易掉片。

1.3.4 標(biāo)本制作前首先觀察有無凝固物質(zhì)，如有凝固物，將其挑出，制成細(xì)胞蠟塊。離心后的標(biāo)本，如有塊狀、顆粒狀的沉淀物，將其固定，亦制成細(xì)胞蠟塊進(jìn)行切片，這樣可明顯提高癌細(xì)胞的檢出率。

1.4 女性生殖道脫落細(xì)胞

宮頸外口刮片是診斷宮頸癌的重要標(biāo)本來源。

1.4.1 婦科刮片取材部位至關(guān)重要：宮頸癌多數(shù)好發(fā)于宮頸口柱狀上皮和鱗狀上皮交界處，因此宮頸刮片應(yīng)該從宮頸口兩種上皮的移形帶處采集，在涂片中除有鱗狀上皮細(xì)胞外，還應(yīng)見到柱狀上皮或化生的鱗狀上皮細(xì)胞等。故要求臨床婦科醫(yī)生必須認(rèn)真準(zhǔn)確地取材，否則容易漏診。在液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)工作中，亦強(qiáng)調(diào)婦科醫(yī)生要將宮頸刷深入宮頸管內(nèi)口轉(zhuǎn)5-8圈以上，不留死角，刷頭全部進(jìn)入細(xì)胞保存液。

1.4.2 細(xì)胞涂片前24h內(nèi)不能同房、盆浴、陰道沖洗和藥浴。器械要干凈清潔；頸管刮片之前，必須嚴(yán)格消毒，以防感染。

2.要保證細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的制片質(zhì)量

細(xì)胞學(xué)涂片質(zhì)量與診斷質(zhì)量密切相關(guān)。質(zhì)量好的涂片是細(xì)胞學(xué)診斷的基礎(chǔ)，其中標(biāo)本的細(xì)胞數(shù)量是診斷質(zhì)量的決定性因素。細(xì)胞數(shù)量必須在一定范圍以上，傳統(tǒng)涂片最低8000個(gè)或液基制片約為5000個(gè)細(xì)胞以上保存完好和形態(tài)清晰的鱗狀細(xì)胞。質(zhì)量好的涂片應(yīng)該是：涂片厚薄適當(dāng)，分布均勻，過厚的涂片相互重疊；過薄的涂片，細(xì)胞數(shù)量少，難以做出準(zhǔn)確的診斷。涂片范圍要適當(dāng)，范圍過大封片不全，透明不佳，鏡下涂片模糊不清。范圍過小細(xì)胞量少，易漏診，一般涂面為標(biāo)簽以外1／3-1／2為好。

2.1 手工涂片法

手工涂片方法較多，認(rèn)為對拉式涂抹方法簡便，快捷，細(xì)胞分布也均勻。此法在標(biāo)本采集和處理方面較原始，鏡下背景污穢，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)模糊不清，且厚薄不均，細(xì)胞重疊，受檢細(xì)胞稀疏。加之傳統(tǒng)涂片面積較大，由于涂片為自然干燥，致使其不能濕性固定，細(xì)胞易變性，著色不清，觀察時(shí)間較長，易產(chǎn)生視覺疲勞、粗心和漏診。玻片上常有大量血細(xì)胞、黏液等雜質(zhì)干擾對腫瘤細(xì)胞觀察，但有時(shí)涂片的背景也有助于細(xì)胞診斷，如血性背景、臟的背景伴有高度病變時(shí)，提示有可疑病變的可能。手工涂片具有簡單、成本低、易學(xué)等特點(diǎn)。涂片時(shí)，勿用力擠壓或摩擦，防止細(xì)胞擠壓損傷或變形。

2.2 液基細(xì)胞學(xué)制片法

液基細(xì)胞技術(shù)有2種即新柏氏液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）和自動細(xì)胞學(xué)檢查（LCT）［4］。目前所用的液基制片裝置都是被用來制作細(xì)胞學(xué)涂片的，其在原理上有所不同。一般分為自然沉降法、膜式法、垂直離心法和水平離心法等四種。共同點(diǎn)是均可以將液基里的細(xì)胞標(biāo)本轉(zhuǎn)移到在薄片上，然后加以染色，制成涂片標(biāo)本。近年應(yīng)用于臨床的液基細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)有效解決了手工涂片中存在的許多弊端，如細(xì)胞丟失嚴(yán)重，制片質(zhì)量不好，細(xì)胞常相互重疊，或被炎細(xì)胞、血細(xì)胞覆蓋而難以識別。涂片也會因固定不及時(shí)，致細(xì)胞干燥、退變，影響診斷。液基細(xì)胞學(xué)制片的主要優(yōu)點(diǎn)：變革了標(biāo)本采集和處理方法，縮小了細(xì)胞涂膜面積，紅細(xì)胞大多破壞消失，粘液絲溶解，炎細(xì)胞明顯減少，異常細(xì)胞清楚可見，不易漏診。細(xì)胞圖像清晰，層次分明，核膜、核仁及染色質(zhì)等細(xì)微結(jié)構(gòu)清晰可見，三維立體感好，因此縮短了閱片時(shí)間，明顯提高了工作效率，有效提升了細(xì)胞病理學(xué)診斷價(jià)值。細(xì)胞多，細(xì)胞保存液可及時(shí)并長期保存細(xì)胞，可反復(fù)多次制作涂片，方便用于免疫組化等進(jìn)一步的檢查。離心沉降液基技術(shù)對于細(xì)胞量少的標(biāo)本作用是傳統(tǒng)涂片不可替代的。如腦脊液、尿等細(xì)胞數(shù)量少的標(biāo)本，我們利用離心沉降式液基技術(shù)能夠充分保留細(xì)胞的數(shù)量。

2.3 痰液的前期處理

制片前使用痰液溶解劑對痰液進(jìn)行前期處理，使痰標(biāo)本液化后進(jìn)行液基制片，可提高痰檢陽性率。我們采用N-乙酰-L-半胱氨酸化學(xué)溶解粘液的方法制片效果很好［5］，主要作用機(jī)理為斷裂黏液中糖蛋白的二硫鍵，使蛋白質(zhì)分解破壞，將粘液中的細(xì)胞游離出來。

2.4 標(biāo)本中血細(xì)胞的處理方法

日常工作中常會遇到血性細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，如血尿、血性胸腹水等，因大量紅細(xì)胞的存在，不但影響了癌細(xì)胞的檢出，而且涂片不易制作，常致涂片在染色水洗過程中脫片，使觀察結(jié)果受到限制和影響。我們經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)采用50%酒精做為溶血?jiǎng)ρ詷?biāo)本進(jìn)行前期處理，制片效果較好。由于紅細(xì)胞對低滲的耐受性較腫瘤差，血性液體與低滲液充分混合后，紅細(xì)胞即腫脹破壞溶解，因此血性胸腹水等標(biāo)本經(jīng)低滲濃集后無紅細(xì)胞及細(xì)胞碎片，癌細(xì)胞集中，常形成大團(tuán)；又由于癌細(xì)胞對低滲耐受性好，同時(shí)低滲液中的酒精對癌細(xì)胞有保護(hù)作用，因此低滲濃集后的癌細(xì)胞結(jié)構(gòu)保存完好，染色清晰，結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞多類似組織切片，加之無紅細(xì)胞背景，有利于診斷與分類。

3.及時(shí)固定至關(guān)重要，是決定細(xì)胞染色質(zhì)量好壞的關(guān)鍵

細(xì)胞學(xué)標(biāo)本經(jīng)制片后要及時(shí)固定，涂片及時(shí)固定染色后細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，胞核胞質(zhì)色澤分明。涂片濕固定較佳，因?yàn)楦稍锏耐科瑫辜?xì)胞脹大變形，導(dǎo)致細(xì)胞核染色較差，鏡下染色質(zhì)結(jié)構(gòu)不清晰而影響診斷。我們發(fā)現(xiàn)離體的脫落細(xì)胞，可以發(fā)生不同程度的退化變性，表現(xiàn)為細(xì)胞核的大小、形態(tài)、染色等改變，如細(xì)胞面積隨時(shí)間的延長會逐漸增大，這些退變細(xì)胞很容易與腫瘤細(xì)胞相混淆。實(shí)驗(yàn)提示，細(xì)胞學(xué)標(biāo)本送檢最宜時(shí)機(jī)一般要求離體后30分完成送檢、標(biāo)本處理和固定，15分內(nèi)完成送檢、處理、固定最佳，此時(shí)脫落細(xì)胞退變程度最小。對路途較遠(yuǎn)不能及時(shí)送往者，不能及時(shí)制片、固定或不能低溫保存時(shí)，可加入適量的40%甲醛或50%酒精固定，以防胸腹水變質(zhì)退變。

3.1 選擇良好的固定劑對提高涂片質(zhì)量尤為重要。常用的固定液有95%酒精、10%福爾馬林、95%酒精50毫升＋乙醚50毫升＋冰醋酸1毫升混合液及95%酒精100毫升＋冰醋酸1毫升混合液。

95%酒精固定劑在日常工作中應(yīng)用較多，但它使細(xì)胞收縮嚴(yán)重，核染色不良，核深染，核內(nèi)結(jié)構(gòu)不清，可能由于酒精穿透力強(qiáng)，固定速度快，同時(shí)有脫水作用引起。10%福爾馬林是優(yōu)良的固定液，但胸腹水中脫落的細(xì)胞本身浸泡在體液中而腫脹，涂片后直接固定，福爾馬林又無脫水作用，所以用它固定的涂片染色后細(xì)胞腫脹，核漿模糊，結(jié)構(gòu)模糊，胞漿深染，核顯示不清，當(dāng)細(xì)胞密集時(shí)更為突出。乙醚可溶解脂肪，使細(xì)胞容易著色，當(dāng)與酒精混合時(shí)，延緩了酒精的快速穿透作用，克服了單獨(dú)用酒精固定時(shí)細(xì)胞收縮的缺點(diǎn)，具有固定兼脫水作用，使細(xì)胞固定后染色更加清晰。95%酒精冰醋酸混合液與95%酒精和10%福爾馬林比較，它使細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，核漿分明，特別是核仁核膜尤為清楚，該混合固定液中，冰醋酸能沉淀核蛋白，使細(xì)胞膨脹，能抵消經(jīng)過酒精固定引起細(xì)胞核的收縮，具有固定兼脫水作用。我們經(jīng)實(shí)際應(yīng)用認(rèn)為，95%酒精冰醋酸混合液和酒精乙醚冰醋酸混合固定液是胸腹水等細(xì)胞涂片的優(yōu)良固定劑。

3.2 固定液要定期進(jìn)行過濾和更換，以防細(xì)胞脫落造成交叉污染。

4.要正確選擇染色方法

細(xì)胞學(xué)染色方法較多，許多醫(yī)院習(xí)慣應(yīng)用HE染色，巴氏染色并不很普及。在宮頸涂片方面國內(nèi)外推薦使用巴氏染色，它是細(xì)胞學(xué)唯一的正規(guī)染色方法。

4.1 重視染液的使用期限

配制后的染液，如蘇木素、伊紅、EA50染液等，在染缸上要標(biāo)記上配制時(shí)間，以保證染液的新鮮度及控制好染色時(shí)間。

4.2 避免染液交叉污染

因細(xì)胞學(xué)標(biāo)本容易脫落，最好染液每天用前過濾，以避免染液內(nèi)殘留細(xì)胞粘附于玻片上，造成污染。

5.封片

5.1 染色后的涂片必須封片

其目的是使涂片長期保存，鏡下細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)清晰，且便于診斷時(shí)在涂上做標(biāo)記，減少讀片時(shí)的空氣污染。

5.2 避免蓋玻片的污染

被霉菌污染的蓋玻片，要禁止使用，以防造成誤診。

6.閱片要耐心細(xì)致

細(xì)致閱片是診斷的關(guān)鍵。由于脫落細(xì)胞學(xué)是在大量正常的細(xì)胞中尋找數(shù)量相對較少的異常細(xì)胞或癌細(xì)胞，有時(shí)癌細(xì)胞數(shù)量很少或只局限于涂片的某一區(qū)域，因此觀察涂片必須全面細(xì)致、耐心，不漏掉一個(gè)視野，不放過一個(gè)可疑的細(xì)胞。由于薄層制片方法與傳統(tǒng)涂片方法及原理有所不同，液基法是先固定后涂片，致使細(xì)胞收縮變小，鏡下細(xì)胞形態(tài)也有差異，在閱片時(shí)要注意二者區(qū)別。

7.加強(qiáng)學(xué)習(xí)，不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，提高細(xì)胞學(xué)診斷的準(zhǔn)確性

由于細(xì)胞學(xué)本身的局限性，缺乏組織結(jié)構(gòu)的改變，因此，細(xì)胞學(xué)工作者必須對各器官、各系統(tǒng)的各種正常細(xì)胞、良性病變細(xì)胞、放療后細(xì)胞的形態(tài)變化有全面深刻的了解，才能做出準(zhǔn)確的判斷。在遇到疑難病例難以確診時(shí)，應(yīng)重復(fù)檢查，進(jìn)行動態(tài)觀察，亦可建議做病理活檢，最后確定診斷。遇到下列情況應(yīng)重復(fù)檢查：①細(xì)胞學(xué)診斷與臨床診斷明顯不符合的病例。②涂片中只有少數(shù)異常細(xì)胞，難以做出結(jié)論性診斷的病例。③標(biāo)本中細(xì)胞壞死或變性嚴(yán)重，難以肯定診斷或分型的病例。④取材不當(dāng)或制片技術(shù)不佳涂片。

8.重視各種檢測技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用

常規(guī)HE染色是細(xì)胞學(xué)診斷的基礎(chǔ)，但對分化較差的腫瘤細(xì)胞，由于細(xì)胞的特征不明顯，常規(guī)染色往往很難判斷。遇到疑難病例建議借助如特殊染色、免疫組化、電鏡及分子生物學(xué)等技術(shù)，最后做出明確診斷。

［1］張樹平，李立宏.漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查質(zhì)量控制.河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，27（1）：73

［2］樊英，李龍蕓.良惡性胸腔積液的鑒別診斷.癌癥進(jìn)展雜志，2005，3（2）：134-136

［3］李桂賓，孫玉紅，高穎.良惡性胸水的實(shí)驗(yàn)室檢查新進(jìn)展.臨床肺科雜志，2005，10（3）：361-362

［4］王慶國，葉見波，韋榮干.液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)在宮頸癌病變篩查中效果的研究進(jìn)展.廣西醫(yī)學(xué)，2005，27（11）：1800-1802

［5］婁錚，呂純凱.影響結(jié)核分枝桿菌涂片鏡檢和培養(yǎng)結(jié)果的幾項(xiàng)重要因素.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2000，15（1）：60

圖 版 說 明

圖1 血性胸水標(biāo)本：經(jīng)溶血?jiǎng)┨幚砗?，背景較干凈，癌細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示清楚 ×400.

圖2 痰標(biāo)本：經(jīng)粘液溶解劑處理后，背景較干凈，癌細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示清晰 ×200.

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 Bloody hydrothorax speci men：Hemolysis agent treatment，clear background，str ucture of cancer cell were clarity×400

Fig.2 Sputu m speci men：Mucus dissolve agent treat ment，clear background，structure of cancer cell were clarity×200

361

B

10.3870／zgzzhx.2012.04.023

2012-02-10

2012-04-01

田玉旺，男（1962年），漢族，主任技師。