ABCG2蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及臨床意義

唐 甜

ABCG2蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及臨床意義

唐 甜

（武漢大學(xué)人民醫(yī)院腫瘤Ⅱ科 湖北430060）

目的 探討ABCG2蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法 收集武漢大學(xué)人民醫(yī)院2000-2006年手術(shù)切除及活檢的甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)本40例和甲狀腺腺瘤標(biāo)本20例。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺腺瘤組組織內(nèi)ABCG2蛋白的表達(dá)。利用HPIAS-2000圖像分析系統(tǒng)測(cè)定ABCG2蛋白在甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺腺瘤中表達(dá)的平均光密度和平均陽(yáng)性面積率。結(jié)果 甲狀腺乳頭狀癌組織中ABCG2蛋白呈高表達(dá)；甲狀腺腺瘤中ABCG2蛋白呈低表達(dá)；圖像分析結(jié)果顯示兩組間差異有顯著性意義（P＜0.05）。結(jié)論 ABCG2在甲狀腺乳頭狀癌組織中的高表達(dá)可能參與了甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生、發(fā)展，而且其在癌組織中的高表達(dá)可能參與了甲狀腺乳頭狀癌化療過(guò)程中多藥耐藥形成。

甲狀腺乳頭狀癌；ABCG2蛋白；免疫組織化學(xué)

甲狀腺癌是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤，占全身惡性腫瘤的1.5%左右，男女比約為1：2.5-3。與一般惡性腫瘤好發(fā)于老年人不同，甲狀腺癌多發(fā)于青壯年，平均年齡約40歲，近年來(lái)甲狀腺癌的發(fā)病率呈增高趨勢(shì)［1-3］。為了使甲狀腺癌患者得到正確診斷和及時(shí)有效治療，我們需要進(jìn)一步研究和探討甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)制。

ABCG2作為一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在維持細(xì)胞自身穩(wěn)定及機(jī)體正常生理功能等方面起著重要作用，其功能發(fā)揮受內(nèi)外環(huán)境因素的影響［4］。

通過(guò)應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和圖像分析檢測(cè)ABCG2蛋白在甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺腺瘤中的表達(dá)，探討其在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制，為臨床上治療甲狀腺乳頭狀癌提供理論依據(jù)。

材料和方法

1.材料

1.1 材料來(lái)源 收集武漢大學(xué)人民醫(yī)院病理2000-2006年手術(shù)切除及活檢的甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)本40例和甲狀腺腺瘤標(biāo)本20例。其中甲狀腺乳頭狀癌中男12例，女28例；年齡23-68歲。甲狀腺腺瘤中男6例，女14例；年齡20-60歲。隨訪時(shí)間為8-36個(gè)月，平均隨訪時(shí)間20.3個(gè)月，中位隨訪時(shí)間18個(gè)月。

1.2 材料分組 蠟塊切片厚5μm，粘片于涂有多聚賴氨酸的潔凈載玻片上，置于烤箱烤干待用。常規(guī)HE染色，用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)ABCG2在各組中的表達(dá)。

1.3 主要試劑 濃縮型鼠抗人ABCG2單克隆抗體 （北京中杉生物技術(shù)有限公司）；超敏即用型SP通用型免疫組織化學(xué)試劑盒（北京中杉生物技術(shù)有限公司）；顯色試盒及多聚賴氨酸（北京中杉生物技術(shù)有限公司）。

2.方法

2.1 免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)ABCG2蛋白相關(guān)抗原

主要步驟：5μm組織切片常規(guī)脫蠟至水，3﹪過(guò)氧化氫處理10 min以抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，ABCG2蛋白采用微波抗原修復(fù)（3檔，10 min），正常羊血清37℃孵育10 min以減少非特異性反應(yīng)，一抗37℃孵育1h，生物素標(biāo)記的二抗，37℃孵育10 min，SP復(fù)合物處理10 min，DAB顯色液顯色，自來(lái)水沖洗終止反應(yīng)，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。用磷酸緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對(duì)照。

2.2 免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷

（1）以胞質(zhì)和胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)。陰性對(duì)照除細(xì)胞核染成藍(lán)色外，胞漿內(nèi)無(wú)棕黃色反應(yīng)物。

（2）采用HPIAS-2000高清晰度彩色病理圖文報(bào)告管理系統(tǒng)（同濟(jì)千屏影像公司）對(duì)ABCG2的表達(dá)進(jìn)行定量分析，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)完整而不重疊的高倍鏡視野（×400），測(cè)定每個(gè)視野下ABCG2的陽(yáng)性反應(yīng)的平均光密度、陽(yáng)性反應(yīng)面積和所有細(xì)胞總面積，計(jì)算陽(yáng)性面積率。以每例5個(gè)視野的平均光密度、陽(yáng)性面積率的平均值作為該例的測(cè)量值。（陽(yáng)性面積率＝單位面積中陽(yáng)性反應(yīng)的總面積／單位面積中細(xì)胞的總面積×100%）

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對(duì)各組免疫組織化學(xué)反應(yīng)陽(yáng)性顆粒的平均光密度、陽(yáng)性面積率作單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05。

結(jié) 果

甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺瘤組織中ABCG2的表達(dá)。

甲狀腺腺瘤組織中可見(jiàn)少量的棕黃色顆粒，ABCG2表達(dá)較弱（圖1）；甲狀腺乳頭狀癌組織內(nèi)可見(jiàn)密集分布的棕黃色顆粒，ABCG2表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性（圖2）。圖像分析結(jié)果顯示：甲狀腺腺瘤組織和甲狀腺乳頭狀癌組織之間ABCG2表達(dá)的平均光密度及陽(yáng)性面積率的差異有顯著性意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺腺瘤組織ABCG2表達(dá)的平均光密度和陽(yáng)性面積率（ˉx±s）Table 1 The average optical density and t he rate of positive area of ABCG2 in thyroid papillary carcino ma and in thyroid gland adeno ma tissue（ˉx±s）

圖1 ABCG2在甲狀腺腺瘤中的表達(dá)?？梢?jiàn)少量的棕黃色顆粒，ABCG2表達(dá)較弱（SP×200）圖2 ABCG2在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)。可見(jiàn)密集分布的棕黃色顆粒，ABCG2表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性（SP×200）Fig.1 Expression of ABCG2 in thyroid gland adeno ma.There were few brown particles in the cytoplas m of cancer side tissue，ABCG2 expression was weak.SP×200Fig.2 Expression of ABCG2 in the cytoplas m of thyroid papillary carcinoma There were plenty of brown particles in the cytoplas m of thyr oid papillar y carcino ma.ABCG2 was str ongly expressed.SP×200

討 論

甲狀腺癌（TC）在頭頸部腫瘤中居首位。其組織學(xué)類(lèi)型主要包括乳頭狀癌（PTC），濾泡狀癌（FTC），未分化癌（ATC）和髓樣癌（MTC），以PTC所占比例最大［5-6］。乳頭狀癌是甲狀腺癌中最常見(jiàn)的類(lèi)型，屬于一種低度惡性腫瘤［7-10］，多發(fā)于20-50歲的成年人，男女比例約為1∶3-4。盡管15歲以下的兒童和青少年很少發(fā)生PTC，但PTC仍然是最常見(jiàn)的兒童型甲狀腺癌。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)PTC患者五年存活率女性為94%，男性為90%［11-13］。早期診斷和及時(shí)正確的治療是提高生存率的關(guān)鍵。深入認(rèn)識(shí)甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)制，將有可能為治療提供新的線索和途徑。

三磷酸腺苷（ATP）結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2（ABCG2）基因是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的ABC（ATP-binding cassette）超家族成員之一，是一種新發(fā)現(xiàn)的耐藥相關(guān)半轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，與P糖蛋白和多藥耐藥相關(guān)蛋白同屬ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族［14-16］。目前研究較多的是，ABCG2通過(guò)泵出常見(jiàn)的化療藥物，如米托蒽醌、托普替康、伊立替康、甲氨碟呤等，使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥，從而導(dǎo)致化學(xué)治療的失?。?7-18］。

ABCG2的另一重要功能是與干細(xì)胞的關(guān)系，有研究顯示，ABCG2在干細(xì)胞中高表達(dá)，隨著細(xì)胞的分化成熟其表達(dá)量迅速下降，成熟細(xì)胞中表達(dá)量非常低，推測(cè)可能腫瘤干細(xì)胞通過(guò)ABCG2的主動(dòng)泵出功能，將抗癌藥大多泵出細(xì)胞外，使得腫瘤干細(xì)胞逃脫了抗癌藥的殺傷作用，為腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移奠定了基礎(chǔ) 。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：甲狀腺腺瘤組織中ABCG2呈低表達(dá)；甲狀腺乳頭狀癌組織中ABCG2呈高表達(dá)。圖像分析結(jié)果顯示：甲狀腺腺瘤組織和甲狀腺乳頭狀癌組織之間ABCG2表達(dá)的平均光密度及陽(yáng)性面積率的差異有顯著性意義（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：ABCG2的高水平表達(dá)可能參與了甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展，而且其在癌組織中的高表達(dá)可能參與了甲狀腺乳頭狀癌化療過(guò)程中多藥耐藥形成。同時(shí)在甲狀腺乳頭狀癌組織中檢測(cè)到ABCG2的高表達(dá)也說(shuō)明了ABCG2可能在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生的早期起了一定的作用。

［1］Volante M，Papotti M.Poorly differentiated thyroid carcino ma：5years after the 2004 WHO classification of endocrine tu mours.Endocr Pat hol，2010，21：1-6

［2］Br uce B，Khanna G，Ren L，et al.Expressi on of the cytoskelet on linker protein ezrin in hu man cancers.Clin Exp Metastasis，2007，24（2）：69-78

［3］Mallikarjuna K，Pushparaj V，Biswas J，et al.Expression of epider mal gr owth factor receptor，ezrin，hepatocyte growth factor，and c-Met in uveal melanoma：an i mmunohistochemical study.Curr Eye Res，2007，32：281-290

［4］Krishnamurthy P，Ross DD，Nakanishi T，et al.The stem cell mar ker Bcr p／ABCG2 enhances hypoxic cell sur vival through interactions with heme.J Biol Chem，2004，279：242l8-24225

［5］Br uce B，Khanna G，Ren L，et al.Expression of the cytoskeleton linker protein ezrin in hu man cancers.Clin Exp Metastasis，2007，24：69-78

［6］Bongiovanni M，Bloo m L，Krane JF，et al.Cyto morphologic feat ures of poorly differentiated t hyroid carcino ma：A multi-institutional analysis of 40 cases.Cancer Cytopathol，2009，117：185-194

［7］Bongiovanni M，Sadow PM，F(xiàn)aquin WC.Poorly differentiated thyroid carcino ma：A cytologic-histologic review.Adv Anat Patho，2009，16：283-289

［8］Sanders EM，Volsi VA，Brierley J，et al.An evidencebased review of poorly differentiated thyroid cancer.World J Sur g，2007，31：934-945

［9］Erkilic S，Kocer NE.Insular carcino ma of the thyroid with unco mmon cytologic feat ures：Anisokaryotic cells and microfollicles containing dense colloid.Pathol Res Pract，2006，202：389-393

［10］Jogai S，Jassar A，Adisena A.Fine needle aspiration cytology of thyroid lesions.Acta Cytol，2005，49：483-488

［11］Waldner M，Schi manski C C，Neurath M F.Colon cancer and the i mmune syste m：ther ole of tu mor in vading T cells.World J.Gastroenterol.2006，12，623，7233-7238

［12］Zarife M A，Reis E A，Car mo T M.Increased frequency of CD56 Bright NK-630cells，CD3-CD16＋CD56-NK-cells and activated CD4 ＋ T-cellsor B-cellsinparallel 631with CD4＋ CDC25 high T-cells contro lpotentially viremia in blood donor swith 632 HCV.J.Med.Virol.2009，81，49-59

［13］Kodama Y，Asai N ，Kawai K，et al.The RET protooncogene ：a molecular therapeutic target in thyroid cancer.Cancer Sci，2005 ，96（3）：143-148

［14］Wa1sh N，Kennedy S，Larkin AM，et al.Membrane transport proteins in human melanoma：associations with tttmour aggressiveness and metastasis.BrJ Cancer，2010，102：1157-1162

［15］Chen Z，Liu F，Ren Q，et al.Suppression of ABCG2 inhibits cancer cell proliferation.Int J Cancer，2010，126：841-851

［16］Gupta N，Martin PM，Miyauchi S，et al.Down-regulation of BCRP／ABCG2 in colorectal an d cervical cancer.Biochem Biophys Res Co mmun，2006，343：57l-577

［17］Ki m YH，Ishii G，Goto K，et al.Expression of breast cancer resistance protein is associated with a poor clinical outco me in patients wit h s mall-cell lung cancer.Lung Cancer，2009，65：105-111

［18］Tsunoda S，Oku mura T，Ito T，et al.ABCG2 expression is an independent unfavorable prognostic factor in esophageal squa mous cell carcino ma.Oncology，2006，71（3-4）：251-258

Expression and clinical significance of ABCG2 protein in thyroid gland papillifor m carcinoma

Tang Tian
（Depart ment of Oncology，Renmin Hospital of Wuhan University，Hubei 430060，China）

Objective To investigate the expression and clinical significance of t he ABCG2 pr otein in thyroid papillary carcino ma.Methods The expression of the ABCG2 protein was examined by S-P i mmunohistoche mical staining in 40 cases of t hyroid carcino ma and 20 cases of t hyr oid gland adeno ma.These sa mples were taken fr o m Ren min Hospital of Wuhan University.The HPIAS-2000 i mage analysis system was used to measure the average optical density and positive area.Results ABCG2 protein expression was high in t hyr oid carcino ma，but l ow in t hyr oid gland adeno ma.I mage analysis de monstrated t hat the expression of the ABCG2 protein in thyroid carcino ma was significantly higher than that in thyroid gland adeno ma（P＜ 0.05）.Concl usion The high expression of ABCG2 may be invol ved in t he occurrence and devel op ment of t hyr oid papillar y carcino ma，and also in t he f or mation of multiple dr ug-resistance in t he che mot herapy process of thyroid papillary carcino ma.

Thyr oid carcino ma；ABCG2 pr otein；I mmunohistoche mistry

R735.7

A

10.3870／zgzzhx.2012.04.016

2012-04-20

2012-06-06

唐甜，女（1981年），漢族，博士。