抗腫瘤藥物HDZ126016的制劑處方前研究

張建明，任筱青，王 科，沙先誼，方曉玲＊

（1.復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室，上海201203；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海精神衛(wèi)生中心藥劑科，上海201108）

［本文編輯］陽凌燕

惡性腫瘤是威脅人類健康的嚴(yán)重疾病。隨著環(huán)境污染的日益嚴(yán)重和人類生存環(huán)境的惡化，癌癥對(duì)人類的威脅正在加劇，抗腫瘤藥物的研究意義重大。索拉菲尼（sorafenib）是一種多激酶抑制劑，能夠通過抑制血管內(nèi)皮生長因子受體而阻斷腫瘤新生血管的形成，間接抑制腫瘤細(xì)胞的生長。雖然索拉菲尼能顯著延長晚期肝癌病人生存期［1］，但是研究表明其對(duì)大鼠和兔具有致突變性和生殖毒性。因此，基于索拉菲尼結(jié)構(gòu)改造的新藥創(chuàng)制成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。HDZ126016是對(duì)索拉菲尼進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造而合成的一個(gè)新型蛋白激酶抑制劑類抗腫瘤藥物。藥效學(xué)研究表明，HDZ126016活性大于索拉菲尼，且毒副作用較低，開發(fā)前景廣闊?？紤]到片劑具有很多優(yōu)點(diǎn)，從實(shí)際角度出發(fā)，將新化合物HDZ126016制成片劑有很大的可行性。本研究旨在對(duì)抗腫瘤藥物HDZ126016進(jìn)行處方前研究，為其制劑研究提供理論依據(jù)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 LC－10AT 高效液相色譜儀，SPD－10A型紫外可見波長檢測器（日本島津株式會(huì)社）；XW－80A渦旋混合器（上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠）；BS 210型電子分析天平（德國賽多利斯天平公司）；DSHZ－300多用途水浴恒溫振蕩器（江蘇太倉市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）；TGL－16G臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；DL－360超聲儀（浙江海天電子儀器廠）；Eppendorf離心管（廣州雷得生物技術(shù)有限公司）。

1.2 試藥 HDZ126016原料（山東醫(yī)藥工業(yè)研究院提供，純度99.50%），HDZ126016對(duì)照品（復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室自制，純度99.90%）；乙腈［色譜純，沃凱（中國）公司］；甲醇、正辛醇、二甲基亞砜（DMSO）、濃鹽酸、磷酸二氫鉀、枸櫞酸、磷酸氫二鈉、十二烷基硫酸鈉（SDS）、聚山梨酯80（吐溫80）均為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；實(shí)驗(yàn)用水為雙蒸水；其他試劑均為市售分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 藥物HDZ126016體外分析方法的建立

2.1.1 溶液配制 精密稱取HDZ126016對(duì)照品適量，加乙腈溶解，在 DL－360超聲儀中超聲10min，確保樣品完全溶解，得到HDZ126016儲(chǔ)備液；再用流動(dòng)相稀釋至所需濃度，得到HDZ126016溶液。

2.1.2 色譜條件色譜柱：XtimateTM C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈－10mmol／L磷酸二氫鉀（用三乙胺調(diào)節(jié)pH至7.5）＝60∶40；流速：1.0ml／min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20μl；檢測波長：250nm。在該條件下，藥品色譜行為良好（見圖1）。

圖1 HDZ126016的HPLC譜圖Figure 1 HPLC photograms of HDZ126016

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取 HDZ126016對(duì)照品50mg，用乙腈配制成濃度為500μg／ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再用流動(dòng)相稀釋成濃度為0.05、0.1、0.5、1、5和10μg／ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于2.1.2項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖，重復(fù)3次。將HDZ126016色譜峰面積（A）對(duì)濃度（c）按最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得線性方程：A＝83 686c＋2 713.7，r＝0.999 9（n＝3）。結(jié)果表明，HDZ126016在0.05～10μg／ml濃度范圍內(nèi)，色譜峰面積（A）與濃度（c）呈良好的線性關(guān)系。

2.1.4 精密度實(shí)驗(yàn) 分別配制低、中、高（0.1、5、10μg／ml）3種濃度的 HDZ126016對(duì)照品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣3次，記錄色譜圖，計(jì)算峰面積的RSD值分別為4.5%、0.51%、0.81%（n＝3），表明精密度符合分析要求。

2.1.5 回收率實(shí)驗(yàn) 分別精密稱取 HDZ126016原料藥約2mg于10ml量瓶中，分別精密加入HDZ126016對(duì)照品2、3、4mg，各3份，以乙腈稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各1ml分別置100ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得低、中、高濃度的供試品溶液，取20μl進(jìn)樣，記錄色譜圖。另精密稱取HDZ126016對(duì)照品適量，以2.1.1項(xiàng)下方法制備成濃度為5μg／ml的溶液為對(duì)照品溶液，取20μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，外標(biāo)法以峰面積計(jì)算各樣品的檢出量，計(jì)算回收率。結(jié)果HDZ126016低、中、高3種濃度的平均回收率分別為100.4%、99.77%、99.94%，RSD 分 別 為0.96%、1.08%、0.91%（n＝3）?？梢娫摲椒ǖ臏?zhǔn)確性滿足含量測定的要求。

2.1.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密稱取HDZ126016原料藥5mg置10ml量瓶中，加乙腈適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液1ml至100ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得濃度約為5μg／ml的供試品溶液，并于0、1、2、4、6、8、10、12、24h分別按含量檢測方法進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，計(jì)算RSD為0.46%（n＝9）。結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2 HDZ126016基本理化性質(zhì)的研究

2.2.1 性狀考察 將HDZ126016原料藥粉末平鋪于表面皿中，肉眼觀察它的基本性狀，進(jìn)行性狀評(píng)價(jià)，并進(jìn)行溶解度實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，HDZ126016為白色粉末狀，無臭，味微苦。HDZ126016在乙腈和DMSO中易溶，在甲醇中微溶，在水中難溶。

2.2.2 不同條件下油水分配系數(shù)的測定 分別配制0.1mol／L鹽酸溶液和pH 值分別為4.0、5.0、6.8、7.4的磷酸鹽緩沖液，分別加入適量的正辛醇，在37℃恒溫水浴振蕩24h，充分飽和。稱取適量HDZ126016原料藥溶于經(jīng)蒸餾水飽和的正辛醇中，使其溶解，配制成2mg／ml的溶液。取2ml分別與10ml上述pH值的水溶液混合，37℃恒溫水浴振蕩48h后，分別取出水相和油相，稀釋到適當(dāng)濃度后，用2.1.2項(xiàng)方法測定HDZ126016的含量，按下列公式計(jì)算表觀油水分配系數(shù)（P）［2，3］：P＝c正辛醇／c水，c正辛醇和c水分別表示正辛醇和水相中HDZ126016的濃度。HDZ126016的表觀油水分配系數(shù)測定結(jié)果見表1，表明該藥脂溶性較好。當(dāng)pH值≤5.0時(shí)，HDZ126016的油水分配系數(shù)（logP）值隨pH值增大而增大，當(dāng)pH值＞5.0時(shí)，logP值隨pH值增大而減小。

表1 不同pH條件下HDZ126016的油水分配系數(shù)Table 1 Oil／water partition coefficients of HDZ126016 under the condition of different pH values

2.2.3 不同溶劑中飽和溶解度的測定 分別取適量過量的HDZ126016對(duì)照品于已標(biāo)記好的4支1.5ml離心管中，分別加入1ml水、0.1mol／L鹽酸、乙醇和吐溫80，渦旋10s，超聲10min，放入水浴恒溫振蕩器中，于室溫振蕩平衡48h。48h后，將離心管從水浴中取出，20×g離心5min，取上清液用乙腈稀釋至適宜濃度后，按2.1.2項(xiàng)方法檢測HDZ126016的含量，分別計(jì)算HDZ126016在上述4種溶劑中的溶解度，結(jié)果分別為（3.19±0.29）×10－4、（8.84×10－3±0.50×10－4）、（38.01±0.30）和（27.20±0.23）mg／ml，表明 HDZ126016在水和0.1mol／L鹽酸中溶解度極小。

2.3 體外溶出介質(zhì)的確定 從2.2項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知該化合物在水中的溶解度較低，故溶出介質(zhì)的選擇是口服給藥制劑溶出實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。配制0.1mol／L鹽酸溶液，在溶液中分別加入0.1%吐溫80、0.5%吐溫80、0.1%SDS、0.5%SDS，再分別加入HDZ126016原料藥，充分溶解使溶液達(dá)到飽和，在室溫條件下振蕩48h。按2.1.2項(xiàng)方法進(jìn)樣檢測，測定HDZ126016在這4種溶出介質(zhì)中的溶解度，分 別 為（8.80±0.03）、（10.63±0.07）、（441.35±4.23）、（979.24±8.69）μg／ml。結(jié)果表明，HDZ126016在含0.5%SDS的0.1mol／L鹽酸溶液中溶解度最大，而且能夠滿足溶出測定時(shí)的漏槽條件，故選擇此溶液為體外溶出實(shí)驗(yàn)的溶出介質(zhì)。

3 討 論

從HDZ126016在不同溶劑中的溶解度可以判斷，HDZ126016與很多激酶抑制劑一樣，是一種水難溶性藥物。如果選擇注射給藥，則較難找到符合注射標(biāo)準(zhǔn)的溶劑系統(tǒng)。同時(shí)，在不同的pH條件下，HDZ126016的油水分配系數(shù)介于3～6，表明其親脂性較好，提示該藥的體內(nèi)吸收情況可能較好。因此，可以考慮將HDZ126016制備成口服制劑。

難溶性藥物的口服制劑研制是藥劑學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)?？诜苿┰诘竭_(dá)生物膜被吸收之前，都需要經(jīng)過溶出過程。難溶性藥物由于溶解度較小，因而其溶出速率也較?。?］。因此可以推斷，在HDZ126016口服制劑發(fā)揮藥效的過程中，溶出可能為限速步驟。為了增加HDZ126016的溶解性，作者在實(shí)驗(yàn)中將其進(jìn)行研磨，粉末過100目篩，該法可以在一定程度上增大藥物粉末的比表面積，以增加藥物的溶解度，促進(jìn)藥物的溶出［4］。另外，為了保證溶出介質(zhì)在溶出度實(shí)驗(yàn)中達(dá)到漏槽狀態(tài)，本研究使用幾種表面活性劑增加HDZ126016在0.1mol／L鹽酸溶液中的溶解度。結(jié)果顯示，該藥在含0.5%SDS的0.1mol／L鹽酸溶液中溶解度顯著增加，0.5%SDS起到了較強(qiáng)的增溶作用，因此將含0.5%SDS的0.1mol／L鹽酸溶液確定為體外溶出介質(zhì)。

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［3］楊建宏，孫 磊，羅福國.頭孢氨芐溶解度及表觀油水分配系數(shù)測定［J］.中國抗生素雜志，2010，35（9）：S6－S8.Yang JianHong，Sun Lei，Luo FuGuo.Determination of equilibrium solubility of cefalexin in various medium and its apparent oil／water partition coefficient［J］.Chin J Antibiot，2010，35（9）：S6－S8.Chinese with title in English.

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