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    白花丹參莖葉水提取物對博萊霉素致肺纖維化小鼠的保護作用*

    2012-12-01 02:14:24刁保忠靳維榮陳建中
    關鍵詞:博萊白花肺纖維化

    刁保忠,靳維榮,陳建中

    (聊城市人民醫(yī)院制劑科,山東 聊城 252000)

    肺纖維化是一種原因不明的慢性、彌散性肺間質病變,可導致肺泡、肺間質纖維化并引發(fā)呼吸衰竭。白花丹參為唇形科丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的白花變型,主要分布于泰山及其周邊地區(qū)。白花丹參除具有丹參的作用和用途外,在治療血栓性脈管炎方面具有獨特療效[1]。丹參總酚酸已初步證實,對肺纖維化有一定的治療作用[2],而白花丹參的莖葉中含有較高的丹參總酚酸[3]。為綜合開發(fā)利用白花丹參藥物資源,探討被廢棄莖葉的藥用價值,筆者通過觀察白花丹參莖葉水提取物對小鼠肺纖維化的治療作用,為其臨床提供科學依據。

    1 材料與方法

    1.1 藥品及試劑

    白花丹參于2011年11月采自泰山東麓,制備成不同濃度(按生藥含量計算)水提物供實驗用;博萊霉素(日本化藥株式會社,批號110510);羥脯氨酸(Hyp)和超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

    1.2 動物清潔級

    昆明種小鼠60只,雌雄各半,體重20g!24g,購于山東省衛(wèi)生防疫站實驗動物中心(合格證號魯動質110403),寄養(yǎng)于泰山醫(yī)學院實驗動物中心。

    1.3 分組、造模及給藥

    將50只昆明種小鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、白花丹參莖葉水提取物高、中、低劑量組(10、20、40mg·kg-1),每組 10 只。各組小鼠戊巴比妥鈉麻醉后,仰臥固定位,行頸正中切口,鈍性分離暴露氣管,除對照組外,各組小鼠氣管軟骨環(huán)間隙穿刺緩緩注入5 mg·kg-1博萊霉素,對照組注入等體積生理鹽水。注射后輕輕旋轉動物,使藥液在肺內均勻分布,縫合傷口、消毒,待動物清醒后常規(guī)飼養(yǎng)。次日開始灌胃給藥,對照組與模型組灌胃等量蒸餾水,1次/d,連續(xù)灌胃30d。

    1.4 觀察指標與方法

    實驗結束時,脫臼處死小鼠分離出雙肺,稱質量計算肺指數。肺指數=肺質量(mg)/體重(g)。左肺按常規(guī)病理學方法進行固定、包埋、切片。分別進行HE及Masson氏三色染色,光學顯微鏡下觀察。其中利用Masson氏三色染色的切片觀察肺組織切片纖維化程度,以百分比表示。然后將肺泡炎和肺纖維化的程度分級。右葉肺制成組織勻漿進行生化檢測,制備方法參照文獻[4],稱取小塊肺組織參照試劑盒說明進行SOD及Hyp測定。

    1.5 統(tǒng)計學處理

    2 結果

    2.1 白花丹參水提取物對小鼠肺組織病理的影響

    觀察表明,對照組肉眼下觀察,雙肺呈粉紅色,表面光滑,彈性較好;光鏡觀察下,肺組織結構清晰,肺泡壁未見增厚,肺泡上皮細胞結構完整。模型組小鼠肉眼下觀察,雙肺呈暗紅色,體積較大,彈性差。光鏡觀察下,肺泡炎明顯,肺泡間隔間成纖維細胞及基質大量增多,肺泡間隔顯著增寬,可見大量成纖維細胞及膠原纖維增生,其余各治療組均輕于模型組。對照組模型組白花丹參莖葉水提取物高、中、低組小鼠肺泡間隔增寬較模型組明顯減輕,巨噬細胞、淋巴細胞和漿細胞浸潤較輕(Masson氏三色染色),肺泡結構基本正常,與模型組相比纖維化程度均有不同程度減輕。

    2.2 白花丹參水提取物對小鼠肺指數的影響

    表1顯示,白花丹參水提取物和對照組實驗結束時的體重明顯高于模型組(P<0.05),白花丹參水提取物和對照組的肺指數明顯低于模型組(P<0.05),提示白花丹參莖葉水提取物可明顯降低博萊霉素所致肺纖維化小鼠的肺指數。

    2.3 白花丹參水提取物對小鼠肺泡炎、肺纖維化程度的影響

    圖1 各組小鼠肺組織的病理形態(tài)變化

    表1 各組實驗始末小鼠體重及肺指數變化情況比較(n=10,±s)

    表1 各組實驗始末小鼠體重及肺指數變化情況比較(n=10,±s)

    注:與對照組比較,△P<0.05,#P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P <0.01

    組 別 例數 劑量/(g·kg-1)體重/(g)肺指數/(mg·g - 1)對 照 組 10 - 28.51±0.62** 5.69±0.45**模 型 組 10 - 20.07±1.56# 10.72±2.30#10 10 25.36 ±1.25* 6.31 ±1.16**白花丹參 10 20 25.71±1.36* 6.70±1.52△*水提取物 10 40 26.25±1.19* 6.37±1.02*

    表2顯示,模型組的肺泡炎和肺纖維化的程度較對照組明顯增加(P<0.01);白花丹參莖葉水提取物組各組中肺泡炎評分均明顯低于模型組(P<0.05),其中高劑量組評分降低最為明顯(P<0.01)。但白花丹參莖葉水提取物各組的肺泡炎、肺纖維化程度無顯著性差異(P>0.05)。揭示博萊霉索可造成膠原組織在肺內的沉積而肺泡炎和肺纖維化的程度較對照組顯著增加,40 g·kg-1劑量的白花丹參水提取物能有效地降低博萊霉素致肺纖維化小鼠肺組織的肺泡炎、肺纖維化程度。

    表2 各組小鼠肺泡炎、肺纖維化、Hyp及SOD比較

    2.4 白花丹參水提取物對小鼠肺組織Hyp含量的影響

    表2顯示,治療30d后,模型組小鼠的肺組織Hyp含量明顯高于對照組和白花丹參水提取物組(P<0.05或0.01),尤其是對照組和白花丹參水提取物組中的高、低劑量組,且白花丹參水提取物的高、低劑量組與對照組Hyp含量變化無顯著差異(P>0.05)。揭示博萊霉索可造成膠原組織在肺內的沉積而 Hyp 顯著升高,20 g·kg-1、40 g·kg-1劑量的白花丹參水提取物能有效地降低博萊霉素致肺纖維化小鼠的肺組織的Hyp生成。

    2.5 白花丹參水提取物對小鼠肺組織SOD活性的影響

    表2顯示,治療30d后,與模型組比較,白花丹參水提取物組的小鼠肺組織SOD活性顯著升高,且隨給藥濃度升高呈上升趨勢,高劑量組與對照組SOD活性無顯著差異(P>0.05)。提示博萊霉索可造成膠原組織在肺內的沉積而SOD活性顯著下降,40 g·kg-1劑量的白花丹參水提取物能有效地升高博萊霉素致肺纖維化小鼠肺組織的SOD活性。

    3 討論

    根據肺纖維化臨床表現,屬中醫(yī)學的“肺痹”、“肺痿”范疇。目前糖皮質激素是治療肺纖維化的首選方法,但長期應用可引發(fā)感染和呼吸衰竭。丹參總酚酸是丹參主要的水提取物,具有抗氧化、調血脂及抗纖維化形成作用?,F代實驗研究表明,丹參總酚酸在抗肺纖維化中作用確切、效果顯著,其機制可能與其抗氧化活性抑制成纖維細胞分泌膠原蛋白有關[5]。

    肺纖維化的發(fā)生和發(fā)展與多種因素有關,脂質過氧化是肺纖維化發(fā)病機制中的關鍵因素。SOD是超氧陰離子自由基的清除劑,可抑制自由基啟動的過氧化反應,間接反映了機體清除自由基的能力。博萊霉素致肺纖維化的重要機制是自由基損傷,氧自由基可刺激成纖維細胞增生。成纖維細胞是分泌膠原蛋白的主要細胞。Hyp是機體膠原蛋白的主要成分之一,可作為其膠原組織代謝的重要指標。

    本研究結果顯示,各組小鼠的體重在實驗起始時與實驗結束時均有顯著差異(P<0.05或0.01)。白花丹參水提取物和對照組實驗結束時的體重明顯高于模型組(P<0.05)。白花丹參水提取物和對照組的肺指數明顯低于模型組(P<0.05),且白花丹參水提取物的高、低組接近對照組。模型組小鼠的肺組織Hyp含量明顯高于對照組和白花丹參水提取物組(P<0.05或0.01),尤其是對照組和白花丹參水提取物組中的高、低劑量組,且白花丹參水提取物的高、低劑量組與對照組Hyp含量變化無顯著差異(P>0.05);白花丹參水提取物組的小鼠肺組織SOD活性顯著升高,且隨給藥濃度升高呈上升趨勢,高劑量組與對照組 SOD活性無顯著差異(P>0.05)。提示高劑量的白花丹參水提取物能明顯降低博萊霉素所致肺纖維化小鼠肺指數,有效地降低博萊霉素致肺纖維化小鼠肺組織的Hyp生成,有效地升高博萊霉素致肺纖維化小鼠肺組織的SOD活性。因此,白花丹參水提取物能減輕博萊霉素致小鼠肺纖維化程度,有一定的治療作用。

    [1]李允堯,趙華其,陳滬寧,等.山東省白花丹參的植物資源[J].中藥材,2000,23(2):69-70.

    [2]林軍,馮一中,顧振綸,等.丹參總酚酸對博萊霉素致肺纖維化小鼠的治療作用[J].中草藥,2008,39(3):400-403.

    [3]李正國,石俊英,張中湖.丹參莖、葉中丹酚酸B的HPLC法比較分析[J].藥學實踐雜志,2007,25(5):307-309.

    [4]陳佰義,姜莉,侯顯明.實驗性肺纖維化大鼠肺泡巨噬細胞脂質過氧化先于其細胞因子的釋放[J].中國病理生理雜志,2006,16(11):1228-1230.

    [5]張瑞,宋建平,李瑞琴,等.大黃蟲丸對肺纖維化大鼠形成階段的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(4):131-133.

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