元參組方對(duì)急性輻射損傷的保護(hù)機(jī)理研究

曾 婷，郝 麗，金 星，路松毅，謝逸欣，馬 麗，劉保昌

(1.廣州軍區(qū)疾病預(yù)防控制中心，廣州 510507;2.76160部隊(duì)，廣州 510055;3.廣東省衛(wèi)生監(jiān)督所，廣州 510300)

急性骨髓型放射病是機(jī)體受到大劑量核輻射后，以骨髓造血功能衰竭、全血細(xì)胞減少、免疫功能低下等全身性疾?。?］。在中藥抗輻射損傷研究中，中藥天然藥物復(fù)方、單味中藥有效成分已有不少文獻(xiàn)報(bào)道［2～4］。為了探討中藥組方對(duì)急性骨髓型放射病的治療效果，用小鼠作模型，比較系統(tǒng)地觀察了元參組方對(duì)輻射損傷小鼠外周白細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞及干、祖細(xì)胞(CFU-S、CFU-G)的影響。

1 材料與方法

1.1 元參組方

元參組方由元參、黃芩、二花、漏蘆、紅花、三棱、吐絲、雞血藤、土大黃、茜草、甘草11種中藥按常規(guī)水煮酒提方法滅菌后制成每5g生藥制成1ml注射液，養(yǎng)血飲由長白山制藥廠生產(chǎn)。

1.2 動(dòng)物

用日齡50d～60d昆明種小鼠，體重20g～24g，雌雄各半，隨機(jī)分為試驗(yàn)組、陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組。

1.3 儀器

FA1104上皿電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司;2300C/D直線加速器，美國Varian公司;貝克曼-庫爾特5分類血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，美國 Backman公司;雙目光學(xué)顯微鏡(OLYMPUS)，日本生產(chǎn)。

1.4 數(shù)據(jù)

2 方法

2.1 急性輻射損傷模型的建立

小鼠以X射線全身一次性照射，組織吸收劑量7.0Gy。

2.2 治療方法

治療組于照射后一次性注射元參組方提取液0.2ml，陰性小鼠于照射后注射等體積的生理鹽水，陽性對(duì)照組小鼠于照射后灌喂養(yǎng)血飲0.3ml。

2.3 骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)

接受7.0Gy照射的小鼠在照后第10天被斷頸處死，無菌條件下取每鼠后肢股骨1根，在2ml 1640培養(yǎng)液沖出其骨髓，并將骨髓單細(xì)胞懸液通過4號(hào)針頭，做有核細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.4 粒系造血祖細(xì)胞(CFU-G)測試方法

采用體內(nèi)擴(kuò)散盒瓊脂培養(yǎng)法。培養(yǎng)體系由199培養(yǎng)液、25%新鮮健馬血清、0.3%瓊脂和骨髓有核細(xì)胞組成。每個(gè)單面擴(kuò)散盒內(nèi)注入0.2ml(含104有核細(xì)胞)，待凝固后埋入在24h前經(jīng)環(huán)磷酰胺注射的(300mg/kg腹腔注射)昆明種小鼠腹腔內(nèi)。5d后取出擴(kuò)散盒，在低倍鏡下計(jì)算細(xì)胞集落，50個(gè)以上細(xì)胞組成的集落為1個(gè)CFU-G。

2.5 內(nèi)源性脾結(jié)節(jié)的計(jì)數(shù)

接受7.0Gy照射的小鼠在照后第10天被斷頸處死，取出脾臟置于苦味酸飽和溶液(Bouin氏固定液)中固定6h，然后取出以肉眼計(jì)數(shù)脾凸面的灰白色圓形結(jié)節(jié)。

3 結(jié)果

3.1 元參組方對(duì)受照小鼠外周白細(xì)胞的作用(見表1)

3.2 元參組方對(duì)受照小鼠骨髓有核細(xì)胞含量的影響(見表2)

3.3 元參組方對(duì)受照小鼠骨髓粒系造血祖細(xì)胞的影響(見表3)

表1 元參組方對(duì)7.0Gy照射小鼠20天白細(xì)胞的影響

表2 元參組方對(duì)7.0Gy照射小鼠10d骨髓有核細(xì)胞含量的影響

表3 元參組方對(duì)7.0Gy照射小鼠10天骨髓粒系造血祖細(xì)胞(CFU-G)的影響

3.4 元參組方對(duì)內(nèi)源性脾結(jié)結(jié)節(jié)(CFU-S)的影響(見表4)

表4 元參組方對(duì)7.0Gy照射小鼠10d造血干細(xì)胞(CFU-S)的影響

3 討論

在前期的實(shí)驗(yàn)中，我們觀察了元參組方作用劑量和時(shí)間對(duì)造血系統(tǒng)影響［5，6］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)照國家衛(wèi)生部認(rèn)可的生白藥物“養(yǎng)血飲”，研究元參組方對(duì)照射后小鼠外周血白細(xì)胞的作用。表1、2表明，元參組方有明顯的促進(jìn)恢復(fù)作用，并能使受照小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)量明顯增加，其療效高于“養(yǎng)血飲”，表明元參組方確有保護(hù)骨髓核細(xì)胞、減輕放射損傷程度的作用。表3顯示，元參組方對(duì)受照小鼠的骨髓造血祖細(xì)胞有很好的保護(hù)作用，其療效也優(yōu)于“養(yǎng)血飲”，推測元參組方促使造血干細(xì)胞增殖和向粒系祖細(xì)胞和T淋巴祖細(xì)胞分化［6］。

小鼠全身照射亞致死量7～7.5Gy后，骨髓中部分存活的CFU-S遷移到脾臟形成結(jié)節(jié)(CFU-S)，這些CFU-S是屬于自身的，故稱為內(nèi)源性 CFUS［7］。表4的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠的 CFU-S數(shù)量明顯高于陰性及陽性對(duì)照組，表明元參組方能增加內(nèi)源性多能造血干細(xì)胞向脾臟轉(zhuǎn)移。雖然被亞致死劑量照射小鼠可殺死部分造血干細(xì)胞，但殘存的干細(xì)胞可能會(huì)由于元參組方的作用保留和恢復(fù)自我復(fù)制的能力。

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