伊犁貝母的生藥學(xué)鑒定Δ

王倩倩，譚 勇，張 芳，馬 英，張之慧

（1.石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆石河子832002；2.新疆特種植物藥資源省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆石河子 832002；3.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，新疆石河子832008）

伊犁貝母的生藥學(xué)鑒定Δ

王倩倩1＊，譚 勇1，2#，張 芳1，馬 英1，張之慧3

（1.石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆石河子832002；2.新疆特種植物藥資源省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆石河子 832002；3.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，新疆石河子832008）

目的：研究伊犁貝母的生藥學(xué)鑒別特征。方法：利用性狀、顯微、薄層色譜與紫外光譜鑒別法為該藥材進(jìn)行初步鑒定研究，并確立其鑒別特征。結(jié)果：確定了伊犁貝母的性狀、顯微、薄層色譜與紫外光譜鑒別特征。結(jié)論：本研究可為伊犁貝母的鑒別、開發(fā)利用與質(zhì)量控制提供依據(jù)。

伊犁貝母；性狀鑒別；顯微鑒別；薄層色譜鑒別；紫外光譜鑒別

伊犁貝母（Fritillaria pallidiflora Schrenk）為百合科貝母屬多年生草本植物，藥用部位為其干燥鱗莖。其主要成分為異甾體生物堿和苷，尤以西貝素和西貝素苷為主要有效成分，具有清熱潤肺、化痰止咳等功效[1]。伊犁貝母主要分布于新疆伊犁河流域，主產(chǎn)于伊寧、昭蘇、尼勒克等地。由于伊犁貝母具有產(chǎn)量高、生物堿含量在同類貝母中相對(duì)較高、抗病力強(qiáng)和藥材價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，因而備受人們關(guān)注[2]。近幾年因市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)因素，伊犁貝母的野生資源嚴(yán)重減少，品種摻雜情況增多，已影響其藥用價(jià)值。因此，筆者對(duì)伊犁貝母進(jìn)行生藥鑒定學(xué)研究，旨在為鑒別伊犁貝母和制訂相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)[3]。

1 儀器與試藥

DHG干燥-9240電熱恒溫鼓風(fēng)箱（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）；YD-1508B輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（浙江金華益迪醫(yī)療設(shè)備廠）；OPTEC奧特光學(xué)BK5000生物顯微鏡、Motic SFC-28生物顯微鏡及成像顯微系統(tǒng)（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司）。

西貝母堿對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110767-200504）；試驗(yàn)所用試劑均為分析純。伊犁貝母采自新疆伊犁州尼勒克縣烏拉斯臺(tái)鄉(xiāng)直屬村（海拔：1 438 m；北緯43°49′，東經(jīng)83°07′），伊犁貝母花為開花時(shí)采集，曬干備用，經(jīng)石河子大學(xué)藥學(xué)院成玉懷高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為真品。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀特征

伊犁貝母的鱗莖呈卵圓形或圓錐形，較大，高0.8～1.8 cm，直徑1～2.3 cm。表面淡黃色或類白色，稍粗糙，有時(shí)可見黃棕色斑點(diǎn)或斑塊。外層2枚鱗葉，心臟形或新月形，肥厚，近等大或一片較大，緊密抱合[4]。頂端稍尖，少有開裂?；课枷?。質(zhì)輕而疏松，斷面顆粒性，白色，微帶粉性。氣微，味微苦[5]。

2.2 顯微特征

2.2.1 根橫切面 根橫切面呈不規(guī)則圓形。從外向內(nèi)有表皮層、韌皮部與木質(zhì)部。表皮層由一層細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞較小且排列緊密。表皮層向內(nèi)，有大量形狀不甚規(guī)則的薄壁細(xì)胞。表皮細(xì)胞多破損，高倍鏡下可見草酸鈣結(jié)晶。無淀粉粒，無形成層。伊犁貝母根的橫切面見圖1。

2.2.2 鱗莖（一年生）橫切面 鱗莖橫切面呈橢圓形，鏡下可見大量淀粉粒。最外層有一層表皮，內(nèi)部細(xì)胞為淀粉粒，多為長(zhǎng)圓形、橢圓形，高倍鏡下臍點(diǎn)明顯。偶可見草酸鈣結(jié)晶。伊犁貝母鱗莖的橫切面見圖2。

圖1 伊犁貝母根的橫切面圖（200×）1.表皮層；2.薄壁細(xì)胞；3.韌皮部；4.木質(zhì)部Fig 1 Transverse section of root of F.pallidiflora（200×）1.cuticular；2.parenchyma；3.phloem；4.xylem

圖2 伊犁貝母鱗莖的橫切面圖（200×）1.表皮；2.薄壁細(xì)胞；3.淀粉粒Fig 2 Transverse section of bulb of F.pallidiflora（200×）1.epidermis；2.parenchyma；3.starch grain

2.2.3 莖桿橫切面 莖桿橫切面呈橢圓形。從外向內(nèi)有表皮層、韌皮部與木質(zhì)部。表皮層由一層細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞較小且排列緊密。表皮層向內(nèi)，有大量類圓形的薄壁細(xì)胞。無形成層。木質(zhì)部在中間，韌皮部環(huán)繞在木質(zhì)部周圍，形成周韌維管束。伊犁貝母莖桿的橫切面見圖3。

圖3 伊犁貝母莖桿的橫切面圖（200×）1.表皮層；2.薄壁細(xì)胞；3.韌皮纖維；4.韌皮部；5.木質(zhì)部Fig 3 Transverse section of stem of F.pallidiflora（200×）1.cuticular；2.parenchyma；3.phloem ray；4.phloem；5.xylem

2.2.4 葉橫切面 葉片的上下表皮由單層細(xì)胞構(gòu)成，下表皮有氣孔。葉肉組織主要為柵欄組織和海綿組織。海綿組織由一些不規(guī)則的薄壁細(xì)胞構(gòu)成，排列疏松。葉肉內(nèi)導(dǎo)管明顯，氣孔類圓形，不定式。伊犁貝母葉的橫切面見圖4。

2.2.5 粉末特征 （1）伊犁貝母鱗莖粉末：米黃色。①淀粉粒眾多，多為單粒，半復(fù)粒偶可見。形狀多為廣卵形、三角狀卵形、貝殼形或不規(guī)則形，較小端稍尖或作鳥喙?fàn)睿睆郊s60μm。臍點(diǎn)不甚明顯，呈點(diǎn)狀、人字狀或十字狀，位于較小端，層紋大多明顯而細(xì)密。復(fù)粒稀少，一般由2～4粒組成。半復(fù)粒偶可見，臍點(diǎn)2～4個(gè)。②導(dǎo)管有具緣紋孔和螺紋導(dǎo)管，直徑約50μm。③表皮細(xì)胞垂周壁增厚或連珠狀增厚，淡黃色，有的含細(xì)小類方形草酸鈣結(jié)晶。（2）伊犁貝母葉粉末：黃綠色。①氣孔類圓形，不定式，直徑35～60μm，副衛(wèi)細(xì)胞4～6個(gè)。②表皮細(xì)胞類長(zhǎng)方形，垂周壁微波狀彎曲，細(xì)胞內(nèi)含細(xì)小草酸鈣方晶、柱晶或簇狀結(jié)晶。③導(dǎo)管有具緣紋孔和螺紋，直徑約30μm。伊犁貝母的粉末特征見圖5。圖5 伊犁貝母的粉末特征（400×）

圖4 伊犁貝母葉的橫切面圖（200×）1.上表皮；2.上表皮柵欄組織；3.薄壁細(xì)胞；4.木質(zhì)部；5.下表皮柵欄組織；6.海綿組織；7.下表皮；8.氣孔Fig 4 Transverse section of leaf of F.pallidiflora（200×）1.upper epidermis；2 upper epidermis palisade tissue；3.parenchyma cell；4.xylem；5.lower epidermis palisade tissue；6.spongy tissue；7.lower epidermis；8.stomata

1.螺紋導(dǎo)管；2.具緣紋孔導(dǎo)管；3.淀粉粒；4.薄壁細(xì)胞；5.氣孔

Fig 5 Characteristicsof F.pallidiflora power（400×）

1.spiral vessel；2.bordered pit vessel；3.starch grain；4.parenchyma cell；5.stomata

2.3 薄層色譜（TLC）鑒別

取伊犁貝母的鱗莖、花（花的粉末特征與鱗莖的粉末特征大致相同，故前文省略）、葉粉末各5 g，加濃氨試液2 mL與三氯甲烷20 mL，振搖，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?.5 mL使溶解，作為供試品溶液。再取西貝母堿對(duì)照品，加三氯甲烷制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照TLC法[1]試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各2～4μL，分別點(diǎn)于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（8∶8∶3∶2）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，依次噴以稀碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉試液，日光下檢視。結(jié)果表明，伊犁貝母鱗莖、花的供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，有顯相同顏色且Rf值相同（Rf＝0.36）的棕色斑點(diǎn)，表明伊犁貝母的鱗莖、花中均含有西貝母堿；而伊犁貝母葉的供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上無斑點(diǎn)，故推斷伊犁貝母的葉中不含有西貝母堿。伊犁貝母的TLC見圖6。

圖6 伊犁貝母的TLC1.鱗莖；2.西貝母堿對(duì)照品；3.花；4.葉Fig 6 TLC of F.pallidiflora1.bulb；2.imperialine control；3.flower；4.leaf

2.4 紫外光譜鑒別

取伊犁貝母的鱗莖、莖稈、葉、花的粉末各0.5 g，加95%乙醇20 mL，浸泡過夜，濾過，取鱗莖濾液2.5 mL，置25 mL量瓶中，加95%乙醇至刻度，搖勻；分別取莖稈、葉、花濾液2.5 mL，置50 mL量瓶中，加95%乙醇至刻度，搖勻。在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描[6]。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，伊犁貝母鱗莖粉末提取液在204 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，莖桿粉末提取液在206.4 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，葉粉末提取液在207.8 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，花粉末提取液在212.4 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。伊犁貝母的紫外掃描圖見圖7。

3 討論

通過伊犁貝母的TLC圖發(fā)現(xiàn)，供試品色譜中，伊犁貝母的花與葉子有顯相同顏色且Rf值相同（Rf＝0.93）的黃綠色斑點(diǎn)，推測(cè)伊犁貝母的花與葉子中含有相同成分。

通過伊犁貝母的紫外掃描圖發(fā)現(xiàn)，伊犁貝母花、葉、莖稈與鱗莖的最大吸收波長(zhǎng)比較接近，都在205 nm左右，但吸光度有較大的差異，這可為伊犁貝母的紫外光譜鑒別提供參考依據(jù)。

伊犁貝母在新疆地區(qū)使用廣泛，具有多種藥理活性，近年來野生變家種發(fā)展較快。本研究不僅可為藥政藥檢部門和商品流通領(lǐng)域提供鑒定依據(jù)，也可為伊犁貝母規(guī)范化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：132、附錄34.

[2] 何心亮.伊貝母生物堿含量與種植年限的關(guān)系[J].中藥材，1988，11（4）：14.

[3] 王書軍，高文遠(yuǎn)，于 琳，等.百合科貝母屬藥用植物分類研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2007，32（16）：1 609.

[4] 李家實(shí).中藥鑒定學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1996：225-229.

[5] 唐生斌，唐小鵬.貝母類藥材的性狀鑒別[J].中藥材，2002，25（5）：321.

[6] 李冰嵐，陳宗良，朱 克，等.東貝母的生藥鑒定[J].中藥材，1999，22（1）：34.

Pharmacognosia Identification of Fritillaria pallidiflora

WANG Qian-qian，TAN Yong，ZHANG Fang，MA Ying
（College of Pharmacy，Shihezi University，Xinjiang Shihezi 832002，China）
TAN Yong
（Xinjiang Key Laboratory of Phytomedicine Resources，Ministry of Education，Xinjiang Shihezi 832002，China）
ZHANG Zhi-hui
（The First Affiliated Hospital of Medical College，Shihezi University，Xinjiang Shihezi 832008，China）

OBJECTIVE：To study pharmacognostic characteristics of Fritillaria pallidiflora.METHODS：The plant was identified by methods of characteristics，microscopic identification，TLC and UV to determine the identification characteristics.RESULTS：The characteristics，microscopic identification，TLC and UV feature of F.pallidiflora had been established.CONCLUSION：The study can provide reference for identification，development and quality control of F.pallidiflora.

Fritillaria pallidiflora；Property identification；Microscopic identification；TLC；UV

R282.5；R284

A

1001-0408（2012）43-4089-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.43.22

Δ新疆特種植物藥資源省部共建重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金資助項(xiàng)目；石河子大學(xué)青年骨干教師“263”項(xiàng)目（YX07011）；石河子大學(xué)科技服務(wù)項(xiàng)目（kjkfyzh2009-kjfw03）

＊碩士研究生。研究方向：生藥學(xué)及天然藥物活性成分。電話：0993-2057751。E-mail：wangqianqian106@163.com

#通訊作者：副教授。研究方向：生藥學(xué)及中藥資源。電話：0993-2057751。E-mail：xjtany@yahoo.com.cn

2011-11-04

2012-01-24）

Δ河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（10212144）

＊副教授，博士。研究方向：中藥成分的色譜研究與分析。電話：0311-66617320。E-mail：05fenghaiyan@mails.gucas.ac.cn