血清轉(zhuǎn)化生長因子-β1在特發(fā)性血小板減少性紫癜患兒中的變化及臨床意義

徐寶華 束 進(jìn) 季海娟 康裕斌 朱紅英

江蘇省鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院兒科，江蘇鎮(zhèn)江 212002

血清轉(zhuǎn)化生長因子-β1在特發(fā)性血小板減少性紫癜患兒中的變化及臨床意義

徐寶華 束 進(jìn) 季海娟 康裕斌 朱紅英

江蘇省鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院兒科，江蘇鎮(zhèn)江 212002

目的 探討血清中轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）在特發(fā)性血小板減少性紫癜患兒中的變化及臨床意義。 方法采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫（ELISA）定量測定方法檢測17例ITP患兒治療前后TGF-β1水平、血小板計數(shù)的變化，并與16例正常健康兒童血清TGF-β1、血小板計數(shù)水平進(jìn)行比較。 結(jié)果 ITP患兒血清TGF-β1水平均顯著高于正常對照組（P<0.01），ITP患兒治療前血清TGF-β1水平均高于治療后（P<0.01）；血清TGF-β1高者，治療過程中血小板計數(shù)恢復(fù)較慢。相關(guān)分析顯示：TGF-β1水平與患者血小板計數(shù)呈負(fù)相關(guān)，與骨髓內(nèi)巨核細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)（均P<0.01）。 結(jié)論 TGF-β1參與ITP的發(fā)病過程，其水平與血小板變化密切相關(guān)，可能與機(jī)體免疫機(jī)制異常有關(guān)。

特發(fā)性血小板減少性紫癜；轉(zhuǎn)化生長因子-β1；巨核細(xì)胞；兒童

特發(fā)性血小板減少性紫癜 （idiopathic thrombocytopeni purpura，ITP）是小兒時期常見的出血性疾病，目前認(rèn)為自身免疫機(jī)制異常是其發(fā)病的主要因素，但在血小板生成調(diào)控方面有無異常改變目前報道較少，筆者對此進(jìn)行相關(guān)研究，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

17例血小板減少性紫癜患兒來自于江蘇省鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院兒科，為2010年1月～2012年5月門診及住院患兒，男8例，女9例，年齡為18個月～12歲，中位年齡7歲。所有病例均符合WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)。16例健康體檢兒童作為正常對照，其中，男7例，女9例，年齡6個月～12歲，平均年齡7歲。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集特發(fā)性血小板減少性紫癜患兒開始治療前及治療4周后空腹外周靜脈血2 mL，以2 000 r/min的速度離心15 min，分離血清，-20℃冰箱保存，統(tǒng)一檢測TGF-β1，抗凝外周血用于血小板計數(shù)。對照組檢測血清TGF-β1、外周血血小板計數(shù)。治療前常規(guī)骨髓穿刺涂片檢查并進(jìn)行巨核細(xì)胞計數(shù)。

1.2.2 人血清TGF-β1的定量測定 正常對照者于體檢日早清晨空腹靜脈血6 mL，形成血凝塊后以2 000 r/min離心20 min，分離血清，于-80℃冰箱保存。血清TGF-β1水平采用酶聯(lián)免疫吸附法 （ELISA）檢測，檢測試劑盒為美國Bender Medsystems公司產(chǎn)品，操作時嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。

1.2.3 血小板、骨髓涂片巨核細(xì)胞計數(shù) 血小板計數(shù)通過全血細(xì)胞分析儀計數(shù)。骨髓涂片進(jìn)行伊紅染色，顯微鏡下進(jìn)行巨核細(xì)胞計數(shù)并分類。

1.3 臨床治療方案

血小板減少性紫癜患兒主要采用潑尼松進(jìn)行治療，部分輔以丙種球蛋白和 （或）濃縮血小板輸注。潑尼松用量為1.5 mg/（kg·d），分2次口服。 治療過程中，每周復(fù)查血小板計數(shù)2次，以了解患者血小板恢復(fù)所需時間。

1.4 統(tǒng)計方法

2 結(jié)果

2.1 血小板減少性紫癜患者治療前、后各指標(biāo)比較

采用配對資料t檢驗統(tǒng)計分析，各指標(biāo)間均有顯著差異，具體結(jié)果見表1。

表1 ITP患者治療前、后各指標(biāo)水平比較（±s）

表1 ITP患者治療前、后各指標(biāo)水平比較（±s）

注：與ITP治療后及正常對照組比較，★P<0.01

組別 例數(shù)（n） TGF-β1（pg/L）血小板數(shù)（×109/L）骨髓巨核細(xì)胞數(shù)ITP治療前ITP治療后正常對照組17 17 16 5.93±1.35★4.02±1.26 2.04±0.44 27.76±6.62★167.52±50.71 166.81±40.68 151.35±58.94--

ITP患兒治療前及治療后與正常對照組TGF-β1三指標(biāo)間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.01）。

2.2 各指標(biāo)間的相關(guān)性

ITP患者治療前，TGF-β1水平與患者血小板數(shù)呈負(fù)相關(guān)，與骨髓內(nèi)巨核細(xì)胞數(shù)（兒童骨髓巨核細(xì)胞數(shù)和分類正常值：總數(shù)為7～35）呈正相關(guān)（P<0.01）。血小板數(shù)和巨核細(xì)胞數(shù)呈負(fù)相關(guān)（P<0.01）。

2.3 ITP患者治療前血清TGF-β1水平與血小板恢復(fù)關(guān)系

以血小板數(shù)恢復(fù)到100×109/L為標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計患者恢復(fù)時所需時間，10例在2周內(nèi)血小板數(shù)恢復(fù)正常，7例患者在治療的第3、4周內(nèi)恢復(fù)正常。對不同恢復(fù)時間患者TGF-β1水平比較分析，遲恢復(fù)組 TGF-β1分別為（5.22±1.02） pg/L，早恢復(fù)組 TGF-β1分別為（3.19±0.43）pg/L。 兩組 TGF-β1水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

ITP患者以血小板減少為特征，多表現(xiàn)為巨核細(xì)胞生成血小板障礙。巨核細(xì)胞增殖、分化、成熟后生成血小板過程中受組織、細(xì)胞及細(xì)胞因子等多因素調(diào)控，細(xì)胞因子對巨核細(xì)胞和血小板的調(diào)節(jié)有重要作用[1]。其中TPO、IL-3、IL-6是正性調(diào)控因子，而 TGF-β1、PF4、TNF 等是負(fù)性調(diào)控因子[2]。 TGF-β1通過與巨核細(xì)胞表面TGF-β1Ⅲ型受體結(jié)合并抑制巨核細(xì)胞核內(nèi)有絲分裂和CFU-MK的形成參與血小板生成調(diào)節(jié)[3-4]，這種對血小板生成的負(fù)調(diào)控作用的發(fā)揮與TGF-β1相關(guān)的信號傳導(dǎo)途徑密切相關(guān)[5]。國內(nèi)學(xué)者發(fā)現(xiàn)[6]：急性ITP組與慢性ITP組TGF-β1均明顯高于健康對照組，且慢性ITP組明顯高于急性ITP組。本結(jié)果中ITP患者血清TGF-β1水平明顯升高，且與患者血小板計數(shù)呈負(fù)相關(guān)，反映了其負(fù)調(diào)控特征。但其與骨髓內(nèi)巨核細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)，這可能是由于其作用致巨核細(xì)胞分化成熟障礙所致，說明TGF-β1與該類患者發(fā)病密切相關(guān)。

對 ITP患者 PBMCs相關(guān)因子表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)[7]：IL-2、IFN-γ與IL-4、IL-5的mRNA表達(dá)水平的比率明顯升高，且Th1/Th2比率與血小板計數(shù)呈負(fù)相關(guān)。在急性期患者，PBMCs中TGF-β1表達(dá)水平被明顯抑制。對ITP患者外周單個核細(xì)胞TGF-β1低表達(dá)變化研究發(fā)現(xiàn)[8]，血小板計數(shù)低時其TGF-β1低表達(dá)；血小板計數(shù)升高后TGF-β1表達(dá)增加。發(fā)現(xiàn)ITP患者血小板升高大于150×109/L患者Th3相關(guān)因子TGF-β1表達(dá)水平較血小板在 （50～150）×109/L者及健康對照組明顯升高[9]，說明ITP患者的轉(zhuǎn)歸與TGF-β1水平密切相關(guān)。本研究結(jié)果還顯示：隨著臨床糖皮質(zhì)激素治療，血小板計數(shù)上升，患者的血清TGF-β1水平而下降。血小板遲恢復(fù)患者其血清TGF-β1水平較早恢復(fù)患者高，以上均說明ITP患者血清TGF-β1水平的變化與患者臨床治療的反應(yīng)性密切相關(guān)。

綜上所述，ITP患者存在TGF-β1表達(dá)異常，且TGF-β1表達(dá)水平與患者血小板恢復(fù)關(guān)系密切，與巨核細(xì)胞的分化、成熟有一定關(guān)系，可能在巨核細(xì)胞分化及血小板的生成中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，進(jìn)一步的研究對闡明ITP的發(fā)病機(jī)制，尤其是難治性ITP的治療有重要價值。

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The change and clinical significance of serum transforming growth factorβ1 in young idiopathic thrombocytopenic purpura patients

XU Baohua SHU Jin JI Haijuan KANG Yubin ZHU Hongying
Department of Pediatrics,Zhenjiang First People′s Hospital of Jiangsu Province,Zhenjiang 212002,China

Objective To discuss the change and clinical significance of serum transforming growth factor-beta1(TGF-β1)in young idiopathic thrombocytopenic purpura patients.Methods The levels of TGF-β1 and the the counts of platelet were quantitative detected with double antibody sandwich enzyme linked immune(ELISA)for 17 cases with ITP before and after treatment,and compared with 16 cases of normal healthy children.Results In children with ITP,the levels of serum TGF-β1 were higher than the normal control group significantly (P<0.01).The levels of serum TGF-β1 were higher in cases before treatment than after treatment(P<0.01).The counts of platelet recovery is relative slowly through treatment process in those cases with higher levels of serum TGF-β1.Correlation analysis showed that there were negative correlation between the counts of platelet and the level of TGF-β1 (P<0.01)and there were positive correlation between the counts of megakaryocytes and the the levels of TGF-β1 (P<0.01).Conclusion TGF-β1 participated in the pathogenesis of ITP process,and there are closely relationship between its levels and the counts of platelet.The reason may be that the body′s immune mechanism is abnormal.

Idiopathic thrombocytopenic purpura;TGF-β1;Megakaryocyte;Children

R725.5

A

1674-4721（2012）11（c）-0054-02

2012-08-31 本文編輯：林利利）