奧扎格雷鈉對(duì)腦缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用

龐保全

山東省菏澤市第二人民醫(yī)院，山東菏澤 274005

奧扎格雷鈉對(duì)腦缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用

龐保全

山東省菏澤市第二人民醫(yī)院，山東菏澤 274005

目的探討奧扎格雷鈉對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的腦保護(hù)作用。 方法 采用Longas法制備大鼠腦缺血再灌注模型，分別用奧扎格雷鈉（治療組）和0.9%氯化鈉注射液（對(duì)照組）腹腔注射。觀(guān)察大鼠腦梗死體積、神經(jīng)功能評(píng)分、細(xì)胞凋亡數(shù)和細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果治療組比對(duì)照組大鼠腦梗死體積明顯減小，神經(jīng)凋亡數(shù)較對(duì)照組顯著減少 （P＜0.01）。 對(duì)照組神經(jīng)功能評(píng)分為（2.83±0.75）分，治療組為（1.83±0.75）分，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。 3組細(xì)胞凋亡率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論 奧扎格雷鈉能明顯減小腦缺血的梗死體積，減輕腦缺血再灌注后的神經(jīng)損害，具有明顯的腦保護(hù)作用。

奧扎格雷鈉；腦缺血再灌注；神經(jīng)細(xì)胞；凋亡

急性缺血性腦損傷是非常復(fù)雜的病理生理過(guò)程，主要是缺血后能量代謝障礙。缺血性腦損傷是中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能受損的重要原因之一，是當(dāng)前防治腦血管疾病的熱點(diǎn)。奧扎格雷鈉是一種特異性血栓A2（TXA2）合成酶抑制劑，能降低TXA2濃度，促進(jìn)前列環(huán)素I2（PGI2）的生成，并維持二者間的平衡，還能選擇性地?cái)U(kuò)張血管，改善腦組織微循環(huán)和能量代謝，抗血小板聚集，有效地抑制血栓形成[1-3]。奧扎格雷鈉目前已廣泛用于治療缺血性腦血管病，本研究采用大鼠腦缺血再灌注病理模型，觀(guān)察奧扎格雷鈉對(duì)腦缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 材料

健康雄性Wistar大鼠84只，質(zhì)量210～270 g，由山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，隨機(jī)分為鹽水對(duì)照組（32只）、假手術(shù)組（20只）、奧扎格雷鈉治療組（32只），觀(guān)察3組僅缺血90 min（IR 0 h）和再灌注 24 h（IR 24 h）兩個(gè)時(shí)段的神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)和凋亡率。

1.2 方法

大鼠腦缺血再灌注模型制作及給藥 采用Longa Z等[4]報(bào)道的方法進(jìn)行改進(jìn)，術(shù)中室溫保持24℃。用大鼠大腦中動(dòng)脈線(xiàn)栓法（MCAO）制備腦缺血再灌注大鼠模型，具體操作如下：用6%水合氯醛（0.4～0.5 mL/100 g）腹腔內(nèi)注射麻醉，取頸部正中切口，暴露頸總動(dòng)脈，于其深處用細(xì)線(xiàn)穿住，分離頸內(nèi)外動(dòng)脈，于頸外動(dòng)脈切一小口，用插線(xiàn)插入至頸總動(dòng)脈，并下拉，由分叉處插入頸內(nèi)動(dòng)脈，然后收緊活結(jié)，松開(kāi)頸總動(dòng)脈夾，抽出深處的細(xì)線(xiàn)，縫合切口。栓塞2 h后進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)12 h的再灌注。假手術(shù)組僅分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，不阻斷血流[5]。腦缺血的大鼠麻醉清醒后，具備向左側(cè)轉(zhuǎn)彎，左前肢不能伸直為研究對(duì)象。假手術(shù)組大鼠栓子插入僅9 mm。治療組大鼠，于缺血前半小時(shí)和缺血后，分別向腹腔注射奧扎格雷鈉水溶液（2 mg/kg）各一次，假手術(shù)組及對(duì)照組腦缺血大鼠，均在相同時(shí)間點(diǎn)，分別向腹腔注射等量的0.9%氯化鈉注射液。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)

1.3.1 神經(jīng)功能評(píng)分 0分：無(wú)神經(jīng)損傷體征；1分：提尾時(shí)不能完全伸直對(duì)側(cè)前爪；2分：行走時(shí)向外側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分：站立時(shí)向?qū)?cè)傾斜；4分：不能行走，意識(shí)喪失。

1.3.2 細(xì)胞凋亡測(cè)定 在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，各組大鼠于評(píng)分后，分別取5只，麻醉處死。經(jīng)枕骨大孔撐開(kāi)顱骨，小心取處腦組織，迅速取出缺血邊緣區(qū)新鮮腦組織50 mg，置于5℃75%乙醇中處理，用流式細(xì)胞儀（FACS420，山東省腫瘤研究所）檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。細(xì)胞凋亡率=凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.3.3 腦梗死體積測(cè)定 在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)，治療組和對(duì)照組各取6只大鼠，麻醉后斷頭處死，迅速取腦，置于冰箱中0.5 h后，在額極后，每間隔2 mm，連續(xù)取5個(gè)冠狀腦切片，將切好的腦片立刻置于37℃2%紅四氮唑磷酸緩沖液中避光，恒溫孵育30 min，染色后，經(jīng)10%多聚甲醛液固定24 h后封片，用球積分析儀系統(tǒng)進(jìn)行分析，計(jì)算出梗死體積[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢測(cè)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠腦梗死體積與神經(jīng)功能評(píng)分比較

奧扎格雷鈉治療組和對(duì)照組大鼠腦組織有缺血性的梗死灶，和MCA支配區(qū)域一致，奧扎格雷鈉治療組大鼠腦梗死體積為（107.9±12.1） mm3，明顯小于對(duì)照組的（150.3±30.5） mm3（P＜0.05）。假手術(shù)組大鼠肢體無(wú)神經(jīng)損傷體征，神經(jīng)功能評(píng)分正常。對(duì)照組大鼠腦神經(jīng)功能評(píng)分為（2.83±0.75）分，奧扎格雷鈉治療組為（1.83±0.75）分，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。 見(jiàn)表 1。

表1 各組大鼠腦梗死體積及神經(jīng)功能評(píng)分比較（±s）

表1 各組大鼠腦梗死體積及神經(jīng)功能評(píng)分比較（±s）

注：“-”代表無(wú)數(shù)據(jù)

組別 腦梗死體積（mm3） 神經(jīng)功能評(píng)分（分）假手術(shù)組對(duì)照組治療組--150.3±30.5 107.9±12.1 2.83±0.75 1.83±0.75

2.2 各組神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)及凋亡率比較

在 0、24 h時(shí)，假手術(shù)組神經(jīng)細(xì)胞凋亡率分別為（3.5±1.3）%和（3.4±2.0）%；對(duì)照組為（9.2±2.2）%和（10.0±2.1）%；治療組為（6.1±1.1）%和（7.9±1.2）%。3 組神經(jīng)細(xì)胞凋亡率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。假手術(shù)組偶見(jiàn)凋亡細(xì)胞；對(duì)照組0 h出現(xiàn)凋亡細(xì)胞，24 h可見(jiàn)大量凋亡細(xì)胞；奧扎格雷鈉治療組在缺血中心邊緣也可見(jiàn)凋亡細(xì)胞，與對(duì)照組比較，明顯減少（P ＜ 0.01）。見(jiàn)表 2。

表2 各組大鼠腦缺血神經(jīng)細(xì)胞凋亡率及凋亡數(shù)比較（±s）

表2 各組大鼠腦缺血神經(jīng)細(xì)胞凋亡率及凋亡數(shù)比較（±s）

組別 細(xì)胞凋亡率（%）IR 0 h IR 24 h細(xì)胞凋亡數(shù)（個(gè)/高倍鏡）IR 0 h IR 24 h假手術(shù)組對(duì)照組治療組3.5±1.3 9.2±2.2 6.1±1.1 3.4±2.0 10.0±2.1 7.9±1.2 3.1±0.9 13.6±0.8 5.4±1.2 2.1±1.2 16.7±2.1 8.7±1.6

3 討論

腦血管疾病嚴(yán)重危害著人們的身體健康，缺血性腦血管病由于存在著高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率[6-8]，嚴(yán)重危及人們的生命健康，成為亟待解決的問(wèn)題之一。腦缺血再灌注會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的遲發(fā)型神經(jīng)元損傷，機(jī)制尚不清楚。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[9]證明，腦缺血造成的神經(jīng)損傷是多因素的，包括缺氧和啟動(dòng)神經(jīng)毒性級(jí)聯(lián)反應(yīng)。腦缺血再灌注時(shí)氧自由基尤其是超氧化陰離子過(guò)多造成組織損傷，血腦屏障破壞從而產(chǎn)生腦水腫，興奮氨基酸NMDA受體的神經(jīng)毒作用造成神經(jīng)元損傷[10-11]；后者涉及腦缺血再灌注后細(xì)胞死亡程序的激活。腦缺血再灌注損傷是一種受基因調(diào)控的自主控制性細(xì)胞死亡過(guò)程，細(xì)胞死亡中則以細(xì)胞凋亡為主。儲(chǔ)照虎等[12]研究提示，缺血再灌注24 h后的大鼠腦組織中，在缺血側(cè)可檢測(cè)到較多的凋亡細(xì)胞。凋亡細(xì)胞主要集中在腦缺血梗死灶的周?chē)氚祹^(qū)域，缺血中心僅見(jiàn)少量凋亡細(xì)胞。腦缺血再灌注后，缺血周?chē)氚祹^(qū)域神經(jīng)細(xì)胞的遲發(fā)性死亡方式為凋亡細(xì)胞。

腦缺血后，梗死周?chē)氚祹^(qū)域微血管增生的范圍和程度直接關(guān)系到缺血區(qū)域血流的改善，影響凋亡細(xì)胞的發(fā)展和神經(jīng)細(xì)胞生理功能的回復(fù)。為了有效地挽救腦缺血周?chē)氚祹^(qū)域神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)保護(hù)劑的研究成為重點(diǎn)，其通過(guò)保護(hù)受損神經(jīng)元以及促進(jìn)側(cè)支循環(huán)的建立而改善缺血癥狀。奧扎格雷鈉具有降低血液黏稠度，使血細(xì)胞稀釋或解聚的作用，使血栓的形成減少，阻止血栓進(jìn)一步延長(zhǎng)和擴(kuò)展，防止缺血性半暗帶周?chē)奈⒀ㄐ纬?，具有降血脂、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)等功能。臨床研究也已表明，奧扎格雷鈉具有很好的抗血栓形成作用，可改善血液的高凝狀態(tài)，使腦梗死區(qū)域血液供應(yīng)得到改善，從而有利于腦部側(cè)支循環(huán)的建立，使腦神經(jīng)功能得到最大程度的康復(fù)。奧扎格雷鈉為T(mén)XA2合成酶抑制劑，其對(duì)缺血腦組織的保護(hù)作用，可能與其對(duì)IL-6和TNF-α的調(diào)節(jié)有關(guān)[13]。TNF-α在缺血性腦損傷的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，腦缺血再灌注后，TNF-α表達(dá)增加，與腦損傷程度呈正相關(guān)，TNF-α還可刺激IL-6分泌增加，而IL-6可抑制TNF-α的分泌，減輕炎癥反應(yīng)，參與保護(hù)腦缺血造成的神經(jīng)損傷，而研究表明，奧扎格雷鈉能抑制TNF-α的表達(dá)，間接促進(jìn)IL-6的神經(jīng)保護(hù)作用，從而減輕腦損傷。本研究結(jié)果表明，奧扎格雷鈉治療組大鼠腦梗死體積小于對(duì)照組（P＜0.05），腦組織缺血改變明顯好于對(duì)照組。因此，說(shuō)明奧扎格雷鈉能減輕腦缺血局部的損傷，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)有直接保護(hù)作用。

對(duì)大鼠腦缺血再灌注后細(xì)胞凋亡觀(guān)察表明，奧扎格雷鈉治療組細(xì)胞凋亡數(shù)小于對(duì)照組，可見(jiàn)奧扎格雷鈉具有降低腦缺血后細(xì)胞凋亡的作用，抑制腦缺血再灌注后細(xì)胞凋亡是奧扎格雷鈉對(duì)缺血腦神經(jīng)的重要保護(hù)作用。減輕腦缺血再灌注后細(xì)胞凋亡，是治療腦缺血的重要環(huán)節(jié)，奧扎格雷鈉的神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用對(duì)腦缺血的防治具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1]馬瑛，靳學(xué)婷，方艷秋，等.奧扎格雷鈉對(duì)缺血再灌注大鼠腦海馬區(qū)細(xì)胞保護(hù)作用的研究[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2009，29（17）：2207-2209.

[2]李敬誠(chéng)，董為偉，傅雅谷.Sprague-Dawley鼠局部腦缺血后腦電功率譜及電位分布圖的研究[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1992，17（1）：38.

[3]鄧銀俠，高俊玲.腦缺血再灌注后細(xì)胞凋亡基因的研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2009，11（4）：134-136.

[4]Longa Z，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craninectomy in rats[J].Stroke，1989，20：84.

[5]李繼鋒，王舟，韓仲巖，等.腦梗死患者血及腦脊液中興奮性氨基酸遞質(zhì)的動(dòng)態(tài)觀(guān)察[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，1999，12（1）：21.

[6]王一沙，劉菲，郭婉姝.奧扎格雷鈉對(duì)急性腦梗死患者神經(jīng)功能及血清脂聯(lián)素水平的影響[J].實(shí)用藥物與臨床，2012，15（5）：79-80.

[7]鐘壽明.奧扎格雷鈉聯(lián)合血栓通粉針劑治療急性腦梗死的療效觀(guān)察[J].中外健康文摘，2012，9（5）：112-114.

[8]周吉民.奧扎格雷鈉聯(lián)合阿司匹林治療腦梗死的近期療效觀(guān)察[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2010，10（5）：58-60.

[9]程林，閔連秋，可紅.奧扎格雷鈉對(duì)局灶性腦缺血大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用[J].中國(guó)腦血管病雜志，2007，4（5）：228-233.

[10]鮑磊，張錚.腦缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2009，25（3）：487-489.

[11]劉蓮，余萬(wàn)桂，張道明，等.奧扎格雷鈉對(duì)大鼠局灶性腦缺血的保護(hù)作用[J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2006，3（4）：243-245.

[12]儲(chǔ)照虎，吳家冪，劉富東，等.大鼠局灶性腦缺血再灌流損傷時(shí)神經(jīng)細(xì)胞凋亡及其調(diào)控基因的表達(dá)[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，2000，13（3）：134.

[13]顧昊，張穎冬.腦梗死中神經(jīng)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制與治療展望[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2011，5（18）：5397-5399.

The protective effect of ozagrel sodium on neurocyte after cerebral ischemia reperfusion

PANG Baoquan
The Second People's Hospital of Heze City in Shandong Province,Heze 274005,China

Objective To investigate the protective effect of ozagrel sodium on brain after cerebral ischemia reperfusion in rats.Methods The Longas method was used to make cerebral ischemia reperfusion model of rats,and the rats were given intraperitoneal injection of ozagrel sodium(treatment group)and normal saline(control group)respectively.The volume of cerebral infarction,neural deficit scores,the number of cell apoptosis and the cell apoptosis rate of rats were observed.Results The volume of cerebral infarction of treatment group was significantly decreased than that of control group,and the number of cell apoptosis was significantly reduced than that of control group (P<0.01).The neural deficit scores were(2.83±0.75)points in the control group,and (1.83±0.75)points in the treatment group,there were significant differences between the two groups(P<0.05).The differences of cell apoptosis rates among the three groups were statistically significant(P<0.01).Conclusion Ozagrel sodium can obviously decrease the volume of cerebral infarction of cerebral ischemia,lighten the nerve damage after cerebral ischemia reperfusion,which has significant cerebral protection effects.

Ozagrel sodium;Cerebral ischemia reperfusion;Neurocyte;Apoptosis

R743

A

1674-4721（2012）11（c）-0012-03

2012-07-23 本文編輯：陳 ?。?/p>