微粉化對馬錢子溶出度的影響

楊 瑛，王宇紅，蔡光先，楊 惠，孟 盼，尹玲桃

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥藥理（心血管）實驗室，湖南 長沙410007；3.湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國家重點實驗室培育基地，湖南 長沙410208）

馬錢子為馬錢科植物馬錢Strychons nux-vomica L.或云南馬錢Strychnos pierriana A.W.Hill 的干燥成熟種子，屬于常用的有毒中藥?，F(xiàn)代研究表明，馬錢子主要作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有興奮作用，還作用于心血管、呼吸、消化系統(tǒng)，并有較強(qiáng)的抗腫瘤作用[1]。士的寧與馬錢子堿為馬錢子的主要藥理與毒理活性成分。前期試驗結(jié)果表明，微粉化后馬錢子粉的最小起效劑量減小，藥理效應(yīng)增強(qiáng)[2]，其原因有待進(jìn)一步探討。鄒龍[3]曾對馬錢子超微粉體和常規(guī)粉體中馬錢子堿在重蒸餾水中溶出進(jìn)行比較。本文則重點考察微粉化處理相對粗粉中士的寧、馬錢子堿兩種主要成分在模擬體內(nèi)環(huán)境的兩種溶出介質(zhì)中溶出量、溶出速率的影響，為微粉化技術(shù)在馬錢子中的應(yīng)用及安全性與有效性評價，提供理論基礎(chǔ)與試驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

BFMT-6BI 型貝利粉碎機(jī) （濟(jì)南倍力粉體技術(shù)有限公司產(chǎn)品）；ZRS-8G 智能溶出試驗儀 （天津大學(xué)無線電廠）；Waters2695 高效液相色譜儀，Waters2998 PDA 檢測器，Empowder2 數(shù)據(jù)處理軟件；CP225D 型電子天平（賽多利斯）；FE20 型酸度計（梅特勒）；Winner 3001 干粉激光粒度測定儀 （濟(jì)南微納儀器有限公司）；AWL-6000-U 型實驗室微量無機(jī)型超純水機(jī)。

1.2 藥品與試劑

馬錢子中藥材由湖南春光現(xiàn)代中藥有限公司提供，經(jīng)檢驗符合《中國藥典》2010年版馬錢子項下的有關(guān)規(guī)定。采用同一批制馬錢子制備成1 號粉體樣品 （粗粉）、2 號粉體樣品 （超微粉），批號分別為C20100328、W20100328；士的寧對照品 （批號：110705-200306）；馬錢子堿對照品（批號：110706-200505），均購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用。

乙腈為色譜純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），水為實驗室自制超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同粒徑馬錢子粉體制備

取制馬錢子約1 000 g，40～50 ℃干燥，分為2份，一份用普通粉碎機(jī)粉碎成粗粉（全部能通過二號篩），混有能通過四號篩的不超過40%（編為1 號粉體樣品），另一份用貝利粉碎機(jī)粉碎成D50 為14.02 μm （編為2 號粉體樣品）的超微粉。

2.2 HPLC 測定[4]

參照 《中國藥典》2010年版一部馬錢子項下HPLC 含量測定，色譜條件：C18Inertsil ODS-2 色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相：A=乙腈，B=0.2%甲酸，采用線性梯度洗脫：0～15 min，8%A；15 ～25 min，8%～10%A；25 ～40 min，10%～70%A；40～45 min，70%～95%A；45～55 min，95%A；55～60 min，95%～8%A。檢測波長254 nm。理論板數(shù)按士的寧峰計算應(yīng)不低于5 000。流速1.0 mL/min，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量10 μL，洗脫時間60 min。見圖1。

圖1 馬錢子HPLC 圖譜

2.3 溶出度試驗[5]

2.3.1 不同介質(zhì)的溶出度測定 參照《中華人民共和國藥典》2010年版二部溶出度測定法漿法，以脫氣處理的人工胃液、人工腸液900 mL 為介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度（37.0±0.5）℃，測定溶出度。精密稱定馬錢子1 號粗粉和2 號超微粉各5 g，放入裝有已恒溫介質(zhì)的溶出杯中，運轉(zhuǎn)儀器，開始計時，分別 在 1、2、3、5、10、15、20、30、40、50、60 min 和240 min 取樣5 mL，用0.45 μm 濾膜濾過，取續(xù)濾液，每次取樣后均向溶出杯中補(bǔ)充相同溫度和體積的水。計算不同時間馬錢子堿、士的寧的累積釋放量。結(jié)果見圖2～3。

圖2 馬錢子超微粉與粗粉在人工胃液中（E）及人工腸液中（D）的馬錢子堿的體外溶出折線圖

圖3 馬錢子超微粉與粗粉在人工胃液中（F）及人工腸液中（G）的士的寧的體外溶出折線圖

2.3.2 溶出度測定結(jié)果評價 將馬錢子超微粉與其粗粉在人工胃液和人工腸液各時間點馬錢子堿和士的寧的累積溶出率分別按零級動力學(xué)模型、Weibull分布、Higuchi 分布[6]、Hixson-Crowell[7]分布曲線進(jìn)行擬合，結(jié)果表明，馬錢子超微粉與其粗粉在人工胃液和人工腸液中馬錢子堿和士的寧的溶出曲線均比較符合Weibull 分布。結(jié)果見表1。

根據(jù)Weibull 分布用Casiofx.180p 擬合直線，提取溶出度參數(shù)T50(藥物溶出50%所需時間)、Td(藥物溶出63.2%所需時間)、T90(藥物溶出90%所需時間)、m(溶出曲線斜率)，溶出度參數(shù)超微粉與粗粉比較，P＜0.01。結(jié)果見表2～3。

表1 馬錢子超微粉與粗粉在不同介質(zhì)中馬錢子堿和士的寧累積溶出度的Weibull 分布函數(shù)

表2～3 可知，經(jīng)T 檢驗分析，不同粒徑馬錢子粉中士的寧、馬錢子堿的溶出參數(shù)間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。其超微粉組與粗粉組間比較，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。Weibull 分布中形態(tài)參數(shù)（T50、Td、m）表明其超微粉的溶出速率大于粗粉組。

3 討論

本文研究結(jié)果表明，馬錢子超微粉在人工胃液和人工腸液中溶出效率均高于其粗粉組，馬錢子超微粉的溶出度大于其粗粉，且馬錢子堿與士的寧的溶出是相平行的。馬錢子超微粉中士的寧和馬錢子堿溶出參數(shù)T50、Td、m 等均顯著下降，與粗粉比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)果提示，超微粉體技術(shù)能顯著提高馬錢子中主要化學(xué)成分士的寧、馬錢子堿的溶出速率，經(jīng)20 min 后二者溶出度均達(dá)到90%以上，說明微粉化未造成馬錢子主要有效成分的丟失。

表2 人工腸液中馬錢子超微粉與粗粉的溶出度參數(shù) （±s，n=5）

表2 人工腸液中馬錢子超微粉與粗粉的溶出度參數(shù) （±s，n=5）

注：與粗粉組比較*P＜0.01。

溶出參數(shù)T50(min)Td(min)T90(min)m馬錢子堿超微粉 粗粉0.378 8±0.012 9* 19.430 1±0.030 1 1.329 9±0.014 3* 44.534 1±0.012 0 19.502 8±0.031 0* 249.116 0±0.033 0 0.240 0±0.012 4* 0.352 9±0.013 9士的寧超微粉 粗粉0.393 3±0.012 6* 20.837 9±0.011 0 1.313 2±0.011 0* 44.958 0±0.022 9 17.630 0±0.032 2* 229.950 7±0.032 6 0.246 4±0.012 9* 0.380 6±0.013 2

表3 人工胃液中馬錢子超微粉與粗粉的溶出度參數(shù) （±s，n=5）

表3 人工胃液中馬錢子超微粉與粗粉的溶出度參數(shù) （±s，n=5）

注：與粗粉組比較*P＜0.01。

溶出參數(shù)T50(min)Td(min)T90(min)m馬錢子堿超微粉 粗粉0.318 3±0.033 6* 20.530 6±0.034 8 1.247 3±0.041 4* 43.314 1±0.013 0 20.596 5±0.020 9* 220.303 0±0.021 6 0.222 6±0.032 6* 0.387 1±0.010 7士的寧超微粉 粗粉0.450 4±0.034 1* 20.761 5±0.025 4 1.408 5±0.015 6* 46.022 6±0.013 0 20.812 3±0.012 9* 241.822 8±0.026 7 0.244 8±0.012 0* 0.370 5±0.013 1

微粉化后馬錢子中士的寧與馬錢子堿的溶出量與溶出速率大幅度提高，為使用馬錢子提供了可參考的試驗依據(jù)，提示臨床應(yīng)用時應(yīng)密切關(guān)注其安全性。

[1]房 丹，劉 維，劉曉亞，等.馬錢子藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)雜志，2007，34(7)：1 018-1 019.

[2]王宇紅，莫韋皓，鄧東方，等.不同粒徑馬錢子粉對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的影響及安全性比較研究[J].中草藥，2012，43(4)：743-749.

[3]鄒 龍，桂 卉，黃世超，等.馬錢子超微粉體和常規(guī)粉體中馬錢子堿的溶出比較[J].中華中醫(yī)藥雜志，2009，24（2）：127-129.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S]北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010：47.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S]北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄XC.

[6]陸 彬.藥物新制劑與新技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：406-409.

[7]高聲傳，陳濟(jì)民.雙氯芬酸賴氨酸鹽緩釋片的制備及初步穩(wěn)定性研究[J].中國藥房，2001，1(6)：340-341.