孟魯司特鈉片微生物限度檢查方法的驗(yàn)證

曲萍 仇麗霞 趙思俊

孟魯司特鈉片微生物限度檢查方法的驗(yàn)證

曲萍 仇麗霞 趙思俊

目的建立孟魯司特鈉片的微生物限度檢查法，并對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證。方法采用離心集菌加薄膜過濾法，沖洗量為500 ml。結(jié)果驗(yàn)證試驗(yàn)中各種菌的回收率均大于70%。結(jié)論該方法有效可行，可用于該品種的微生物限度檢查。

孟魯司特鈉片;微生物限度;方法驗(yàn)證;薄膜過濾

孟魯司特鈉片是一種口服有效的選擇性白三烯受體拮抗劑，適用于預(yù)防哮喘。為了更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文通過多次驗(yàn)證試驗(yàn)，建立了適宜的微生物限度檢查方法。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)樣品 孟魯司特鈉片(杭州默沙東制藥有限公司，規(guī)格10 mg)

1.2 試驗(yàn)菌株 枯草芽孢桿菌［CMCC(B)63501］、金黃色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、大腸埃希菌［CMCC(B)44102］、白色念珠菌［CMCC(F)98001］、黑曲霉［CMCC(F)98003］均購于中國食品藥品檢定研究院。

1.3 試藥 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(120419)、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(120220)、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基(120410)、改良馬丁液體培養(yǎng)基(101118)、膽鹽乳糖培養(yǎng)基(20110705)、MUG(120310)均購于中國食品藥品檢定研究院。

2 細(xì)菌計(jì)數(shù)、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證

2.1 菌液制備 接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至10 ml營養(yǎng)肉湯中，35℃培養(yǎng)18 h，采用10倍遞增稀釋法，使菌數(shù)約為50～100 cfu/ml。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至10 ml改良馬丁培養(yǎng)基中，25℃培養(yǎng)24 h，采用10倍遞增稀釋法，使菌數(shù)約為50～100 cfu/ml。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，25℃培養(yǎng)5 d，加3～5 m l0.9%無菌氯化鈉溶液洗下霉菌孢子，采用10倍遞增稀釋法，使孢子數(shù)約為50～100 cfu/ml［1］。

2.2 方法

2.2.1 常規(guī)法 供試液制備：取本品10 g，加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨無菌緩沖溶液(45℃)至100 ml，振搖，使成1∶10的供試液，備用。試驗(yàn)組：取供試液1 ml于培養(yǎng)皿中，加入1 ml制備好的菌液，按《中國藥典》2010年版微生物限度菌落計(jì)數(shù)方法測定菌落數(shù)。菌液組：分別取制備好的菌液1 ml于培養(yǎng)皿中，計(jì)數(shù)。供試品對(duì)照組：取供試液1 ml于培養(yǎng)皿中，計(jì)數(shù)。進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，分別計(jì)算回收率，測定結(jié)果見表1。

表1 回收率結(jié)果(常規(guī)法)

結(jié)果表明，白色念珠菌和黑曲霉的回收率高于70%，而金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌2種試驗(yàn)菌的回收率低于70%，所以孟魯司特鈉片的霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)可以采用常規(guī)法進(jìn)行檢查，而細(xì)菌計(jì)數(shù)不可以采用常規(guī)法進(jìn)行檢查。

2.2.2 薄膜過濾法 供試液制備：取供試品10 g，加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨無菌緩沖溶液(45℃)至100 ml，溶解，使成1∶10的溶液。取10 ml，500轉(zhuǎn)/min離心3 min，取上清液，補(bǔ)至10 ml即得供試液。

試驗(yàn)組：取供試液1 ml，注入50 m l 0.9%無菌氯化鈉溶液(45℃)中，薄膜過濾，沖洗液為pH7.0氯化鈉-蛋白胨無菌緩沖溶液(45℃)500 ml/膜，在最后一次沖洗液中加入試驗(yàn)菌，過濾。取出濾膜，菌面朝上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，35℃培養(yǎng)。按《中國藥典》2010年版微生物限度菌落計(jì)數(shù)方法測定菌落數(shù)。

菌液組：分別取制備好的菌液1 ml于培養(yǎng)皿中，按《中國藥典》2010年版微生物限度菌落計(jì)數(shù)方法測定菌落數(shù)。

供試品對(duì)照組：操作方法同試驗(yàn)組，但不加試驗(yàn)菌，按《中國藥典》2010年版微生物限度菌落計(jì)數(shù)方法測定樣品中的本底菌數(shù)。

稀釋劑對(duì)照組：取稀釋液1 m l，注入50 ml0.9%無菌氯化鈉溶液(45℃)中，以下操作同試驗(yàn)組。

進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，分別計(jì)算回收率，測定結(jié)果見表2。

表2 回收率結(jié)果(薄膜過濾法)

結(jié)果表明，在3次平行試驗(yàn)中，采用薄膜過濾法檢驗(yàn)孟魯司特鈉片，人工加入菌液，稀釋劑對(duì)照組的回收率均高于70%，說明稀釋劑對(duì)測定無干擾。試驗(yàn)組回收率均高于70%，細(xì)菌計(jì)數(shù)可以采用薄膜過濾法進(jìn)行檢驗(yàn)。

3 控制菌檢查

供試液的制備：取本品10 g，加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨無菌緩沖溶液(45℃)至100 ml，振搖，使成1：10的供試液，備用。

試驗(yàn)組取供試液10ml加入膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml中，再加入10～100 cfu/ml大腸埃希菌1 ml，35℃培養(yǎng)24 h，取上述增菌液0.2 ml，接種至5 ml MUG培養(yǎng)基中培養(yǎng)5 h、24 h，在366 nm紫外線下觀察，同時(shí)用未接種的MUG培養(yǎng)基做本底對(duì)照。觀察后，沿培養(yǎng)管的管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)指示液，觀察液面顏色。

陰性菌對(duì)照組：方法同試驗(yàn)組，加入10～100 cfu/ml金黃色葡萄球菌1 m l代替大腸埃希菌。

結(jié)果：試驗(yàn)組檢出大腸埃希菌，陰性菌對(duì)照組未檢出金黃色葡萄球菌。

4 討論

孟魯司特鈉片有較強(qiáng)的抑菌作用，進(jìn)行微生物限度檢查時(shí)，細(xì)菌計(jì)數(shù)必須采用薄膜過濾法去除其抑菌作用，然后再進(jìn)行計(jì)數(shù)檢查，霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)可以直接采用常規(guī)法進(jìn)行檢查，控制菌采用常規(guī)法進(jìn)行檢查。

［1］國家藥典委員會(huì).中國藥典(二部).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：附錄 107-116.

Validation ofm icrobial lim it tests of m ontelukast sodium tablets

QU Ping，QIU Li-xia，ZHAO Si-jun.ShanxiMedical University，Taiyuan 030001，China

ObjectiveTo provide amethod of themicrobial limit test formontelukast sodium tablets and carry out the verification of themethod.M ethodsCentrifuging and filteringmethod was used，and washing quantity was500 ml.ResultsTest recoveries were over 70% .ConclusionItwas proved that themethod was and reliable，and it can be used for themicrobial limit test formontelukast sodium tablets.

Montelukast sodium tablets;Microbial limit test;Validation of themethod;Membrane-filter

030001 山西醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室(曲萍 仇麗霞);山西省食品藥品檢驗(yàn)所(曲萍 趙思俊)

仇麗霞