粗毛褐孔菌化學(xué)成分研究

楊修鎮(zhèn)

(山東省獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)所，濟(jì)南 250022)

粗毛褐孔菌(Xanthochrous hispidus(Bull.exfr.)Pat.)是多孔菌科褐孔菌屬藥用真菌，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用。為了綜合開(kāi)發(fā)利用該藥材，本實(shí)驗(yàn)對(duì)粗毛褐孔菌的乙醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分的系統(tǒng)分離。經(jīng)硅膠柱層析、大孔樹脂柱層析，Sephadex LH-20純化，得到5個(gè)化合物，經(jīng)理化性質(zhì)測(cè)定、光譜分析分別鑒定為羊毛甾二烯二醇(Ⅰ)、麥角甾醇(Ⅱ)、齒孔酸(Ⅲ)、D-阿拉伯糖醇(Ⅳ)、十八烷酸(Ⅴ)。各化合物均系首次從該藥材中獲得，它們的結(jié)構(gòu)見(jiàn)表1。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Nicolet 750傅立葉紅外光譜儀;UV3010紫外分光光度計(jì);AVANCE 400型核磁共振波譜儀。

?

1.2 材料 薄層層析用硅膠為青島海洋化工有限公司產(chǎn)品，柱層析用硅膠(100～200目)為青島化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，大孔樹脂為D101型，為天津海光化工有限公司產(chǎn)品。粗毛褐孔菌由山東省沂南縣真菌研究所提供，經(jīng)鑒定為多孔菌科褐孔菌屬粗毛褐孔菌Xanthochrous hispidus(Bull.exfr.)Pat.。

2 提取與分離

取粉碎后的粗毛褐孔菌藥材，加入5倍量95%乙醇回流提取三次，每次3 h，濾過(guò)，合并濾液，濃縮為浸膏。浸膏中拌入適量硅膠(100～200目)，干燥，粉碎，分別用石油醚、乙酸乙酯、甲醇索氏提取，得到不同的提取部位。石油醚提取部位經(jīng)硅膠柱層析分離，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，得到1個(gè)白色片狀結(jié)晶Ⅴ。乙酸乙酯提取部位經(jīng)硅膠柱層析分離，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫得到1個(gè)白色針晶Ⅱ和2個(gè)白色粉末Ⅰ與Ⅲ。甲醇提取部位經(jīng)大孔樹脂層析分離，Sephadex LH-20純化得到白色針晶Ⅳ。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物Ⅰ:白色粉末，mp 182～183℃，L-B反應(yīng)呈陽(yáng)性，表示此化合物可能為三萜或甾體類成分。1HNMR(CDCl3)譜在高場(chǎng)區(qū)可見(jiàn) δ 0.72、0.81、0.87、0.98和1.00 ppm處五個(gè)角甲基尖峰，這是四環(huán)三萜類的典型特征。0.95ppm處為20-CH31.65和1.74 ppm處分別為26-CH3和27-CH3兩個(gè)烯丙位的甲基。另外，可見(jiàn)3.24 ppm處C3-H，3.65 ppm 處 C22-H，5.17 ppm 處 C-24H。13CNMR(CDCl3)譜δ 79.00和73.42 ppm為C-3和 C-22信號(hào)。121.39、134.24、134.63和135.08 ppm存在四個(gè)烯碳信號(hào)。其13CNMR(CDCl3)譜與文獻(xiàn)報(bào)道的羊毛甾二烯二醇比較基本一致[1](表2)。綜上所述，可證實(shí)化合物Ⅰ為羊毛甾二烯二醇。

化合物Ⅱ:白色針晶，mp 165～169℃，L-B反應(yīng)呈陽(yáng)性，表示此化合物可能為三萜或甾體類成分。紫外光譜有特征的三吸收峰分別為271、282和294 nm，屬于三烯特征紫外吸收或環(huán)上共軛雙鍵，并且在263 nm左右還有一個(gè)肩峰，與文獻(xiàn)中報(bào)道的麥角甾醇紫外特征吸收一致[2]。1HNMR(CDCl3)譜在最高場(chǎng)0.5～1 ppm處有六個(gè)甲基峰，1～2.45 ppm處為甾體上CH2、CH質(zhì)子的堆積峰，分子中三個(gè)雙鍵共四個(gè)烯烴質(zhì)子的δ信號(hào)處于較低場(chǎng)，5.37和5.56 ppm分別為環(huán)內(nèi)雙鍵C6-H和C7-H，它們之間相互耦合分別呈單峰，5.17 ppm處為C22-H和C23-H，它們之間相互耦合后又分別與鄰位氫耦合，均呈四重峰。3.62 ppm處的多重峰為連有OH的C3-H的特征。13CNMR(CDCl3)譜 δ 139.796、119.609、116.309、141.372、135.585、131.997 ppm存在6個(gè)烯碳信號(hào)，其13CNMR(CDCl3)譜化學(xué)位移與文獻(xiàn)麥角甾醇比較基本一致[3](表3)。綜上所述，可證實(shí)化合物Ⅱ?yàn)辂溄晴薮肌?/p>

表3 化合物Ⅱ與麥角甾醇13CNMR數(shù)據(jù)比較(CDCl3，δppm)

續(xù)表

化合物Ⅲ:白色粉末，mp 290～294℃，L-B反應(yīng)呈陽(yáng)性，表示此化合物可能為三萜或甾體類成分。1HNMR(CDCl3)譜可見(jiàn) δ 0.76、0.81、0.89、0.97、1.00、1.06、1.25、3.22、4.68、4.76 ppm 處有吸收，其中0.76～1.25 ppm為7個(gè)甲基吸收，4.68和4.76處分別為C31上α、β不飽和H的吸收，與文獻(xiàn)報(bào)道的齒孔酸基本一致[5]，13CNMR(CDCl3)譜 δ 134.48、134.07 ppm為環(huán)上C-8和C-9的不飽和吸收信號(hào)，δ 155.21、106.82 ppm 為 C-24 和C-31的不飽和吸收，δ 180.26處為 -COOH上的 C吸收，其13CNMR(CDCl3)譜與文獻(xiàn)報(bào)道的齒孔酸基本一致[4](表4)。綜上所述，可證實(shí)化合物Ⅲ為齒孔酸。

表4 化合物Ⅲ與齒孔酸13CNMR譜數(shù)據(jù)比較(CDCl3，δppm)

續(xù)表

化合物Ⅳ:白色針晶，mp 100～104℃，1HNMR(MD3OD)譜表明化學(xué)位移為3.5～3.9 ppm，為與-OH相連的CH吸收，13CNMR(MD3OD)譜有五個(gè)信號(hào)峰分別為 71.70、71.07、70.60、63.61、63.64，與文獻(xiàn)報(bào)道的D-阿拉伯糖醇數(shù)據(jù)基本一致[5](由于與文獻(xiàn)選取的溶劑不同，故數(shù)據(jù)存在整體的漂移)，見(jiàn)表5所示。綜上所述，可證實(shí)化合物Ⅳ為D-阿拉伯糖醇。

表5 化合物Ⅳ13CNMR(MeOD，δppm)與D-阿拉伯糖醇13CNMR數(shù)據(jù)(D2O，δppm)比較

化合物Ⅴ:白色片狀結(jié)晶，mp 66～67℃，易溶解于石油醚、氯仿，難溶于乙醇、水。紫外光譜無(wú)吸收，示無(wú)共軛結(jié)構(gòu)。IR νKmBaxrcm-1:3414(O-H伸縮振動(dòng))，2918，2848(C-H 伸縮振動(dòng))，1701(C=O伸縮振動(dòng))，719顯示有(CH2)n，且 n≥4。質(zhì)譜m/z:284(M+)，256，241，185，129，73 顯示該化合物為長(zhǎng)鏈脂肪酸，推定化合物Ⅴ為十八烷酸。

[1]Kahlos K，Hiltunen R.3β -Hydroxy-lanosta-8，24-dien-21-al，A New Triterpene from Inonotus obliquus[J].Planta Medica，1984，50(2):197-199.

[2]Shaw W H C，Jefferies J P.The determination of ergosterol in yeast(Part 1)[J].Analyst，1953，78:509-514.

[3]胡海峰，朱寶泉，龔炳永.微生物來(lái)源的膽固醇生物合成酶抑制劑Ⅷ.抗生素SIPI-8917-Ⅴ的研究[J].中國(guó)抗生素雜志，1998;23(5):331-333.

[4]陳志輝，吳 萍，薛璄花，等.兩株多孔菌屬擔(dān)子菌菌絲體中的三萜成分[J].熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào)，2005，15(5):399-402.

[5]Jeanette G G，Williamm R.Altas of spectral data and physical constants for organic[J].2nd.Boca Raton:CRC Press，1975:185.?