不同消毒劑的殺菌效果試驗觀察

邱 梅，郝智慧，沈 巍，王英俊，劉元元，龐云露

（1.青島農(nóng)業(yè)大學化學與藥學院，山東 青島266111；2.青島康地恩藥業(yè)股份有限公司，山東 青島266061）

目前，畜禽業(yè)應用較多的是化學消毒劑，主要分為鹵素類（氯制劑、碘制劑、溴制劑）、醛類、酚類、醇類、氧化劑類、表面活性劑類、酸堿類等。其作用機理就是改變微生物賴以生存的環(huán)境，致使微生物的內(nèi)外結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，主要代謝機能出現(xiàn)障礙，生長發(fā)育受阻，從而喪失活性，失去致病力［1］。其中，過氧化物類消毒劑在畜禽養(yǎng)殖過程中應用較多，效果突出。

過硫酸氫鉀復合物是一種新型過氧化物類消毒劑，具有很強的氧化能力，其水溶液接近中性，比較適合各種水體消毒，溶解后產(chǎn)生各種高活性小分子自由基、活性氧等衍生物［2］，在水體中很少會形成有毒副產(chǎn)物［3］。因其具有非常強大而有效的非氯氧化能力，使用和處理過程符合安全和環(huán)保要求，因而被廣泛的應用于工業(yè)生產(chǎn)和消費領域。通常狀態(tài)下比較穩(wěn)定，當溫度高于65℃時易發(fā)生分解反應，比較活潑，易于參與多種化學反應，可作為氧化劑、漂白劑、催化劑、消毒劑、蝕刻劑等。

新型消毒劑－衛(wèi)克，其主要成分為過硫酸氫鉀復合物、氯化鈉等。為了解其殺菌性能，以杜邦衛(wèi)可消毒劑為對照，進行了實驗室殺菌效果觀察。

1 材料與方法

1.1 藥物 試驗藥物：衛(wèi)克（含量25%，批號：20110312，由青島康地恩藥業(yè)股份有限公司提供）；對照藥物：衛(wèi)可（含量25%，批號：VKNS100704，美國杜邦）。

1.2 菌株 大腸桿菌，為本實驗室臨床分離菌株。

1.3 消毒劑溶液的配制 衛(wèi)克消毒劑：按推薦使用方法，用硬水配制成濃度為1∶200、1∶400、1∶600、1∶800的試驗用溶液；衛(wèi)可消毒劑：按推薦使用量，用硬水配制成1∶400、1∶600、1∶800的試驗用溶液。

1.4 方法

1.4.1 懸液定量殺菌試驗［3］取消毒試驗用無菌小瓶，先加入0.5mL試驗用菌懸液，再加入0.5 mL有機干擾物質(zhì)（20%牛血清白蛋白），混勻，置20℃±1℃水浴中2、5、10、30min后，用無菌吸管吸取上述濃度消毒液（1.3項下配制的不同濃度消毒液）4.0mL注入其中，迅速混勻并立即記時。待試驗菌與消毒劑相互作用至各預定時間，分別吸取0.5mL試驗菌與消毒劑混合液加于4.5mL經(jīng)滅菌的中和劑中，混勻。各管試驗菌與消毒劑混合液經(jīng)加中和劑作用10min后，分別吸取0.2mL樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿即可。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可進行系列10倍稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。同時用稀釋液代替消毒液，進行平行試驗，作為陽性對照。

所有試驗樣本均在37℃溫箱中培養(yǎng)，對細菌繁殖體培養(yǎng)24h觀察最終結(jié)果。

1.4.2 有機物干擾殺菌試驗 采用懸液定量殺菌法，在20℃±1℃水浴中，不同濃度消毒劑溶液（衛(wèi)克：1∶200、1∶400、1∶600、1∶800，衛(wèi)可：1∶400）分別對含0%、25%、50%滅菌牛奶的菌液作用10、30min，觀察、計算其殺菌效果。

1.4.3 溫度對殺菌效果影響試驗 采用懸液定量殺菌法，不同濃度消毒劑溶液（衛(wèi)克：1∶200、1∶400、1∶600、1∶800，衛(wèi)可：1∶400）在不同溫度（13℃±0.3℃、22℃±2℃、30℃±2℃）水浴中對菌液作用10、30min，觀察、計算其殺菌效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 懸液定量殺菌結(jié)果 見表1。

表1 殺菌試驗結(jié)果

3次綜合試驗結(jié)果由表1可知，衛(wèi)克1∶200稀釋液分別作用2、5、10、30min均可將菌全部殺滅，達100.0%殺菌率；1∶400稀釋液作用10、30min可全部殺滅菌液；1∶600和1∶800稀釋液殺菌效果較差。衛(wèi)可1∶400作用10、30min可達100.0%殺菌率。通過1∶600和1∶800稀釋液的殺菌效果可以看出，衛(wèi)克和衛(wèi)可殺菌效果基本一致。

2.2 有機物干擾殺菌結(jié)果 見表2。

綜合3次試驗結(jié)果由表2可知，衛(wèi)克1∶200稀釋液作用10、30min對不同濃度有機物干擾菌懸液均能全部殺滅，1∶400稀釋液作用30min也能達到100.0%的殺菌率。各消毒劑稀釋液對含25%干擾物的菌懸液消毒效果比含0%和50%的差。

2.3 溫度對殺菌效果的影響試驗結(jié)果 見表3。

表3結(jié)果顯示，衛(wèi)克消毒劑1∶200稀釋度作用10、30min在高中低溫度下均能達到100.0%的殺菌率；1∶400作用30min均能全部殺滅；1∶600稀釋液在30℃±2℃下作用30min可達100.0%的殺菌率。衛(wèi)可1∶400稀釋液在22℃±2℃和30℃±2℃下作用10、30min殺菌率均為100.0%。兩種消毒劑不同作用濃度在22℃±2℃和30℃±2℃下的殺菌效果均好于13℃±0.3℃。

表2 有機物干擾殺菌試驗結(jié)果

表3 不同溫度對消毒劑殺菌效果影響

3 討論與結(jié)語

近年來隨著工業(yè)研制方法的改進，過硫酸氫鉀復合鹽的應用逐漸受到人們的關注。過硫酸氫鉀復合鹽分解后的產(chǎn)物硫酸鹽可通過人及動物的肝臟及泌尿系統(tǒng)排出體外，對環(huán)境無任何有害殘留。與過氧化氫、過氧乙酸等消毒劑相比，過硫酸氫鉀復合鹽晶體穩(wěn)定，易于保存和運輸，在任何使用場合均可現(xiàn)場配制，且對水質(zhì)無嚴格要求［4］。

其作用機制：與靶物接觸后釋放高活性過氧化自由基，進而破壞微生物膜的通透性，使蛋白質(zhì)變性，酶失活，DNA和RNA結(jié)構(gòu)斷裂，同時生成的硫酸鹽具有協(xié)助滲透作用，可作為皮膚消毒及治療的輔助藥劑。過硫酸氫鉀復合鹽不僅可以通過其氧化作用殺滅微生物，而且可以清除水中的有機物。

陽艷林等（2008）［5］研究顯示，以含過硫酸氫鉀1 250mg／L的該復合消毒劑溶液，對溶血性鏈球菌和多殺性巴桿菌作用2.5min，殺滅對數(shù)值＞5.00。用含過硫酸氫鉀1 250mg／L該消毒液，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作用5min，殺滅對數(shù)值＞5.00。用含過硫酸氫鉀835mg／L該消毒液作用15min，對大腸桿菌可達到完全殺滅。用含過硫酸氫鉀1 000 mg／L該消毒劑溶液作擦拭消毒并作用10min，對模擬現(xiàn)場物體表面上人工污染的大腸桿菌殺滅對數(shù)值＞3.0。將過硫酸氫鉀復合消毒劑密封儲存于37℃60d，其有效成分含量下降率為6.09%。

張躍華等（2005）［2］研究結(jié)果，其濃度為10～60 mg／L過硫酸氫鉀復合鹽對不同種類微生物懸液的作用5min，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的殺滅率均為100%，對白色念珠菌的殺滅率大于99.5%，此作用條件下未觀察到其對枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅作用；160mg／L過硫酸氫鉀復合鹽作用30 min，未見對乙肝病毒表面抗原的滅活作用。在一定作用條件下過硫酸氫鉀復合鹽對細菌繁殖體有良好的殺滅作用，對真菌也有一定的殺滅作用，但未見其對細菌芽孢及乙肝病毒表面抗原的滅活作用。

嚴曉玲（2007）［6］研究顯示，5%過硫酸氫鉀復合鹽水溶液25℃時有良好的殺菌作用，殺滅細菌的繁殖體需2min，作用15min可將細菌芽孢全部殺滅。作用30min可將HBsAg完全滅活。

研究結(jié)果表明，衛(wèi)克消毒劑1∶200（相當于1 250mg／L）稀釋液在室溫下作用2min即可將細菌全部殺滅，殺菌效果不受有機物和溫度影響；1∶400（相當于625mg／L）稀釋液在室溫下作用10min殺菌率可達100.0%，30min殺菌效果不受有機物和溫度影響；1∶600（相當于約416.7mg／L）稀釋液在室溫下作用30min殺菌率達99.8%，30℃±2℃下作用30min可達100.0%的殺菌率。同濃度（1 250 mg／L）下殺菌時間比陽艷林等（2008）的研究短。本產(chǎn)品具有很好的殺菌效果，高濃度消毒時不受有機物和環(huán)境溫度的影響，低濃度使用時可通過提高其作用時間和環(huán)境溫度來提高其消毒效果。

［1］馬賢坤，車娟娟.消毒滅源 健康養(yǎng)殖［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2007（5）：70－72.

［2］張躍華，趙永勛.過硫酸氫鉀復合鹽消毒作用實驗研究［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2005，9（1）：40.

［3］Virender S K .Potassiumfemate（VI）：an environmentally friendly oxidant［J］.Advances in Environmental Reserch，2002，2：143.

［4］中華人民共和國衛(wèi)生部，消毒技術規(guī)范（2002版）［M］.2002.

［5］陽艷林，于洪忠，徐輝.過硫酸氫鉀復合消毒劑殺菌效果觀察［J］.中國消毒學雜志，2008，25（2）：150－152.

［6］嚴曉玲.消毒劑過硫酸氫鉀復合鹽性能的實驗研究［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2007，11（4）：631，679.