HPLC測(cè)定郁舒顆粒芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷的含量

惠婷婷 夏忠庭 張?zhí)m蘭 周水平 天津中醫(yī)藥大學(xué)（天津300193）

郁舒顆粒由白芍、貫葉金絲桃等8味中藥組成，具有補(bǔ)益心腎、解郁安神的作用。方中君藥為白芍，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)，斂陰收汗，柔肝止痛，平抑肝陽(yáng)的功效［1］?，F(xiàn)代藥理研究表明，白芍中含有多種單萜苷類成分，且這些成分均有藥理活性［2］，其中白芍的主要成分芍藥內(nèi)酯苷與芍藥苷具有明顯的抗抑郁作用［3，4］。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法同時(shí)測(cè)定了郁舒顆粒中的兩種主要成分芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷，以期為建立該制劑科學(xué)合理的質(zhì)量控制方法提供依據(jù)。

1 儀器與試藥 Waters e2695型高效液相色譜單元，配Waters 2489型紫外檢測(cè)器，芍藥苷（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110736－200630）、芍藥內(nèi)酯苷購(gòu)自天津一方科技有限公司（純度98.5%，供含量測(cè)定使用），郁舒顆粒（批號(hào)201109120、批號(hào)201110130、批號(hào)201109126）天津天士力制藥股份有限公司提供，乙腈為色譜純?cè)噭?，水為超純水，其余試劑均為分析純?/p>

2 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB－C18（4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相采用二元體系，A為乙腈，B為0.1%磷酸溶液，梯度洗脫程序?yàn)?～20min，12%A～16%A；20～26min，16%～16%；流速：1mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm；柱溫：30℃。在該色譜條件下，芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷與其他成分有較好的分離。

3 方法與結(jié)果 3.1 供試品溶液的制備 取郁舒顆粒0.18g，精密稱定，于具塞錐形瓶中，精密加50%乙醇25mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷后，再稱定重量，用50%乙醇補(bǔ)足失重，搖勻，離心，取上清液，用微孔濾膜（0.22μm）濾過(guò)，即得。

3.2 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取對(duì)照品芍藥內(nèi)酯苷7.50mg，芍藥苷9.39mg分別于10mL容量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取對(duì)照品溶液芍藥內(nèi)酯苷2mL、芍藥苷4mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0.060mg／mL芍藥內(nèi)酯苷、0.151mg／mL芍藥苷混合對(duì)照品溶液。

3.3 陰性供試品溶液 取按處方比例及制備工藝制備不含白芍的陰性對(duì)照樣品，照“3.1”項(xiàng)下操作，同法制成陰性對(duì)照溶液。

3.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取混合對(duì)照品溶液4，6，8，10，12，15μL，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值（A）為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，計(jì)算芍藥內(nèi)酯苷回歸方程：Y＝1193X＋31.584，r＝0.9998，芍藥苷的回歸方程：Y＝1309.7X＋113.03，r＝0.9993，表明芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷分別在0.240～0.900μg，0.601～2.253μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測(cè)定峰面積。計(jì)算芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷峰面積的 RSD分別為0.97%（n＝6），0.88%（n＝6），表明精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品精密稱取6份，按上述方法與條件制備、測(cè)定。結(jié)果芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷峰面積的RSD分別為1.72%，1.78%。結(jié)果表明本測(cè)定方法重復(fù)性良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液分別在配制后0，2，4，6，12，24h各進(jìn)樣10μl，記錄色譜圖。計(jì)算樣品中芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷峰面積的RSD分別為0.52%（n＝6），0.49%（n＝6），說(shuō)明該供試品溶液在24h內(nèi)保持穩(wěn)定。

3.8 加樣回收率試驗(yàn) 取樣品6份各90mg，精密稱定，分別精密加入一定量的芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷混合對(duì)照品溶液（含芍藥內(nèi)酯苷0.75mg、芍藥苷1.88 mg），制備供試品溶液，測(cè)定各成分峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果芍藥內(nèi)酯苷的平均回收率為101.35%，RSD為2.63%；芍藥苷的平均回收率為100.34%，RSD為2.81%。

3.9 樣品測(cè)定 測(cè)定不同生產(chǎn)批號(hào)的三批樣品，按上述含量測(cè)定方法操作，配制樣品，測(cè)定峰面積，測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果（mg·g－1，n＝3）

4 討 論 4.1 提取溶劑及提取時(shí)間的選擇本實(shí)驗(yàn)考察了95%乙醇、100%甲醇、50%乙醇、50%甲醇及純水5種溶劑的提取效果，50%乙醇溶液效果最好；進(jìn)而考察了分別用10mL、25mL、50mL50%乙醇提取的效果，結(jié)果表明50%乙醇25mL提取時(shí)，樣品中待測(cè)指標(biāo)成分已提取較完全，從節(jié)省溶劑的角度考慮，選擇25mL50%乙醇提取。另外，本實(shí)驗(yàn)考察了加熱回流提取與超聲提取效果，兩者相差不大。超聲提取處理方法簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便，固選擇超聲提取。

4.2 白芍是郁舒顆粒的君藥 含有多種單萜苷類成分，且這些成分均有藥理活性［2］，其中芍藥內(nèi)酯苷與芍藥苷具有明顯的抗抑郁作用［3，4］，故測(cè)定這兩種成分，使其比僅單一測(cè)定芍藥苷更能有效控制其質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)所建方法簡(jiǎn)單易行、重現(xiàn)性好，可同時(shí)測(cè)定芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷兩種有效成分，為郁舒顆粒的質(zhì)量控制提供了一種新方法。

［1］Chen L，Qi J，Chang Y，et al.Identification and determination of the major constituents in Traditional Chinese Medicinal formula Danggui－Shaoyao－San by HPLC – DAD –ESI－MS／MS［J］.Journal of Pharmaceutical and Biomedical A－nalysis，2009，50（2）：127－137.

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