奶牛隱性乳房炎檢測方法的比較研究

張廣斌 （山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學院 山東 濰坊 261061）

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奶牛隱性乳房炎檢測方法的比較研究

張廣斌 （山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學院 山東 濰坊 261061）

本研究首先通過對選定奶牛場的隱性乳房炎的檢測，用目前廣泛用于奶牛隱性乳房炎檢測的LMT法、體細胞計數(shù)法、電導(dǎo)率檢測法、pH測定等方法進行比較，結(jié)果表明，在注意固定外界條件的前提下，四種方法檢測結(jié)果差異不顯著(P>0.05)，其中LMT法操作更方便，因而可以作為對奶牛隱性乳房炎進行流行病學調(diào)查的實際檢測方法。

隱性乳房炎 檢測方法 比較

奶牛隱性乳房炎發(fā)病率高，無明顯的臨床癥狀，隱蔽性較強，看不到乳汁和乳房變化，因此常被人忽視。但乳汁的生物化學、乳汁成分已發(fā)生變化，產(chǎn)奶量下降，奶品質(zhì)降低。其最大的危害是隨著病情的發(fā)展，會發(fā)展成臨床型乳房炎。因此，如能做到早發(fā)現(xiàn)就可盡早采取必要措施，控制病情的發(fā)展，把損失減少到最小程度。因而，隱性乳房炎的早期、快速、簡便可靠的診斷方法就顯得非常重要。

目前，已建立了用于奶牛隱性乳房炎早期快速診斷的多種方法，包括電導(dǎo)率值檢驗法、pH值檢測法、乳中體細胞直接記數(shù)法(以下簡稱SCC)和加州乳房炎檢測法(以下簡稱LMT)等。本研究對選定奶牛場的乳樣用不同檢測方法進行檢測，通過比較篩選流行病學調(diào)查的最佳檢測方法。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗?zāi)膛Ｉ綎|濰坊某奶牛場，共存欄200頭奶牛，選取非臨床型乳房炎的泌乳期健康牛130頭試驗用。

1.1.2 實驗儀器CON-2A數(shù)字電導(dǎo)率計(深圳產(chǎn))、Nucleo Counter體細胞計數(shù)器(意大利ChemoMetec公司生產(chǎn))、PHS-3CD型酸度計(深圳產(chǎn))。

1.1.3 隱性乳房炎診斷試劑 LMT診斷液，中國農(nóng)科院蘭州畜牧與獸藥研究所生產(chǎn)。

1.2 試驗方法

1.2.1 檢測方法 （1）乳樣采集：擠奶前用40℃左右0.02%~0.03%高錳酸鉀溫水溶液消毒手指，毛巾消毒后擰干備用。后用消毒濕毛巾擦拭乳頭和乳房。按摩乳房，將擠出的頭2~3把奶棄掉。用消毒滅菌后的三角瓶或試管，每個乳區(qū)取10ml混合后分兩份，各40ml左右，一份做pH值、電導(dǎo)率的測定，另一份送往實驗室做直接體細胞計數(shù)。（2）LMT檢測：用診斷盤分別接取4個乳區(qū)的乳汁，每個乳區(qū)取3~4ml，傾斜診斷盤到一個角度(約45°)，倒出多余的乳汁，使每個乳杯內(nèi)剩余乳汁2ml左右；用定量移液管在每個乳杯內(nèi)加入診斷液2ml，將診斷盤水平旋轉(zhuǎn)搖動，使乳汁與診斷液充分混合，30s內(nèi)根據(jù)凝集反應(yīng)程度進行判定，并以顏色反應(yīng)作為參考，具體判定方法見表1。奶牛各乳區(qū)均為“－”或“±”的為LMT陰性牛，其他則為陽性牛。診斷盤經(jīng)清水沖洗后再進行第2頭檢測。根據(jù)判定標準記錄結(jié)果。（3）電導(dǎo)率測定：每頭奶牛用4只50ml塑料燒杯，分別取4個乳頭的乳汁各約30ml，插入數(shù)顯溫度計和鉑黑電極(數(shù)顯溫度計和電導(dǎo)率儀操作方法按儀器說明書使用)，記錄溫度計的溫度和該溫度下電導(dǎo)率值與表2進行對照，確定4個乳頭是否患有隱性乳房炎。凡判定為可疑的牛奶次日進行重復(fù)檢測，若測得結(jié)果為陽性則記為陽性。（4）pH檢測：用酸度計對4個乳區(qū)乳樣進行測定，凡pH值大于6.8者判為隱性乳房炎陽性。（5）直接體細胞計數(shù)：根據(jù)儀器使用說明對樣品進行處理并用體細胞計數(shù)器進行檢測。判定標準：乳中體細胞超過50萬個/ml，即判定奶牛隱性乳房炎陽性[10]。

表1 奶牛隱性乳房炎LMT判定標準

注：分娩后1周內(nèi)或泌乳后期的母牛都會出現(xiàn)強陽性反應(yīng)，即初乳期和泌乳末期乳中體細胞數(shù)均出現(xiàn)生理性升高，故該法不適于檢查初乳期和泌乳末期的乳樣。

表2 電導(dǎo)率法判定奶牛隱性乳房炎標準 (ms/cm)

注：溫度上限是30℃，因樣品少，37℃乳樣很快就降到30℃以下；下限10℃已滿足，在冬天可能低于0℃。但還是建議在10~30℃范圍內(nèi)測定。

2 試驗結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果

通過對所檢奶牛場進行的隱性乳房炎檢測，其結(jié)果見表3。

表3 LMT法、pH值法、電導(dǎo)率值法和SCC檢測結(jié)果 (%)

2.2 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計表明，LMT法、pH檢測法、電導(dǎo)率值測定法檢測結(jié)果與SCC檢測結(jié)果差異均不顯著(P>0.05)。LMT法、pH檢測法、電導(dǎo)率值測定法檢測結(jié)果與SCC檢測結(jié)果符合率均為98.81%。

3 討論

（1）本研究通過用體細胞計數(shù)法、LMT法、pH檢測法、電導(dǎo)率值測定法四種常用方法對所選牛場進行檢測的結(jié)果表明，在注意固定外界條件的前提下，四種方法檢測結(jié)果無顯著差異。但是由于檢測手段不統(tǒng)一，判定標準不完全一致，檢測人員的主觀性等原因?qū)е聶z測結(jié)果出現(xiàn)不同。鄭浩等應(yīng)用上海乳房炎檢測法(SMT)檢測了南京某奶牛場88頭奶牛，以體細胞計數(shù)(SCC)作為隱性乳房炎判定基準，計算檢測結(jié)果與不同診斷閾值檢測結(jié)果的相符率，結(jié)果表明，以30萬個/ml為診斷閾值，檢測結(jié)果與診斷結(jié)果的相符率最高[26]。歐陽五慶等用BMT與SCC的乳區(qū)陽性符合率為97.67%[27]。（2）對奶牛隱性乳房炎的發(fā)病率進行較大范圍的流行病學調(diào)查，需選擇一種既準確，又簡單方便、快速的檢測方法，比較四種方法：體細胞直接鏡檢計數(shù)法需要對乳樣進行涂片的制備、染色和油鏡檢查，檢測必須在有條件的實驗室中進行，體細胞計數(shù)器價格比較昂貴。pH值檢測法可用酸度計或者用特制的試紙進行，但檢測結(jié)果可能會受到外界環(huán)境溫度、以及奶牛生產(chǎn)胎次等因素的影響，而出現(xiàn)較大誤差。電導(dǎo)率檢測法，除需要特定的儀器外，檢測結(jié)果也易受外界溫度等因素影響較大，不同時間、不同條件的檢測結(jié)果會出現(xiàn)較大的誤差。LMT檢測法，結(jié)果誤差較小，且較為方便快速，是進行流行病學調(diào)查的良好方法。

[1] 吳潤, 郝保青, 農(nóng)向等. 奶牛隱性乳房炎的主要病原菌的PCR鑒定[J]. 中國牛業(yè)科學, 2006, 32(2): 12-16.

[2] 揚章平, 王健等. 奶牛隱性乳房炎的發(fā)病規(guī)律的研究[J]. 中國奶牛, 1998 (1):18-21.

[3] 陳北亨, 王建辰. 獸醫(yī)產(chǎn)科學[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2000.

[4] 董德寬, 陸靜等. 關(guān)于牛乳中的體細胞[J]. 乳業(yè)科學與技術(shù), 2002, 100(3):18-23.

[5] 董德寬, 王文光. 乳牛高效生產(chǎn)技術(shù)手冊[M]. 上海: 上海科學技術(shù)出版社, 2004.

[6] 肖定漢. 奶牛病學[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)大學出版社, 2002, 205-239.

[7] 劉文進, 陳創(chuàng)夫, 張銀國等. 隱性乳房炎患牛乳汁pH值變化與體細胞數(shù)關(guān)系的研究[J]. 畜牧與獸醫(yī), 2005, 37(3): 9-11.

[8] 吳國娟, 蔣林樹. 無公害奶牛養(yǎng)殖技術(shù)與疾病防治[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)科學技術(shù)出版社, 2002: 93-95.

[9] 李力.簡介幾種奶牛隱性乳房炎快速診斷方法[J]. 寧夏農(nóng)林科技, 2005(2): 21-22.

[10] 唐淑珍, 李永鵬. 利用體細胞記數(shù)監(jiān)控奶牛乳房炎[J]. 奶牛保健, 1999(4): 45-46.

[11]] 田雨澤, 竇紅, 姚金良等. DHI(奶牛牛群改良)技術(shù)與應(yīng)用[J]. 中國奶牛, 2004(4): 33-35.

[12] 慶麥玉. 加拿大的DHI評價[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志, 1996, 15(1): 49-50

[13] 沈美英, 孫海洲, 盧德勛等. 利用CMT法評判乳中體細胞數(shù)及奶牛乳房炎[J]. 畜牧與飼料科學, 2005(2): 48-49.

[14] 朱平民, 陳惠珍, 蔣次升. 奶牛乳房炎診斷液(LMT)的研制[J]. 浙江農(nóng)業(yè)大學學報, 1984, 10(3): 261-284.

[15] 袁永隆, 張永欣, 侯新昭等. 奶牛乳房炎乳汁細菌的分離和鑒定程序[J]. 中國獸醫(yī)科技, 1991, 2.

[16] 郝建國, 梁淑萍. 日本學者對體細胞數(shù)與乳房炎關(guān)系的論述[J]. 中國奶牛, 2002(1): 52 -54.

[17] Marcus E. Kehrli, J R. Facter affecting milk somatic cells and their role in health of the bovine mammary gland[J]. DairySci, 1994, 77:619-627.

[18]Alan L Kelly. Effect of decreased milking frequency of cow sinlatelacatation on milk somatic cell count, polmy orphonuclear leucocytrnumbers, composition and prote olyticactivity[J]. Dairy Sci, 1998, 65:365-373.

[19] Yde Haas, H. W. Barkemaetal.Theeffect of pathogen specific clinical mastitis on the lactation curve for somatic cell count [J], Dairy Sci, 2001, 85:1314 -1323.

[20] R J Harmon. Physiology of mastitis and factors affecting somatic cell count [J]. Dairy Sci, 1994, 77:2103 -2112.

[21] A J Schepers, T J G M Lam. Estimation of variance component for omatic cell count to determine threshold for unifection quarter [J]. Dairy Sci, 1997, 80:1833-1840.

[22] G E Shook. Selection on somatic cells core to improve resistance to mastitis in the Unite States [J]. Dairy Sci, 1994.77:648-658.

[23] L M Berning and G E Shook. Prediction of mastitis using milk somatic cell count, N Acetyl β D Glucosaminidase, and lacose [J]. Dairy Sci, 1992, 75:1840-1848.

[24] Little, R.B. Plastridge, W.N Borine: Mastitis (Asymposinm) Lsted (see.Impression). Newyorkand London. 1946: 504.

[25] Little, R B Plastridge, W N Borine. Mastitis (Asymposinm) Lsted (see. Impression). Newyorkand London.1946, 504.

[26] 鄭浩, 高飛, 徐曄等. 應(yīng)用上海乳房炎檢測法檢測奶牛隱性乳房炎[J]. 畜牧與獸醫(yī), 2006, 38(1): 47-48.

[27] 歐陽五慶, 唐光武, 席文平等. 牛羊隱性乳房炎快速診斷法研究[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī), 1995, (5): 12-14.

（2012–04–17）

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