五味子總黃酮體外抗氧化活性及與構(gòu)效的關(guān)系

滕海峰 馬洪波 (吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林 吉林 132013)

五味子總黃酮體外抗氧化活性及與構(gòu)效的關(guān)系

滕海峰 馬洪波 (吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林 吉林 132013)

目的 探討五味子總黃酮體外抗氧化活性及其功效和結(jié)構(gòu)間的關(guān)系。方法 采用羥基自由基和連苯三酚自氧化法測(cè)定五味子總黃酮含量及其抗氧化活性。結(jié)果 五味子總黃酮具有一定的抗氧化活性，清除羥基自由基效果較好，并且清除效果隨五味子濃度增大而增強(qiáng)。結(jié)論食品中加入五味子總黃酮，可增加食品的抗氧化能力。

五味子;總黃酮;抗氧化;構(gòu)效

五味子(Schisandarchiennsis Bail)為木蘭科植物五味子的果實(shí)，多年生落葉藤本，植株可供觀賞，具有多種有效成分和多項(xiàng)藥理作用〔1～3〕。本研究采用兩種不同方法測(cè)定其抗氧化活性，并分析其功效和五味子結(jié)構(gòu)間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器廠);蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(F 20050930，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);所用試劑均為分析純。

1.2 五味子中總黃酮含量測(cè)定

準(zhǔn)確稱取五味子(購(gòu)于吉林市吉林大藥房，產(chǎn)地：寧夏)10.0 g于索氏提取器中，70%乙醇提取10 h，過濾，減壓濃縮至20 ml左右，等體積石油醚萃取，用70%乙醇定容至100 ml，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)紫外掃描，最大吸收波長(zhǎng)為280.5 nm。準(zhǔn)確量取提取液0.50 ml于25 ml錐形瓶中，加30%乙醇至12.5 ml，加入0.8 ml 5%NaNO2溶液，放置5 min;加0.8 ml 5%Al(NO3)3溶液，放置6 min;加5 ml 4%NaOH溶液，30%乙醇稀釋至刻線，放置10 min;于510 nm處測(cè)定吸收度A=0.323，代入回歸方程計(jì)算出總黃酮含量為7.929 mg/L。

1.3 自氧化最大吸收波長(zhǎng)的確定

取5.00 ml、50 mmol/L tris-HCl緩沖溶液與4.70 ml去離子水混合后在37℃水浴中保溫15 min;取出混合液，立即加入在37℃水浴中預(yù)熱的3 mmol/L連苯三酚0.3 ml，迅速搖勻倒入比色皿中在50～450 nm波長(zhǎng)下，分不同時(shí)間(3、5、7和9 min)掃描，找到鄰苯三酚自氧化積累的初始中間產(chǎn)物的最大吸收峰所對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)(λmax)。經(jīng)掃描確定測(cè)定波長(zhǎng)為320 nm。

1.4 超氧陰離子自由基清除率測(cè)定

容量瓶中加入5 ml Tris-HCl緩沖溶液，0.2 mmol/L樣品液4 ml，37℃恒溫預(yù)熱15 min;迅速加入預(yù)熱的連苯三酚1 ml，反應(yīng)4 min后加入0.5 ml濃鹽酸終止反應(yīng);在320 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度，并計(jì)算總黃酮對(duì)氧自由基的清除率E%。E%=1－(A1－A2)/A0×100%;A0：未加樣品的溶液吸收度;A1：未加連苯三酚的溶液吸收度;A2：加

UV-1200紫外可見分光光度計(jì)(北京光學(xué)入樣品和連苯三酚的溶液吸收度。

1.5 五味子總黃酮清除羥基自由基測(cè)定

取1 ml 0.75 mmol/L鄰二氮菲溶液于試管中依次加入2 ml 0.2 mmol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH6)和1 ml蒸餾水;充分混合均勻后，加入1 ml 0.75 mmol/L硫酸亞鐵溶液(FeSO4);混合均勻后，加入1 ml 0.01%過氧化氫(H2O2)于37℃水中1 h后，520 nm處測(cè)其吸光值，所測(cè)的數(shù)據(jù)為損傷管的吸光值A(chǔ)(損)。未損傷管以1 ml蒸餾水代替損傷管中1 ml 0.01%的H2O2操作方法同損傷管，測(cè)得未損傷管的吸光度值A(chǔ)(未)。樣品管以1 ml樣品代替損傷管中的1 ml蒸餾水，可測(cè)得樣品管的吸光值A(chǔ)(樣)。數(shù)據(jù)處理：d%=(A樣－A損)/(A未－A損)×100%。

2 結(jié)果

五味子中總黃酮具有一定的清除自由基能力，清除羥基自由基效果強(qiáng)于超氧自由基，且隨著濃度的增大而增強(qiáng)，濃度達(dá)100 μg/ml時(shí)，對(duì)超氧自由基的抑制率不再變化。見圖1。五味子總黃酮對(duì)超氧自由基和羥基自由基都具有明顯的清除作用，并且其清除率隨著總黃酮濃度的升高而增加。

圖1 五味子總黃酮超氧自由基及羥基自由基清除率

3 討論

五味子具有較強(qiáng)的抗氧化作用，能清除自由基，抑制過氧化脂質(zhì)形成，使心臟活動(dòng)增強(qiáng)。此外，五味子能降低血清膽固醇，增加腦和肝中蛋白質(zhì)含量，具有抗衰老作用〔4〕。自由基及其誘導(dǎo)的氧化反應(yīng)可引起組織的氧化損傷。其機(jī)制是自由基使組織的基本成分核酸、蛋白質(zhì)、氨基酸及多糖氧化而使組織的正常功能發(fā)生變化，造成組織的一系列病變。黃酮類化合物具有抗氧化活性主要是通過酚羥基與自由基反應(yīng)形成穩(wěn)定的半醌式自由基結(jié)構(gòu)，其抗氧化活性的強(qiáng)弱與羥基是否能形成穩(wěn)定的自由基結(jié)構(gòu)有關(guān)。黃酮類屬于多酚羥基化合物，因此在相連的羥基或羰基上的氧原子可以作為配位原子同金屬離子配合形成五元或六元的螯合物〔5〕。黃酮對(duì)金屬離子的螯合作用是其抗油脂氧化的反應(yīng)機(jī)制。B環(huán)上連二酚羥基的存在是決定其抗氧化活性的主要因素。B環(huán)上連位羥基的存在使一個(gè)羥基供氫氧化形成，并與連位的羥基形成分子氫鍵，使氧化后的物質(zhì)更穩(wěn)定，從而中斷自由基引起的鏈鎖反應(yīng)。

1 蔣新龍.紫葉酢漿草色素的提取及性質(zhì)研究〔J〕.食品科技，2006;31(5)：72.

2 高 雁，李 廷.五味子有效成分的藥理作用研究進(jìn)展〔J〕.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011;39(6)：104-6.

3 劉仁俊.五味子化學(xué)成分及藥理作用研究〔J〕.中醫(yī)中藥，2011;9(32)：169.

4 趙玉琪，殷麗君.沙棘葉黃酮的提取及其對(duì)抗氧化性的影響〔J〕.食品工業(yè)科技，2006;27(4)：70-2.

5 孟慶華，于曉霞，張海鳳，等.天然黃酮類化合物清除自由基機(jī)理及其應(yīng)用進(jìn)展〔J〕.云南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2012;21(2)：79-83.

TQ461

〕 A

〕 1005-9202(2012)22-4955-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.22.047

吉林省教育廳科研資助項(xiàng)目(No.2010527)

馬洪波(1969-)，男，碩士，副教授，主要從事慢性病的營(yíng)養(yǎng)防治研究。

滕海峰(1975-)，男，講師，主要從事慢性病的營(yíng)養(yǎng)防治研究。

〔2012-02-11收稿 2012-03-10修回〕

(編輯 曲 莉)