藏藥手參腎寶膠囊的毒理學(xué)研究

紅 梅 陳秋紅 劉有菊 王志瑾

（1 青海省藏醫(yī)藥研究院藥物研究所，青海 西寧 810003；2 青海高原醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所中心實(shí)驗(yàn)室，青海 西寧 810012）

藏藥手參腎寶膠囊由手參、冬蟲夏草、烈香杜娟等名貴藥材科學(xué)提取藏秘炮制而成。藏藥手參（又稱手掌參）為藏醫(yī)常用植物藥，藏藥名旺拉，始載于藏醫(yī)藥書《四部醫(yī)典》，有填精補(bǔ)髓、滋陰益氣、增強(qiáng)體質(zhì)的功效，在歷代藏醫(yī)藥著作《晶珠本草》《本草圖鑒》中均有記載[1]。冬蟲夏草是我國名貴中草藥，主要用于陽痿遺精、腰腿酸軟和腎功能衰竭等[2]。上述原輔料合用，從傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論分析，藏藥手參腎寶膠囊組方合理，對機(jī)體會(huì)產(chǎn)生補(bǔ)腎強(qiáng)體的作用。本文就其用藥的安全性，進(jìn)行了小鼠最大耐受實(shí)驗(yàn)及大鼠長期毒性實(shí)驗(yàn)給予初步評估，實(shí)驗(yàn)結(jié)果敘述如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥品與試劑

藏藥手參腎寶膠囊由金訶藏藥藥業(yè)提供，成年人常規(guī)用量0.01g/（kg?d）實(shí)驗(yàn)前加蒸餾水制成一定濃度的混懸液，置冰箱備用。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

KM種小鼠、體質(zhì)量18～22g，清潔級，均由青海省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號：青醫(yī)動(dòng)字第零零一號；wista大白鼠體質(zhì)量80～90g，由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號：0002400，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。

1.1.3 儀器

全自動(dòng)生化分析儀Olympas-au640（日本）、血細(xì)胞分析儀KX-21N（日本）、電子天平、離心機(jī)、石蠟切片機(jī)、顯微鏡（北航醫(yī)學(xué)圖象分析管理系統(tǒng)）等。

1.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

各項(xiàng)指標(biāo)均用組間比較進(jìn)行顯著性t檢驗(yàn)，所有劑量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)[3]

取健康昆明種小白鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為2組，分別為對照組和手參組。選用擬臨床實(shí)驗(yàn)的給藥途徑—灌胃（ig），以小鼠能夠耐受的最大濃度0.23g/mL、最大體積0.5mL的藥量24h內(nèi)連續(xù)3次給予小鼠，總劑量為17.25g/kg，相當(dāng)于臨床常規(guī)用藥劑量的1725倍，對照組ig等體積蒸餾水，給藥后檢測行為、外觀：毛色、尿色、糞便、活動(dòng)情況、飲水和飲食量及檢測給藥前后2周體質(zhì)量及抽取對照組和給藥組雌雄各4只，處死、解剖，肉眼觀察各臟器有無明顯病變，主要觀察各組織有無細(xì)胞變性、炎癥和腫瘤的發(fā)生等病理學(xué)改變，并對典型病變予以照相記錄。

1.2.2 長期毒性實(shí)驗(yàn)[4]

健康大白鼠128只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，分別為空白對照組，手參腎寶膠囊低劑量組（0.25g/kg）、手參腎寶膠囊中劑量組（0.5g/kg）和手參腎寶膠囊高劑量組（1g/kg）（該劑量相當(dāng)于臨床擬日用藥量的25、50、100倍）組，每組32只。ig給藥，每天1次，共90d，在給藥45d、90d和停藥15d每組各處死10只，腹主動(dòng)脈采血，檢測行為、外觀、毛色、尿色、糞便、活動(dòng)情況、飲水和飲食量、每周體質(zhì)量、相關(guān)血液指標(biāo)，觀察主要臟器的肉眼形態(tài)及病理組織學(xué)改變。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 小鼠最大耐受量

2.1.1 肉眼觀察

手參腎寶膠囊首次灌胃后2h后發(fā)現(xiàn)雌性2只小鼠均出現(xiàn)豎毛，精神萎靡不振，活動(dòng)減少，第二次給藥時(shí)發(fā)現(xiàn)雌性4只小鼠有輕微腹瀉，肛周少量污穢，末次給藥雌雄各2只有豎毛、精神不振，無死亡；次日轉(zhuǎn)為正常，未見其他明顯的異常反應(yīng)。連續(xù)觀察14d，小鼠外觀、行為、體質(zhì)量增長等均和對照組無明顯差異，未出現(xiàn)小鼠死亡情況，各組小鼠解剖經(jīng)肉眼觀察，給藥組小鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腸等臟器亦無明顯改變，和對照組相比無明顯差異。

2.2 大鼠長期毒性實(shí)驗(yàn)

2.2.1 手參腎寶膠囊對長毒大鼠行為、外觀、每周體質(zhì)量影響

通過90d的實(shí)驗(yàn)觀察表明，手參腎寶膠囊各組劑量組對大鼠的、毛色、尿色、糞便、活動(dòng)情況、外觀、飲水和飲食量、每周體質(zhì)量均無明顯影響，和對照組比較無明顯差異。

2.2.2 手參腎寶膠囊對長毒大鼠臟器比重的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、2、3。結(jié)果表明：手參腎寶膠囊給藥90d后高、中、低各劑量組臟器指標(biāo)均未見明顯改變，和空白對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 給藥45d大鼠臟器系數(shù)的變化（±s，n=10，g/100g）

表1 給藥45d大鼠臟器系數(shù)的變化（±s，n=10，g/100g）

臟器(g) 給藥45d對照組(n=10)高劑量(n=10)中劑量(n=10)低劑量(n=10)心 0.36±0.05 0.37±0.03 0.38±0.04 0.34±0.06肝 2.94±0.29 3.07±0.34 3.27±0.47 2.99±0.45脾 0.22±0.07 0.19±0.02 0.19±0.02 0.19±0.02肺 0.62±0.11 0.66±0.07 0.59±0.08 0.60±0.13腎(單體) 0.34±0.04 0.36±0.04 0.36±0.04 0.33±0.03腎上腺(單體)0.010±0.005 0.012±0.005 0.014±0.005 0.011±0.005大腦 0.79±0.17 0.86±0.12 0.81±0.15 0.80±0.13子宮 0.22±0.02 0.24±0.08 0.21±0.11 0.18±0.10卵巢(單體) 0.007±0.002 0.007±0.001 0.006±0.001 0.008±0.001睪丸(單體) 0.57±0.05 0.61±0.07 0.61±0.06 0.50±0.17附睪(單體)0.141±0.011 0.143±0.007 0.148±0.013 0.151±0.028

表2 給藥90d大鼠臟器系數(shù)的變化（±s，n=10，g/100g）

表2 給藥90d大鼠臟器系數(shù)的變化（±s，n=10，g/100g）

臟器(g) 給藥90d對照組(n=10)高劑量(n=10)中劑量(n=10)低劑量(n=10)心 0.36±0.05 0.34±0.06 0.34±0.02 0.34±0.05肝 2.83±0.24 2.77±0.47 2.81±0.29 2.72±0.40脾 0.20±0.02 0.19±0.03 0.18±0.02 0.18±0.02肺 0.52±0.06 0.51±0.06 0.51±0.07 0.56±0.19腎(單體) 0.32±0.03 0.31±0.04 0.30±0.01 0.31±0.02腎上腺(單體)0.011±0.004 0.010±0.003 0.010±0.002 0.009±0.003大腦 0.73±0.17 0.71±0.10 0.70±0.13 0.68±0.15子宮 0.33±0.17 0.16±0.05 0.24±0.15 0.23±0.00卵巢(單體) 0.010±0.002 0.008±0.001 0.008±0.002 0.007±0.001睪丸(單體) 0.51±0.04 0.44±0.13 0.52±0.02 0.53±0.10附睪(單體)0.17±0.01 0.15±0.02 0.17±0.00 0.17±0.02

表3 停藥15d大鼠臟器系數(shù)的變化（±s，n=10，g/100g）

表3 停藥15d大鼠臟器系數(shù)的變化（±s，n=10，g/100g）

臟器(g) 停藥15d對照組(n=10)高劑量(n=10)中劑量(n=10)低劑量(n=10)心 0.34±0.02 0.34±0.03 0.34±0.02 0.33±0.03肝 2.59±0.17 2.73±0.22 2.78±0.25 2.67±0.21脾 0.17±0.02 0.18±0.02 0.18±0.01 0.18±0.02肺 0.48±0.05 0.50±0.08 0.42±0.15 0.51±0.07腎(單體) 0.29±0.03 0.30±0.03 0.31±0.02 0.30±0.04腎上腺(單體)0.010±0.002 0.011±0.004 0.011±0.004 0.009±0.003大腦 0.69±0.10 0.70±0.14 0.72±0.11 0.70±0.11子宮 0.29±0.16 0.26±0.12 0.28±0.13 0.24±0.13卵巢(單體) 0.010±0.003 0.010±0.001 0.010±0.003 0.009±0.002睪丸(單體) 0.49±0.02 0.45±0.07 0.51±0.04 0.52±0.12附睪(單體)0.16±0.01 0.14±0.03 0.16±0.01 0.15±0.04

2.2.3 手參腎寶膠囊對長毒大鼠血液生化指標(biāo)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4、5、6、7。結(jié)果表明：手參腎寶膠囊給藥45、90d、停藥15d后高、中、低各劑量組血液生化、血象指標(biāo)均未見明顯改變，和空白對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）。

2.2.4 手參腎寶膠囊對長毒大鼠主要器官組織形態(tài)學(xué)的影響

藏藥手參腎寶膠囊給藥45d、90d和停藥15d對空白對照組及手參腎寶膠囊高、中、低劑量組各抽取3～4只大鼠（雌雄各半），分別取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、大腦、生殖器官（雌性：子宮、卵巢，雄性：睪丸、附睪）等組織塊用10%液體石蠟固定，經(jīng)石蠟包埋、顯微切片（厚4～6μm）、脫蠟水化、HE染色、梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固后，光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行組織學(xué)觀察。主要觀察如下：肺臟：各組大鼠絕大部分肺組織細(xì)支氣管及其周圍、肺泡內(nèi)和肺泡間隔未見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤；少部分肺組織肺泡間隔增寬，毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，可能因抓取動(dòng)物時(shí)所致；心、肝、脾、腎、腎上腺、大腦、生殖器與對照組比較無顯著性差異，未見異常。

表4 給藥45d、90d及停藥15d大鼠的血液生化指標(biāo)（±s）

表4 給藥45d、90d及停藥15d大鼠的血液生化指標(biāo)（±s）

別 時(shí)間 ALT(U/L)組AST(U/L)T-BIL(μmol/L)TP(g/L)A/G對照組給藥45d 51.80±7.51 178.40±29.90 0.63±0.24 58.04±3.36 0.72±0.08給藥90d 57.22±7.03 191.11±12.50 0.93±0.47 53.58±2.25 0.84±0.07停藥15d 53.60±8.14 190.30±15.05 1.07±0.41 56.03±1.88 0.82±0.12高劑量給藥45d 65.00±39.99 210.10±57.85 0.76±0.42 59.52±3.73 0.69±0.12給藥90d 52.00±4.08 161.70±48.76 0.78±0.27 55.09±2.90 0.74±0.17停藥15d 52.50±6.33 193.50±6.52 0.93±0.57 57.89±2.10 0.77±0.09中劑量給藥45d 49.78±6.46 186.22±21.59 0.80±0.62 54.68±2.73 0.71±0.12給藥90d 58.20±13.75 184.80±29.55 0.86±0.33 53.31±2.74 0.84±0.13停藥15d 61.80±17.41 188.00±21.33 1.27±1.01 57.15±3.89 0.82±0.15低劑量給藥45d 60.80±14.02 185.50±25.04 0.79±0.68 60.35±5.26 0.68±0.08給藥90d 54.60±5.58 183.24±12.24 0.65±0.25 53.04±7.99 0.91±0.44停藥15d 57.10±19.98 203.50±29.33 1.55±1.70 55.51±2.45 0.89±0.21

表5 給藥45d、90d及停藥15d大鼠的血液生化指標(biāo)（±s）

表5 給藥45d、90d及停藥15d大鼠的血液生化指標(biāo)（±s）

組別 時(shí)間 ALB(g/L)BUN(mmol/L)GLU(mmol/L)Cr(mmol/L)UA(μmol/L)對照組給藥45d 24.10±1.68 6.80±0.57 3.59±0.34 33.94±2.70 44.60±12.04給藥90d 24.31±1.01 6.95±0.79 3.68±0.79 36.33±4.33 53.22±24.73停藥15d 24.81±1.63 7.02±1.02 3.09±0.29 55.10±6.08 51.50±14.52高劑量給藥45d 23.99±1.52 7.01±0.59 3.61±0.55 35.53±4.05 53.90±16.53給藥90d 22.93±2.98 7.29±0.78 3.55±0.88 33.30±1.42 46.80±10.38停藥15d 25.03±1.62 6.62±0.66 3.25±0.46 57.90±3.90 54.50±12.91中劑量給藥45d 22.76±1.47 6.36±0.74 4.19±1.12 31.92±3.58 51.44±19.63給藥90d 23.84±1.72 6.72±0.98 3.21±0.64 34.70±4.24 58.60±31.85停藥15d 25.30±2.81 7.30±1.22 3.11±0.42 49.30±9.71 57.00±10.99低劑量給藥45d 24.54±2.18 7.00±1.11 5.31±1.56 35.81±4.00 71.20±28.60給藥90d 23.49±1.64 6.92±0.69 3.78±0.88 34.20±3.46 66.60±19.31停藥15d 25.68±2.84 7.86±0.56 2.90±0.89 64.20±35.6 62.70±26.09

表6 給藥45d、90d及停藥15d大鼠的的血象變化（±s）

表6 給藥45d、90d及停藥15d大鼠的的血象變化（±s）

組別 時(shí)間 WBC(109/L)RBC(1012/L)NEUT(%)LYM(%)MXD(%)對照組給藥45d 3.49±1.12 8.31±0.44 14.56±8.15 69.15±8.29 5.46±1.22給藥90d 3.17±0.91 8.82±0.44 11.82±11.23 72.43±5.06 3.25±3.30停藥15d 2.75±0.71 9.05±0.53 25.22±5.20 69.1±4.98 3.99±2.01高劑量給藥45d 4.22±2.16 8.62±0.47 16.33±9.51 72.09±4.40 5.92±2.84給藥90d 3.20±1.14 8.72±0.39 9.99±5.99 72.56±5.20 3.87±4.40停藥15d 3.70±1.61 9.13±0.36 23.77±5.79 70.36±6.92 4.57±1.98中劑量給藥45d 3.66±1.22 8.39±0.49 15.61±9.32 72.32±4.23 5.09±2.91給藥90d 3.63±0.82 8.79±0.32 15.11±9.65 72.88±4.70 3.75±3.16停藥15d 3.05±1.09 9.00±0.56 22.68±8.12 70.34±6.16 4.17±2.12給藥45d 3.31±1.17 8.62±0.74 15.96±11.69 73.17±7.62 3.45±2.50給藥90d 3.61±1.67 9.04±0.29 15.93±9.03 73.60±6.65 3.62±2.51停藥15d 3.11±1.16 9.02±0.63 24.37±6.01 72.55±3.93 4.58±1.44低劑量

3 討 論

本文觀察了藏藥手參腎寶膠囊最大耐受量為17.25g/kg，是臨床劑量的1725倍，連續(xù)觀察14d，小鼠外觀、行為、體質(zhì)量增長等均和對照組無明顯差異，未出現(xiàn)小鼠死亡情況，各組小鼠解剖經(jīng)肉眼觀察，給藥組小鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腸等臟器亦無明顯改變。

表7 給藥45d、90d及停藥15d大鼠的的血象變化（±s）

表7 給藥45d、90d及停藥15d大鼠的的血象變化（±s）

組別 時(shí)間 Hgb(g/L)HCT(%)MCHC(g/L)MCH(pg)Plt(109/L)對照組給藥45d 154.20±7.50 46.79±1.91 329.40±4.06 18.57±0.28 992.90±97.89給藥90d 159.30±7.38 46.68±1.96 341.10±4.43 18.06±0.39 908.90±77.76停藥15d 162.40±6.06 49.79±1.19 326.10±5.80 17.96±0.54 958.50±51.15高劑量給藥45d 159.70±7.79 48.85±2.94 327.10±7.02 18.54±0.23 929.20±51.87給藥90d 158.20±4.85 46.32±1.20 341.60±4.79 18.13±0.37 911.90±53.92停藥15d 163.50±4.43 50.36±0.93 324.60±4.17 17.91±0.32 961.90±30.95中劑量給藥45d 155.78±8.80 46.91±2.15 331.89±4.26 18.57±0.34 929.89±78.90給藥90d 159.50±4.30 46.23±1.26 342.61±2.87 18.16±0.44 925.20±65.02停藥15d 162.00±6.73 49.38±1.73 328.10±2.73 18.03±0.49 926.20±41.44低劑量給藥45d 160.40±13.08 47.64±3.67 331.00±4.81 18.65±0.23 854.00±293.51給藥90d 164.10±6.31 47.35±1.66 340.56±4.62 18.13±0.35 968.20±77.65停藥15d 161.90±9.27 49.50±2.31 327.10±4.25 17.97±0.40 896.30±85.98

長期毒性實(shí)驗(yàn)以藏藥手參腎寶膠囊每天按1g/kg、0.5g/kg、和0.25g/kg連續(xù)灌胃90d，大鼠生長發(fā)育良好，無死亡，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外觀、行為活動(dòng)、體質(zhì)量增長、主要臟器系數(shù)、血象、血液生化等指標(biāo)與空白對照組比較均無顯著性差異。對心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、大腦生殖器官（雌性：子宮、卵巢，雄性：睪丸、附睪）主要臟器組織結(jié)構(gòu)肉眼及光鏡檢查亦無異常發(fā)現(xiàn)。以上毒性實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示該藥毒性低，在用藥周期內(nèi)是安全的。

[1]中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所.中藥志[M].北京:人民衛(wèi)生出版社出版,1982:276.

[2]呂國楓,尚德靜,任延波.冬蟲夏草制劑的補(bǔ)腎壯陽作用研究[J].中國運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志,2004,23(2):193-195.

[3]《中藥、天然藥物急性毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組(SFDA文件).中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則,指導(dǎo)原則編號[Z].GPT2-1.2005:2.

[4]《中藥、天然藥物長期毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組(SFDA文件).中藥、天然藥物長期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則,指導(dǎo)原則編號[Z].GPT2-1.2005:3.