296例血清免疫固定電泳檢測(cè)結(jié)果分析

劉玉梅 黃琳淋 趙有利 石 翀

多發(fā)性骨髓瘤 （Multiple Myeloma，MM）屬造血系統(tǒng)腫瘤，是漿細(xì)胞異常過(guò)度增生所致的惡性腫瘤。異常漿細(xì)胞即骨髓瘤細(xì)胞浸潤(rùn)骨髓及軟組織，產(chǎn)生單克隆免疫球蛋白（M蛋白），引起骨骼破壞、貧血、腎功能損害和免疫功能異常等。MM按免疫球蛋白分型可分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE、游離輕鏈（Kappa或Lamda）及游離重鏈等7型［1］。MM患者由于某個(gè)克隆發(fā)生異常增生，分泌大量單一均質(zhì)的M蛋白，經(jīng)血清蛋白電泳后掃描，可在β或γ區(qū)出現(xiàn)濃染、狹窄而界限分明的特征性M蛋白條帶（M帶），不同類(lèi)型的MM顯示M帶位置不同［2］。掃描后M蛋白呈底部狹窄、高尖的蛋白峰。免疫固定電泳（Immunofixation Electrophoresis，IFE）通過(guò)蛋白電泳和免疫沉淀兩個(gè)過(guò)程，使 M蛋白在固相支持物凝膠片上直接與抗血清作用，在原位形成抗原抗體復(fù)合物，結(jié)果直觀可靠，可對(duì)MM進(jìn)行診斷和分型。本實(shí)驗(yàn)旨在比較血清總蛋白測(cè)定、血清蛋白電泳和IFE對(duì)MM診斷、分型的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集蘭州大學(xué)第二醫(yī)院2006年3月～2011年7月門(mén)診及住院患者的血清標(biāo)本296例，檢測(cè)結(jié)果均為血清蛋白水平異?；蜓宓鞍纂娪居挟惓l帶，臨床建議行IFE檢測(cè)的血清標(biāo)本。MM臨床確診依據(jù)國(guó)家現(xiàn)行診斷標(biāo)準(zhǔn)［3～5］。

1.2 試劑和儀器

血清蛋白電泳、IFE均采用法國(guó)Sebia公司Sebia Hydrasys半自動(dòng)電泳儀，試劑、抗體均為原裝配套。血清總蛋白使用日立7600－010全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑測(cè)定。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 血清總蛋白測(cè)定：采用G－cell雙縮脲法上機(jī)測(cè)定。血清總蛋白＞80g／L者判斷為陽(yáng)性。

1.3.2 血清蛋白電泳：取10μl血清于加樣梳上，放入保濕盒內(nèi)5min，自動(dòng)電泳，固定、干燥、染色，進(jìn)行掃描數(shù)據(jù)處理后，觀察結(jié)果。若α2至γ區(qū)出現(xiàn)濃染、狹窄而界限分明的M蛋白帶，掃描后呈底部狹窄，高尖的蛋白峰（帶高≥2倍帶寬）則判斷為陽(yáng)性。

1.3.3 血清IFE：樣品稀釋?zhuān)篒gG以1∶6稀釋?zhuān)渌↖gA、IgM、κ、λ）以1∶3稀釋。加樣：取血清10μl加樣于配套點(diǎn)樣梳上，平衡5min后加樣于2人份或4人份瓊脂糖凝膠板上，在20W、恒定電流下進(jìn)行電泳，直至42Vh為止，20℃恒溫約9min。加抗血清：在每份標(biāo)本的6個(gè)電泳區(qū)域上各加固定溶液、抗IgG、IgA、IgM、抗κ、λ型血清各8～12μl。孵育5min后，用厚濾紙吸去抗血清，烘干。染色：將烘干的膠片置于染缸內(nèi)用酸性結(jié)晶紫染色，然后用0.5%檸檬酸脫色液進(jìn)行脫色。再65℃10min烘干后觀察結(jié)果。IFE后α2或γ區(qū)沉淀帶淺染，呈彌散分布，判斷為陰性。如在電泳條帶參考泳道（ELP）、G、A、M重鏈和／或κ、λ輕鏈上出現(xiàn)濃染、狹窄而界限分明的沉淀帶，即為M帶，判斷為IFE陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)血清總蛋白定量、血清蛋白電泳和血清IFE的臨床診斷的敏感性、特異性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 三種方法對(duì)MM的診斷價(jià)值比較

296例血清樣本均進(jìn)行血清總蛋白定量、血清蛋白電泳和血清IFE檢測(cè)，被臨床確診為MM患者109例。血清總蛋白陽(yáng)性者（264例）中101例診斷為MM，但32例陰性病例中，有2例診斷為MM。血清蛋白電泳陽(yáng)性者（158例）中97例診斷為MM，但138例陰性病例中，亦有2例被診斷為MM；血清IFE檢測(cè)陽(yáng)性（M帶）者（114例）中109例被確診為MM，但5例假陽(yáng)性者中3例為多克隆高球蛋白血癥，1例為淋巴瘤，1例為意義未明的單克隆丙種球蛋白血癥（MGUS）。三種方法臨床診斷的敏感性、特異性見(jiàn)表1。

表1 三種方法對(duì)MM的臨床診斷價(jià)值

2.2 MM患者M(jìn)蛋白在血清蛋白電泳圖中的位置

正常人血清IFE后β或γ區(qū)沉淀帶多為淺染，呈彌散分布，見(jiàn)圖1，如在同一水平位置上，蛋白電泳條帶的G、A、M重鏈和／或κ、λ輕鏈上出現(xiàn)濃染、狹窄而界限分明的沉淀帶，即為M帶，判斷為血清IFE陽(yáng)性。IgG型、IgM型MM患者血清的M蛋白均在γ區(qū)，見(jiàn)圖2；IgA型MM患者血清M蛋白多在β區(qū)或β－γ區(qū)，見(jiàn)圖3；輕鏈型MM患者M(jìn)蛋白各球蛋白區(qū)域都可出現(xiàn)。109例MM患者M(jìn)蛋白在血清蛋白電泳圖中的分布情況見(jiàn)表2。

表2 109例MM患者M(jìn)蛋白在IFE圖中的位置情況

圖1 正常血清IFE例圖

圖2 γ區(qū)IgGλ型MM

圖3 β區(qū)IgAλ型MM

3 討 論

MM起病多徐緩，患者可有數(shù)月至數(shù)十年的無(wú)癥狀期。在此期間，可有血沉增快、高球蛋白血癥或原因不明的蛋白尿，為“臨床前期”。MM的臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，主要為骨痛、貧血、發(fā)熱、感染、出血、腎功能不全、關(guān)節(jié)痛、消化道癥狀、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀、骨骼變形及病理性骨折等等，但這些癥狀均無(wú)特異性。MM患者多以骨病、腎病等繼發(fā)病就診，常被誤診為骨折、腎小球腎炎等。近年來(lái)，MM發(fā)病有增高趨勢(shì)［6］，但有統(tǒng)計(jì)資料顯示，MM 誤診率達(dá)54.0%～69.1%［7］，致使許多患者錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)期。因此對(duì)其早期正確診斷至關(guān)重要。

本文296例患者大多有血清總蛋白增高，血清蛋白電泳異常，其中109例確診為MM，因血清總蛋白定量和血清蛋白電泳測(cè)定方法簡(jiǎn)便，費(fèi)用低廉，常作為臨床MM的篩查實(shí)驗(yàn)。一旦篩查到血清總蛋白增高，血清蛋白電泳異?；颊呒葱谐Ｒ?guī)IFE檢測(cè)。血清蛋白電泳有異常條帶的患者并非MM的原因在于：一方面血清蛋白電泳不能區(qū)別α2區(qū)或β區(qū)急時(shí)相反應(yīng)蛋白或脂蛋白增高引起的峰和M峰，比如大多數(shù)腎病、腎小球腎炎病人α2區(qū)或β區(qū)多出現(xiàn)高尖的峰，血清蛋白電泳不能確定是否為M蛋白，另一方面，血清蛋白電泳對(duì)M蛋白的檢出率明顯低于IFE，尤其對(duì)IgA型和輕鏈型MM，其蛋白電泳有時(shí)不出現(xiàn)M帶，容易漏檢。IFE可檢測(cè)到所有特異的M蛋白。

本文109例 MM患者中，IgG型、IgM型 MM患者血清中M蛋白多在γ區(qū)，檢出率達(dá)100.00%，與文獻(xiàn)報(bào)道［8］基本相符；IgA型 MM患者的血清中M蛋白多在β區(qū)或β－γ區(qū)；輕鏈型MM患者M(jìn)蛋白在β區(qū)、β－γ區(qū)和γ區(qū)均有出現(xiàn)。當(dāng)單克隆成分出現(xiàn)在非γ區(qū)，例如M帶隱藏在其它條帶中或者出現(xiàn)不典型的小M帶時(shí)，IFE亦可明確是否為真正的單克隆M蛋白。所以，IFE對(duì)MM的檢出率和特異性均明顯高于總蛋白定量和血清蛋白電泳，而且通過(guò)IFE可以直觀地判斷MM的類(lèi)型，是臨床診斷MM的重要方法。

1 李 勇.副蛋白血癥的實(shí)驗(yàn)室研究狀況［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)·臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，2001，22（3）：158～159.

2 Hussein MA，Juturi JV，Lieberman I.Multiple myeloma：present and future［J］.Curr Opin Oncol，2002，14（1）：31～35.

3 陳協(xié)群，張永清.多發(fā)性骨髓瘤的診斷與療效標(biāo)準(zhǔn)［J］.國(guó)際輸血及血液學(xué)雜志，2007，（4）：297～299.

4 王淑娟，朱立華.多發(fā)性骨髓瘤及其實(shí)驗(yàn)室診斷［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2004，27（4）：50～53.

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