藍(lán)光照射加速分解膽紅素及其對生化指標(biāo)的影響

張茂海 張 琳 陸玲娜 宋立敏

膽紅素是血紅素的主要代謝產(chǎn)物，易被氧化劑作用發(fā)生氧化，見光易分解，是臨床實(shí)驗(yàn)室比色試驗(yàn)中最常見的干擾物質(zhì)之一?？鼓懠t素干擾實(shí)驗(yàn)已被確定為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方法性能評價(jià)中干擾實(shí)驗(yàn)的重要項(xiàng)目［1］。目前，一些商品化試劑盒加入氧化劑后，降低了膽紅素對比色反應(yīng)的干擾，但大大增加了試劑成本。本文采用藍(lán)光照射加速血清樣本中膽紅素分解，并觀察藍(lán)光照射前后常規(guī)生化指標(biāo)檢驗(yàn)結(jié)果的變化，探討藍(lán)光照射改善膽紅素對常規(guī)生化檢測干擾的效益。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本及分組

選取經(jīng)檢測直接膽紅素（DB）升高（＞100μmol／L）的新鮮血清標(biāo)本40例，設(shè)為DB升高組；選取間接膽紅素（IB）升高（＞100μmol／L）的新鮮血清標(biāo)本40例，設(shè)為IB升高組，同時(shí)選取總膽紅素（TB）、DB、IB均低于參考值上限的新鮮血清標(biāo)本40例設(shè)為正常對照組。

1.2 儀器與試劑

美國貝克曼公司生產(chǎn)DXC800全自動(dòng)生化分析儀；北京中西泰安技術(shù)服務(wù)有限公司生產(chǎn)ND14－XHZ－90新生兒黃疸治療儀／藍(lán)光治療儀（每只藍(lán)光燈管功率20W，共4只）。

高密度脂蛋白膽固醇（HDL）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL）檢測試劑和校準(zhǔn)品由日本第一化學(xué)生產(chǎn)，批號20110935；TB、DB、總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、r－谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（r－GT）、葡萄糖（Glu）、肌酐（Cre）、尿素（Urea）、尿酸（UA）、膽固醇（Cho）、三酰甘油（TG）、鉀離子（K＋）、鈉 離 子 （Na＋）、氯 離 子 （Cl－）、鈣 離 子（Ca2＋）、無機(jī)磷（Pho）、肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LD）檢測采用貝克曼公司原裝試劑及配套校準(zhǔn)品（批號：M907396）。質(zhì)控品由伯樂公司（Bio－rad）提供（批號：14171／14172）。

1.3 藍(lán)光照射及生化指標(biāo)檢測方法

全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行日常維護(hù)，按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行設(shè)備校準(zhǔn)，常規(guī)檢測雙水平室內(nèi)質(zhì)控品，在保證質(zhì)控結(jié)果在控的情況下：（1）分別測定藍(lán)光照射前后對照組、DB升高組和IB升高組血清樣本的TB、DB、IB濃度；（2）分別測定各組血清樣本藍(lán)光照射前后的 TP、Alb、ALT、AST、ALP、r－GT、Glu、Cre、Urea、UA、Cho、TG、HDL、LDL、K、Na、Cl、Ca、Pho、CK、LD等的水平變化。藍(lán)光照射方法：將三組血清樣本置于密封、透明的尖頭塑料管內(nèi)，放置藍(lán)光燈下，打開4只燈管照射2h，同時(shí)使用空調(diào)控制室內(nèi)溫度為20℃。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

各組樣本藍(lán)光照射前后TB、DB、IB測定結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，并進(jìn)行組內(nèi)差異顯著性t檢驗(yàn)。分別計(jì)算各組樣本照射前后生化指標(biāo)測定結(jié)果的均值偏差（Bias%）＝｜（C1－C0）｜×100%／C0（C0表示照射前測定結(jié)果均值，C1表示照射后測定結(jié)果均值），再對三組偏差數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 藍(lán)光照射前后各組血清膽紅素水平變化

三組標(biāo)本經(jīng)藍(lán)光照射后，血清中膽紅素濃度均有顯著變化，與照射前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表1。

2.2 各組藍(lán)光照射前后生化指標(biāo)測定結(jié)果的均值偏差比較

表1 藍(lán)光照射前后三組樣本血清中膽紅素水平變化（s，μoml／L，n均＝40）

表1 藍(lán)光照射前后三組樣本血清中膽紅素水平變化（s，μoml／L，n均＝40）

注：與照射前比較，1）P＜0.01

DB升高組照射前 照射后IB升高組照射前 照射后對照組照射前 照射后TB濃度 151.30±17.41 79.80±13.341） 316.60±26.49 147.10±16.541） 10.70±2.35 3.00±0.811）DB濃度 127.10±15.73 71.80±12.951） 21.70±3.55 115.00±17.271） 5.50±2.22 2.50±0.711）IB濃度 24.20±4.34 8.08±1.561） 294.90±25.74 32.10±5.941） 5.20±2.34 0.50±0.221）

結(jié)果表明，對照組經(jīng)藍(lán)光照射后，LD濃度顯著升高，出現(xiàn)較大偏差，其它20個(gè)指標(biāo)的均值偏差較小，提示藍(lán)光照射對正常水平膽紅素標(biāo)本的絕大多數(shù)生化指標(biāo)測定無明顯影響。而DB升高組和IB升高組經(jīng)藍(lán)光照射后大部分指標(biāo)測定值顯著降低，均值偏差明顯大于對照組（P＜0.05或P＜0.01），提示藍(lán)光分解高膽紅素能顯著改善生化指標(biāo)測定值的偏離程度。見表2。

表2 藍(lán)光照射前后各組樣本生化指標(biāo)測定結(jié)果偏差（%，n均＝40）

3 討 論

膽紅素是一種具有還原性的色源性物質(zhì)，是血紅素的代謝產(chǎn)物。在光照射作用下，可由天然的反式雙鍵結(jié)構(gòu)（或Z構(gòu)型）轉(zhuǎn)變?yōu)轫樖诫p鍵（或E構(gòu)型），臨床利用光療法治療新生兒黃疸即是基于這一原理［2］。在臨床實(shí)驗(yàn)室生化檢驗(yàn)工作中，經(jīng)常遇到高膽紅素血清樣本對部分檢驗(yàn)指標(biāo)產(chǎn)生嚴(yán)重干擾，因此膽紅素干擾試驗(yàn)已被全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［1］列為檢測系統(tǒng)方法學(xué)評價(jià)的必做試驗(yàn)之一。膽紅素對比色反應(yīng)的干擾主要表現(xiàn)為呈色性干擾和還原性干擾，例如在UA、TG、TC等檢測中膽紅素對偶聯(lián)終點(diǎn)比色法反應(yīng)可產(chǎn)生還原性干擾，以及在TP、Pho等終點(diǎn)比色法檢測中產(chǎn)生樣本本底顏色干擾等。有關(guān)膽紅素對不同檢測項(xiàng)目的干擾特性已被實(shí)踐充分證實(shí)并相繼有文獻(xiàn)報(bào)道［3～9］。目前，有部分試劑中添加了針對膽紅素的抗干擾成分，旨在降低其干擾［10～12］，但抗干擾成分濃度過大有可能對主體反應(yīng)產(chǎn)生影響，而且對于出現(xiàn)超過試劑抗干擾閾值的特殊黃疸標(biāo)本，也沒有妥善的解決方案。

本文結(jié)果顯示，采用藍(lán)光治療儀對血清樣本照射2h，可加速分解血清中膽紅素達(dá)39%到90%左右，但值得注意的是IB升高組經(jīng)照射后DB水平顯著升高，這可能與IB經(jīng)光照后可部分發(fā)生異構(gòu)變化，大量轉(zhuǎn)化為DB相關(guān)［2］，其原因有待進(jìn)一步證實(shí)。對照組生化測定結(jié)果顯示，藍(lán)光照射2h后，除LD之外的其它指標(biāo)（20項(xiàng)）均值偏差均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而DB升高組和IB升高組藍(lán)光照射后測定結(jié)果中大多數(shù)指標(biāo)顯著降低，均值偏差明顯大于對照組，提示兩組樣本中存在高膽紅素的不同程度影響，而藍(lán)光照射可以明顯降低其影響程度。因此，短時(shí)間藍(lán)光照射血清樣本可作為臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)室針對黃疸標(biāo)本干擾的一種預(yù)處理手段，且能與添加抗干擾成分試劑形成良好的互補(bǔ)，值得推廣使用。

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