• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    低濃度亞硝酸鈉預(yù)處理對(duì)高濃度亞硝酸鈉損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用

    2012-11-12 07:24:02李延紅周占業(yè)皇甫超申
    關(guān)鍵詞:低濃度高濃度亞硝酸鹽

    李延紅,周占業(yè),史 齊,皇甫超申

    (河南大學(xué)1.醫(yī)學(xué)院環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所,2.第一附屬醫(yī)院,河南開(kāi)封 475004)

    亞硝酸鹽廣泛存在于自然界水體、土壤、植物中,常用于食品保鮮劑和工業(yè)防腐劑,也被用于臨床治療氰化物中毒。亞硝酸鹽對(duì)人體健康的影響目前存在很大爭(zhēng)議[1]。過(guò)去普遍認(rèn)為亞硝酸鹽可以導(dǎo)致高鐵血紅蛋白血癥并有致癌風(fēng)險(xiǎn),現(xiàn)在不斷有研究表明,低濃度亞硝酸鹽具有保護(hù)血管內(nèi)皮、降血壓和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化等對(duì)人體有利的一面[2]。這就使得亞硝酸鹽這一古老的化合物有了新的研究?jī)r(jià)值。有實(shí)驗(yàn)表明,環(huán)境化學(xué)毒物或物理?yè)p傷因子對(duì)組織細(xì)胞的作用效應(yīng)呈現(xiàn)出低濃度和高濃度作用相反的現(xiàn)象,該現(xiàn)象被稱為低促效應(yīng)(hormesis)[3],化合物在低促效應(yīng)濃度范圍內(nèi)引起的促進(jìn)效應(yīng)超過(guò)對(duì)照組10%的濃度稱之為最低促進(jìn)濃度,用該濃度化合物預(yù)處理組織細(xì)胞,可以使其耐受該化合物高濃度的毒害作用[4]。為此,本文研究了低濃度亞硝酸鈉(NaNO2)預(yù)處理對(duì)高濃度NaNO2損傷PC細(xì)胞的保護(hù)作用。

    1 材料與方法

    1.1 試劑和儀器

    大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤未分化型細(xì)胞株P(guān)C12購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所。硝酸鈉(NaNO3)、NaNO2,無(wú)水乙醇,天津市晨?;瘜W(xué)試劑廠(分析純);高糖DMEM培養(yǎng)基(Gibco);胎牛血清,杭州四季青生物公司產(chǎn)品;羧基-2-(4-羧基)苯基-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-1-氧-3-氧化物(carboxy-2-(4-carbo-xyphenyl)-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide,c-PTIO)、二甲亞砜(DMSO)、噻唑藍(lán)(MTT)、Hoechst33258和碘化丙啶(propodium iodiole,PI)購(gòu)自Sigma公司。FITC-AnnexinⅤ/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Bender)增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光(enhanced chemiluminescence,ECL)顯色試劑盒、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG及β肌動(dòng)蛋白抗體(碧云天公司)??梢?jiàn)光法丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、過(guò)氧化氫酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。BX51型熒光顯微鏡(日本Olympus公司);FACS Salibur型流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)。

    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

    PC12細(xì)胞生長(zhǎng)在含10%的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中,置5%CO237℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。3 d換液1次為1代。

    1.3 MTT分析細(xì)胞存活率

    PC12細(xì)胞于5%CO237℃恒溫培養(yǎng)。至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,用胰酶和EDTA消化,調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×107L-1接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔0.2 ml,繼續(xù)培養(yǎng)24 h后換液。根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果[5],本實(shí)驗(yàn)分別選用NaNO20.14,1.4 和 45 mmol·L-1濃度組,同時(shí)設(shè)同濃度的 NaNO3或 c-PTIO 40 μmol·L-1+NaNO3組。細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24 h,每孔加入 20 μl MTT 5 g·L-1培養(yǎng)4 h后,吸去培養(yǎng)液,每孔加入150μl DMSO于振蕩器上振搖,待藍(lán)色晶體完全溶解后,在酶標(biāo)儀上測(cè)定570 nm處的吸光度(absorbance,A)。以含有等體積的培養(yǎng)液和DMSO的無(wú)細(xì)胞孔測(cè)得的吸光度值為空白對(duì)照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。細(xì)胞存活率(%)=(A處理組-A空白組)/(A對(duì)照組-A空白組)×100% 。

    1.4 活細(xì)胞熒光染色判定細(xì)胞生存狀態(tài)

    實(shí)驗(yàn)分4組:正常對(duì)照組,只加等體積的培養(yǎng)液;NaNO245 mmol·L-1組,NaNO245 mmol·L-1處理細(xì)胞2 h;預(yù)處理組,NaNO20.14 mmol·L-1預(yù)處理24 h,然后再用 NaNO245 mmol·L-1處理 2 h;NO 清除組,c-PTIO 40 μmol·L-1+NaNO20.14 mmol·L-1共同預(yù)處理細(xì)胞24 h后再用NaNO245 mmol·L-1作用2 h。將不同處理的細(xì)胞培養(yǎng)在預(yù)置蓋玻片上,PBS洗3次,用特異結(jié)合DNA的熒光染料Hoechst 33258和PI聯(lián)染進(jìn)行活細(xì)胞聯(lián)染。加Hoechst33258 10 mg·L-1及 PI 10 mg·L-1,37℃染色 15 min 后,紫外激發(fā),熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化,CCD拍片?;罴?xì)胞呈淺藍(lán)色,凋亡細(xì)胞呈凝集的紅色或亮白色。熒光顯微鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野,每張爬片計(jì)數(shù)細(xì)胞不少于1000個(gè),實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,以凋亡細(xì)胞數(shù)與計(jì)數(shù)的總細(xì)胞數(shù)百分比表示細(xì)胞凋亡率。

    1.5 FITC-AnnexinⅤ/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡

    按實(shí)驗(yàn)要求處理后,分別收集各組細(xì)胞到10 ml的離心管中,每樣本細(xì)胞數(shù)為1×109L-1,1000 ×g離心5 min,棄去培養(yǎng)液。用孵育緩沖液洗滌1次,1000×g離心5 min,用100μl的標(biāo)記溶液重懸細(xì)胞,室溫下避光孵育15 min,1000×g離心5 min,沉淀細(xì)胞孵育緩沖液洗1次。加入AnnexinⅤ-FITC/PI溶液5 μl,4℃下孵育20 min,最后補(bǔ) PBS 400 μl,以流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。每個(gè)樣品檢測(cè)1萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,用Cellquest軟件進(jìn)行細(xì)胞凋亡分析。

    1.6 細(xì)胞內(nèi)MDA含量和GSH-Px,SOD,CAT酶活性分析

    實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,比色法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)MDA,GSH-Px含量和SOD,CAT酶活性。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    1.7 Western印跡法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)

    細(xì)胞于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)行各種處理,作用24 h后用RIPA 200μl充分裂解提取蛋白,考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)樣品蛋白濃度,均衡每組蛋白濃度后,以12%SDS-PAGE凝膠電泳分離。電轉(zhuǎn)移蛋白至NC膜,5%脫脂奶粉封閉過(guò)夜,加入各種一抗(1∶200)于4℃封閉袋中孵育過(guò)夜,二抗(1∶4000)孵育1 h。化學(xué)發(fā)光法顯示結(jié)果,壓片曝光,凝膠圖像分析系統(tǒng)拍照,并測(cè)定蛋白質(zhì)印跡條帶積分吸光度值(integrated absorbance,IA),以 與β肌動(dòng)蛋白的IA比值為蛋白相對(duì)表達(dá)量。

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    2 結(jié)果

    2.1 NaNO2對(duì)PC12細(xì)胞存活率的影響

    圖1 結(jié)果顯示,NaNO20.14 和 1.4 mmol·L-1組細(xì)胞存活率較正常對(duì)照組分別增加15%和56%,NaNO245 mmol·L-1組細(xì)胞存活率較正常對(duì)照組減少46%(P<0.05)。同時(shí)加入c-PTIO后,細(xì)胞存活率較相應(yīng)濃度單獨(dú)NaNO2組明顯降低(P<0.05),但NaNO2對(duì)細(xì)胞存活率的低濃度促進(jìn)高濃度抑制現(xiàn)象依然存在,未恢復(fù)至正常對(duì)照組水平(P<0.05)。NaNO30.14 ~45 mmol·L-1對(duì)細(xì)胞存活無(wú)明顯影響。

    Fig.1 Effect of sodium nitrite(NaNO2)on the survival rate of PC12 cells.PC12 cells were cultured with drugs for 24 h.Survival rate(%)=(A treatment - A blank)/(A control - A blank).ˉx ± s,n=3.*P <0.05,compared with normal control(0 mg·L -1)group;#P <0.05,compared with NaNO2 group.

    2.2 低濃度NaNO2預(yù)處理對(duì)高濃度NaNO2損傷PC12細(xì)胞存活率的影響

    如圖2所示,與正常對(duì)照組相比,NaNO245 mmol·L-1處理組細(xì)胞存活率明顯下降(P <0.05)。與NaNO245 mmol·L-1組相比,預(yù)處理組細(xì)胞存活率明顯增加(P<0.05)。與預(yù)處理組相比,預(yù)處理時(shí)同時(shí)加入c-PTIO 40μmol·L-1的NO清除組細(xì)胞存活率進(jìn)一步明顯下降(P<0.05)。

    Fig.2 Effect of NaNO2 0.14 mmol·L -1 preconditioning on cell survival exposed to NaNO2 45 mmol·L -1 by MTT.Cells were preconditioned with NaNO2 0.14 mmol· L-1 or NaNO2 0.14 mmol·L -1+c-PITO 40 μmol·L-1 for 24 h, then NaNO2 45 mmol·L -1 was added for anther 2 h cultivation.1:normal control group;2:NaNO2 group;3:NaNO2 0.14+NaNO2 45 group;4:c-PTIO+NaNO2 0.14+NaNO2 45 group.±s,n=3.*P<0.05,compared with normal control group;#P <0.05,compared with NaNO2 45 group;ΔP <0.05,compared with NaNO2 0.14+NaNO2 45 group.

    2.3 低濃度NaNO2預(yù)處理對(duì)高濃度NaNO2損傷PC12細(xì)胞凋亡的拮抗作用

    FITC-AnnexinⅤ/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果(圖3)可見(jiàn),正常對(duì)照組PC12細(xì)胞有少量細(xì)胞凋亡,NaNO245 mmol·L-1可誘導(dǎo)大批細(xì)胞凋亡,與正常對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)。與NaNO245 mmol·L-1組相比,NaNO20.14 mmol·L-1預(yù)處理組細(xì)胞凋亡率明顯減少(P<0.05);與 NaNO20.14 mmol·L-1預(yù)處理組相比,c-PTIO+NaNO20.14+NaNO245 mmol·L-1組細(xì)胞凋亡率進(jìn)一步增高(P<0.05)。

    2.4 低濃度NaNO2預(yù)處理對(duì)NaNO2高度濃損傷PC12細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化

    Fig.3 Effect of NaNO2 0.14 mmol·L -1 preconditioning on cell apoptosis exposed to NaNO2 45 mmol·L -1 by FITC-annexinⅤ/PI double staining flow cytometry assay.See Fig.2 for the treatment.1:normal control group;2:NaNO2 group;3:NaNO2 0.14+NaNO2 45 group;4:c-PTIO+NaNO2 0.14+NaNO2 45 group.±s,n=3.*P<0.05,compared with normal control group;#P <0.05,compared with NaNO2 45 group;ΔP <0.05,compared with NaNO2 0.14+NaNO2 45 group.

    Hoechst33258/PI活細(xì)胞雙染結(jié)果可見(jiàn)(圖4),正常對(duì)照組細(xì)胞,生存狀態(tài)良好,有少量細(xì)胞凋亡;NaNO245 mmol·L-1處理導(dǎo)致大量細(xì)胞凋亡,凋亡率明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05);預(yù)處理組細(xì)胞凋亡率與NaNO245 mmol·L-1組相比 ,明顯減少 (P<0.05);與預(yù)處理組相比,c-PTIO+NaNO20.14+NaNO245組細(xì)胞凋亡率明顯降低(P<0.05)。

    2.5 低濃度NaNO2預(yù)處理對(duì)高濃度NaNO2損傷PC12細(xì)胞抗氧化能力的影響

    如表1所示,與正常對(duì)照組相比,NaNO245 mmol·L-1處理組細(xì)胞內(nèi) CAT、SOD 和 GSH-Px活性明顯降低,MDA含量升高(P<0.05);與NaNO245 mmol·L-1組相比,NaNO20.14 mmol·L-1預(yù)處理組細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶活力明顯升高,而MDA含量明顯下降(P <0.05)。與 NaNO20.14 mmol·L-1預(yù)處理組相比,c-PTIO 40 μmol·L-1+NaNO20.14+NaNO245組抗氧化酶活性進(jìn)一步明顯降低,MDA含量明顯升高(P<0.05)。

    Fig.4 Effect of NaNO2 0.14 mmol·L -1 preconditioning on cell nucleus morphology exposed to NaNO2 45 mmol·L -1 by Hoechst33258/PI double staining.See Fig.3 for the legend.B was the statistical results of A.±s,n=3.*P<0.05,compared with control group;#P <0.05,compared with NaNO2 45 group;ΔP <0.05,compared with NaNO2 0.14+NaNO2 45 group.

    Tab.1 Effect of NaNO2 0.14 mmol·L -1 preconditioning on activities of catalase(CAT),superoxide dismutase(SOD),glutathione peroxidase(GSH-Px)and malondialdehyde(MDA)content in PC12 cells exposed to NaNO2 45 mmol·L -1

    2.6 低濃度NaNO2預(yù)處理對(duì)高濃度NaNO2損傷PC12細(xì)胞影響

    圖5結(jié)果顯示,與對(duì)正常照組相比,NaNO245 mmol·L-1處理細(xì)胞可明顯誘導(dǎo)細(xì)胞促凋亡蛋白Bax,胱天蛋白酶9,胱天蛋白酶3表達(dá)增加,而凋亡抑制蛋白Bcl-2表達(dá)減少(P<0.05)。與NaNO245 mmol·L-1組相比,NaNO20.14 mmol·L-1預(yù)處理組細(xì)胞促凋亡蛋白 Bax,胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3表達(dá)量下降,而凋亡抑制蛋白 Bcl-2表達(dá)量增加(P<0.05)。與預(yù)處理組相比,c-PTIO+NaNO20.14+NaNO245組細(xì)胞促凋亡蛋白Bax,胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3表達(dá)量有所增加,而凋亡抑制蛋白Bcl-2表達(dá)量有所減少(P<0.05)。

    Fig.5 Effect of NaNO2 0.14 mmol·L-1 preconditioning on the expression of apoptosis-related proteins in cells exposed to NaNO2 45 mmol·L-1 by Western blotting assay.See Fig.3 for the legend.Bwas the statistical results of A.±s,n=3.*P<0.05,compared with normal control group;#P <0.05,compared with NaNO2 45 mmol·L -1 group;ΔP <0.05,compared with NaNO2 0.14+NaNO2 45 group.

    2.7 低濃度NaNO2預(yù)處理對(duì)高濃度NaNO2損傷PC12細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)的影響

    圖6結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,NaNO245 mmol·L-1組細(xì)胞 HIF-1α 表達(dá)量有所增加(P <0.05);與 NaNO245 mmol·L-1組相比,NaNO20.14 mmol·L-1預(yù)處理組 HIF-1α 表達(dá)量明顯增加(P <0.05);與 NaNO20.14 mmol·L-1預(yù)處理組相比,c-PTIO+NaNO20.14+NaNO245 組 HIF-1α 表達(dá)量進(jìn)一步明顯下降(P<0.05)。

    Fig.6 Effect of NaNO2 0.14 mmol·L -1 preconditioning on the expression of hypoxia-inducible factor-1α(HIF-1α)in PC12 cells exposed to NaNO2 45 mmol·L -1 by Western blotting assay.See Fig.3 for the legend.Fig.B was the statistical results of Fig.A.±s,n=3.*P<0.05,compared with normal control group;#P < 0.05,compared with NaNO2 45 mmol·L -1 group;ΔP <0.05,compared with NaNO2 0.14+NaNO2 45 group.

    3 討論

    高濃度NaNO2可以造成細(xì)胞膜損害和DNA過(guò)氧化損傷,并誘導(dǎo)細(xì)胞壞死和凋亡[6],低濃度NaNO2對(duì)組織細(xì)胞卻沒(méi)有明顯的毒害作用[7]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),NaNO20.14 和 1.4 mmol·L-1對(duì) PC12 細(xì)胞存活率有促進(jìn)作用,而 NaNO245 mmol·L-1明顯抑制細(xì)胞存活率;加入c-PTIO清除培養(yǎng)體系中的一氧化氮后,細(xì)胞存活率總體有所下降,但NaNO2對(duì)細(xì)胞存活率的低濃度促進(jìn)高濃度抑制現(xiàn)象依然存在,而相同濃度的硝酸鈉對(duì)細(xì)胞活力無(wú)影響。結(jié)果提示,NaNO2可以引起PC12細(xì)胞存活率低濃度促進(jìn)效應(yīng)(低促效應(yīng))。這種現(xiàn)象很可能與一氧化氮-可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶-環(huán)一磷酸鳥(niǎo)苷通路激活有關(guān)[8]。在低促效應(yīng)濃度范圍內(nèi),本實(shí)驗(yàn)選用最低促進(jìn)濃度,即 NaNO20.14 mmol·L-1預(yù)處理后,細(xì)胞抗氧化能力增強(qiáng)、脂質(zhì)過(guò)氧化水平降低、線粒體凋亡通路上促凋亡蛋白表達(dá)下降、凋亡抑制蛋白表達(dá)升高以及細(xì)胞凋亡減少。有研究認(rèn)為這種現(xiàn)象是由于低濃度毒物預(yù)處理,細(xì)胞通過(guò)自穩(wěn)態(tài)調(diào)整,獲得了耐受更高濃度毒物的損害作用[9]。也有研究認(rèn)為低濃度NaNO2在體內(nèi)缺氧酸性環(huán)境下可以還原為一氧化氮,一氧化氮抑制線粒體呼吸鏈,減少活性氧產(chǎn)生,抑制細(xì)胞色素C釋放,從而減輕細(xì)胞過(guò)氧化損害和拮抗線粒體途徑凋亡[10]。本實(shí)驗(yàn)是在普通條件下培養(yǎng)的,培養(yǎng)液pH值由實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)的7.3,到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)降到6.3左右,在這種環(huán)境,培養(yǎng)體系中的亞硝酸鹽有可能部分還原為一氧化氮。用低濃度NaNO2預(yù)處理 PC12細(xì)胞,細(xì)胞獲得耐受高濃度NaNO2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象很可能與亞硝酸根離子和一氧化氮抑制線粒體呼吸鏈復(fù)合物,抑制細(xì)胞內(nèi)氧的消費(fèi),減少活性氧產(chǎn)生,同時(shí)抑制線粒體細(xì)胞色素C的釋放,減少線粒體途徑凋亡有關(guān)。這種現(xiàn)象在NaNO2預(yù)處理拮抗缺血再灌注時(shí)活性氧誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中也得到證實(shí)[11]。

    細(xì)胞內(nèi)HIF是一類進(jìn)化上高度保守的核轉(zhuǎn)錄因子,在缺氧條件下累積,調(diào)控其下游紅細(xì)胞生成素、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和糖酵解等一系列與細(xì)胞低氧存活有關(guān)的基因,使細(xì)胞耐受缺氧或其他應(yīng)激環(huán)境[12]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),低濃度NaNO2預(yù)處理的細(xì)胞,HIF表達(dá)增加,這可能與低濃度亞硝酸鹽抑制細(xì)胞氧消費(fèi)有關(guān)。結(jié)果提示,低濃度NaNO2促進(jìn)細(xì)胞存活率增加,拮抗高濃度NaNO2對(duì)細(xì)胞過(guò)氧化損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象,與其促進(jìn)HIF在細(xì)胞內(nèi)累積增加有關(guān)。

    低濃度NaNO2促進(jìn)PC12細(xì)胞存活率,高濃度抑制其存活率;低濃度NaNO2預(yù)處理PC12細(xì)胞可以增強(qiáng)細(xì)胞抗氧化能力,增加HIF-1α在細(xì)胞內(nèi)累積,拮抗高濃度NaNO2過(guò)氧化誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體途徑凋亡,亞硝酸鹽還原的一氧化氮和亞硝酸根離子在其中協(xié)同發(fā)揮了重要作用。

    [1]Bryan NS,Calvert JW,Gundewar S,Lefer DJ.Dietary nitrite restores NO homeostasis and is cardioprotective in endothelial nitric oxide synthase-deficient mice[J].Free Radic Biol Med,2008,45(4):468-474.

    [2]Hord NG,Tang Y,Bryan NS.Food sources of nitrates and nitrites:the physiologic context for potential health benefits[J].Am J Clin Nutr,2009,90(1):1-10.

    [3]Calabrese E.Hormesis,non-linearity,and risk communication[J].Hum Exp Toxicol,2009,28(1):5-6.

    [4]Calabrese EJ. Converging concepts:adaptive response,preconditioning,and the Yerkes-Dodson Law are manifestations of hormesis[J].Ageing Res Rev,2008,7(1):8-20.

    [5]Li YH,Shi Q,Shi ZY,Li YQ,Liu B,Huangfu CS.cytoprotective role of low-dose nitrite preconditioning against H2O2induced damage in PC12 cells[J].Chin J Pathophysiol(中國(guó)病理生理雜志),2010,26(4):802-808.

    [6]Wyatt N,Kelly C,F(xiàn)ontana V,Merlo DF,Whitelaw D,Anderson D.The responses of lymphocytes from Asian and Caucasian diabetic patients and non-diabetics to hydrogen peroxide and sodium nitrite in the Comet assay[J].Mutat Res,2006,609(2):154-164.

    [7]Hansen PR, Taxvig C, Christiansen S, Axelstad M,Boberg J,Kiersgaard MK,et al.Evaluation of endocrine disrupting effects of nitrate after in utero exposure in rats and of nitrate and nitrite in the H295R and T-screen assay[J].Toxicol Sci,2009,108(2):437-444.

    [8]Mujoo K,Sharin VG,Martin E,Choi BK,Sloan C,Nikonoff LE,et al.Role of soluble guanylyl cyclase-cyclic GMPsignaling in tumor cell proliferation[J].Nitric Oxide,2010,22(1):43-50.

    [9]Calabrese EJ,Baldwin LA.Toxicology rethinks its central belief[J].Nature,2003,421(6924):691-692.

    [10]Bryan NS, Fernandez BO, Bauer SM, Garcia-Saura MF,Milsom AB,Rassaf T,et al.Nitrite is a signaling molecule and regulator of gene expression in mammalian tissues[J].Nat Chem Biol,2005,1(5):290-297.

    [11]Duranski MR, Greer JJ, Dejam A, Jaganmohan S,Hogg N,Langston W,et al.Cytoprotective effects of nitrite during in vivo ischemia-reperfusion of the heart and liver[J].J Clin Invest,2005,115(5):1232-1240.

    [12]Podar K,Anderson KC.A therapeutic role for targeting c-Myc/Hif-1-dependent signaling pathways[J].Cell Cycle,2010,9(9):1722-1728.

    猜你喜歡
    低濃度高濃度亞硝酸鹽
    水環(huán)境中低濃度POPs的控制技術(shù)研究進(jìn)展
    高濃度石化污水提標(biāo)改造工程實(shí)例
    云南化工(2021年6期)2021-12-21 07:31:18
    羊亞硝酸鹽中毒的病因、臨床表現(xiàn)、診斷與防治措施
    愛(ài)眼有道系列之三十二 用低濃度阿托品治療兒童近視,您了解多少
    高位池亞硝酸鹽防控
    系列嵌段聚醚在高濃度可分散油懸浮劑的應(yīng)用
    冬棚養(yǎng)殖需警惕亞硝酸鹽超標(biāo)!一文為你講解亞硝酸鹽過(guò)高的危害及處理方法
    家畜硝酸鹽和亞硝酸鹽中毒的診斷、鑒別和防治
    高濃度高氣壓在燒結(jié)用石灰氣力輸送中的應(yīng)用
    雙流體模型在高濃度含沙水流模擬中的應(yīng)用
    交换朋友夫妻互换小说| freevideosex欧美| 各种免费的搞黄视频| 免费观看性生交大片5| 51国产日韩欧美| av在线app专区| 精品少妇黑人巨大在线播放| 制服诱惑二区| 日韩av免费高清视频| 人妻人人澡人人爽人人| 三上悠亚av全集在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美精品一区二区大全| 午夜久久久在线观看| 久久午夜福利片| 国产精品蜜桃在线观看| 国产成人精品福利久久| 一区二区av电影网| 国产成人免费无遮挡视频| 99热这里只有是精品在线观看| 一级爰片在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 在线精品无人区一区二区三| 亚洲美女黄色视频免费看| 精品午夜福利在线看| 好男人视频免费观看在线| 国产成人欧美| 精品酒店卫生间| 街头女战士在线观看网站| 精品久久国产蜜桃| 欧美精品亚洲一区二区| 成年女人在线观看亚洲视频| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久午夜综合久久蜜桃| 在线观看www视频免费| 久久这里有精品视频免费| 亚洲第一区二区三区不卡| 精品久久久久久电影网| 美国免费a级毛片| 老熟女久久久| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产麻豆69| 最近中文字幕高清免费大全6| 秋霞在线观看毛片| 91精品三级在线观看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产男女内射视频| 国产成人aa在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日本黄大片高清| 十分钟在线观看高清视频www| 99久久综合免费| 如何舔出高潮| 哪个播放器可以免费观看大片| 夫妻午夜视频| a级毛色黄片| 国产av一区二区精品久久| 亚洲一码二码三码区别大吗| 五月玫瑰六月丁香| 免费日韩欧美在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产视频首页在线观看| 999精品在线视频| 国产毛片在线视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲图色成人| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久这里只有精品19| 日日爽夜夜爽网站| 午夜福利影视在线免费观看| 国产爽快片一区二区三区| 日本91视频免费播放| 韩国精品一区二区三区 | 欧美日韩综合久久久久久| 久久免费观看电影| 91aial.com中文字幕在线观看| 两性夫妻黄色片 | 久久ye,这里只有精品| 亚洲,一卡二卡三卡| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲av免费高清在线观看| 久久99热6这里只有精品| 婷婷成人精品国产| 日日啪夜夜爽| 亚洲国产看品久久| h视频一区二区三区| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲人与动物交配视频| 两个人免费观看高清视频| 视频在线观看一区二区三区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 妹子高潮喷水视频| 伦精品一区二区三区| 欧美日韩视频精品一区| 日日爽夜夜爽网站| 一个人免费看片子| 久久国内精品自在自线图片| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲 欧美一区二区三区| 如何舔出高潮| 久久久久久久久久久免费av| 99香蕉大伊视频| 久久97久久精品| 纯流量卡能插随身wifi吗| 90打野战视频偷拍视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 99久国产av精品国产电影| 成人综合一区亚洲| 2022亚洲国产成人精品| 国产激情久久老熟女| 国产成人av激情在线播放| 性色av一级| 欧美人与善性xxx| 制服诱惑二区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 大片免费播放器 马上看| 春色校园在线视频观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 一级片免费观看大全| 成人国语在线视频| 一本大道久久a久久精品| a级毛色黄片| 午夜免费男女啪啪视频观看| 母亲3免费完整高清在线观看 | 日韩电影二区| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲av成人精品一二三区| 综合色丁香网| 在线观看www视频免费| 国产精品国产av在线观看| 亚洲av电影在线进入| 日韩中字成人| 校园人妻丝袜中文字幕| 妹子高潮喷水视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲综合色惰| 国产av国产精品国产| 亚洲国产成人一精品久久久| 成年人免费黄色播放视频| a级毛片在线看网站| 精品久久国产蜜桃| 久久午夜福利片| 三级国产精品片| 国产不卡av网站在线观看| 欧美精品一区二区大全| 亚洲综合色惰| 一本久久精品| 如何舔出高潮| 成人午夜精彩视频在线观看| 大香蕉久久网| 香蕉丝袜av| 制服丝袜香蕉在线| 国产福利在线免费观看视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 激情五月婷婷亚洲| 久久国产亚洲av麻豆专区| 大香蕉97超碰在线| 十八禁高潮呻吟视频| 另类亚洲欧美激情| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲中文av在线| 国产激情久久老熟女| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲精品色激情综合| 精品午夜福利在线看| 亚洲国产最新在线播放| 欧美人与性动交α欧美软件 | 自线自在国产av| 久久精品国产亚洲av涩爱| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 五月伊人婷婷丁香| av又黄又爽大尺度在线免费看| 男男h啪啪无遮挡| 青春草国产在线视频| 一个人免费看片子| 亚洲成色77777| 观看av在线不卡| 一本久久精品| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 精品国产一区二区久久| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 亚洲第一av免费看| 日本午夜av视频| 咕卡用的链子| 精品少妇黑人巨大在线播放| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲一区二区三区欧美精品| 婷婷色综合www| 熟女av电影| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 麻豆乱淫一区二区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲人与动物交配视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 伦理电影免费视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲一区二区三区欧美精品| 一本大道久久a久久精品| 熟女av电影| 国产成人免费观看mmmm| 国产69精品久久久久777片| 亚洲人成77777在线视频| 少妇的逼好多水| 在线观看www视频免费| 大陆偷拍与自拍| 精品一区在线观看国产| 少妇精品久久久久久久| av免费观看日本| 亚洲av免费高清在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 一级片'在线观看视频| 久久久精品区二区三区| 天天操日日干夜夜撸| 免费大片18禁| 久久狼人影院| 国产 一区精品| 久久ye,这里只有精品| 久久久久久人妻| 天天操日日干夜夜撸| 国精品久久久久久国模美| 男人添女人高潮全过程视频| 人人妻人人澡人人看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 99国产综合亚洲精品| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产色爽女视频免费观看| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲国产最新在线播放| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 国产探花极品一区二区| 精品一区在线观看国产| 国产一区有黄有色的免费视频| 欧美精品一区二区免费开放| 丝袜脚勾引网站| 免费大片黄手机在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美 日韩 精品 国产| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲成人手机| 伦精品一区二区三区| 777米奇影视久久| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久免费观看电影| 老司机亚洲免费影院| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 欧美+日韩+精品| 大码成人一级视频| 国产深夜福利视频在线观看| 日本午夜av视频| 丝袜脚勾引网站| 国产精品一区二区在线观看99| 国国产精品蜜臀av免费| 国产色爽女视频免费观看| 五月伊人婷婷丁香| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲国产最新在线播放| 国产成人精品福利久久| 在线观看美女被高潮喷水网站| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 黄片无遮挡物在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 伦精品一区二区三区| 一级片'在线观看视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 精品亚洲乱码少妇综合久久| 最黄视频免费看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产免费福利视频在线观看| 一级毛片我不卡| 国产毛片在线视频| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 少妇精品久久久久久久| av片东京热男人的天堂| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 十八禁高潮呻吟视频| 国产精品无大码| 亚洲精品国产av成人精品| 在线观看一区二区三区激情| 国产一区二区三区综合在线观看 | 久久精品国产亚洲av涩爱| 欧美最新免费一区二区三区| 国产精品 国内视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲欧美清纯卡通| 免费黄网站久久成人精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| a级毛片在线看网站| 一级a做视频免费观看| 一级毛片我不卡| 免费黄频网站在线观看国产| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 午夜免费鲁丝| 久久99热6这里只有精品| 在线天堂中文资源库| 精品一区在线观看国产| 精品人妻在线不人妻| 久久久久久伊人网av| 999精品在线视频| a级毛片在线看网站| 国产精品久久久久成人av| 黄色配什么色好看| 天美传媒精品一区二区| 99re6热这里在线精品视频| 色哟哟·www| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 久久人人97超碰香蕉20202| 超色免费av| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产av码专区亚洲av| 黑人欧美特级aaaaaa片| kizo精华| 久久影院123| 久热这里只有精品99| 精品久久蜜臀av无| 国产精品久久久av美女十八| 七月丁香在线播放| 国产乱来视频区| 岛国毛片在线播放| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久久久视频综合| 国产精品久久久久成人av| 18禁动态无遮挡网站| 老女人水多毛片| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲性久久影院| 欧美精品av麻豆av| 日韩成人伦理影院| 青春草亚洲视频在线观看| 久久狼人影院| 国产成人精品婷婷| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日韩大片免费观看网站| 新久久久久国产一级毛片| 搡女人真爽免费视频火全软件| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲美女搞黄在线观看| 18+在线观看网站| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 最近中文字幕高清免费大全6| 老熟女久久久| 亚洲成色77777| 波多野结衣一区麻豆| 丰满少妇做爰视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 天堂中文最新版在线下载| 国产一区二区在线观看av| 国产亚洲精品久久久com| 久久这里有精品视频免费| 日韩人妻精品一区2区三区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 性色av一级| av有码第一页| 午夜激情久久久久久久| 丰满饥渴人妻一区二区三| 九草在线视频观看| 亚洲色图综合在线观看| 国产精品.久久久| 看免费av毛片| 女性生殖器流出的白浆| 久久韩国三级中文字幕| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产成人a∨麻豆精品| 国产在线视频一区二区| 国产免费视频播放在线视频| 老司机影院毛片| 国产成人a∨麻豆精品| 女性生殖器流出的白浆| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久鲁丝午夜福利片| 免费大片18禁| 九草在线视频观看| videossex国产| 色网站视频免费| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 黑丝袜美女国产一区| 毛片一级片免费看久久久久| 熟女电影av网| 美女国产高潮福利片在线看| 国产免费一级a男人的天堂| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲精品aⅴ在线观看| 五月天丁香电影| 男女免费视频国产| 欧美日韩av久久| 边亲边吃奶的免费视频| 99热6这里只有精品| 超色免费av| 妹子高潮喷水视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 26uuu在线亚洲综合色| 中文字幕制服av| 看非洲黑人一级黄片| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 精品亚洲成国产av| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲成国产人片在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲国产欧美在线一区| 赤兔流量卡办理| 亚洲国产精品一区三区| www.av在线官网国产| 高清不卡的av网站| 欧美最新免费一区二区三区| 99久国产av精品国产电影| 交换朋友夫妻互换小说| 久久久精品区二区三区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 精品亚洲成a人片在线观看| 久久久久久伊人网av| 国产精品久久久av美女十八| 丰满乱子伦码专区| 久久av网站| 视频中文字幕在线观看| 免费av不卡在线播放| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 99久国产av精品国产电影| 欧美精品一区二区大全| 天堂俺去俺来也www色官网| 日本色播在线视频| 自线自在国产av| av免费在线看不卡| 在线观看免费视频网站a站| 国产激情久久老熟女| 97超碰精品成人国产| 色视频在线一区二区三区| 国产精品.久久久| 国产在视频线精品| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 99热全是精品| 免费在线观看黄色视频的| 高清毛片免费看| 最黄视频免费看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲成国产人片在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 免费av中文字幕在线| 另类亚洲欧美激情| 免费观看无遮挡的男女| 久久久久久久久久人人人人人人| 五月天丁香电影| 丝袜人妻中文字幕| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲成国产人片在线观看| 日韩一区二区视频免费看| 久久ye,这里只有精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 免费观看无遮挡的男女| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 51国产日韩欧美| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 免费人妻精品一区二区三区视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲美女视频黄频| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲内射少妇av| 亚洲精品一二三| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲中文av在线| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲精品自拍成人| 又黄又粗又硬又大视频| 日本免费在线观看一区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 26uuu在线亚洲综合色| 午夜福利视频在线观看免费| av一本久久久久| 99re6热这里在线精品视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 伊人亚洲综合成人网| 成人二区视频| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 日韩一本色道免费dvd| 中文字幕av电影在线播放| 蜜桃在线观看..| 亚洲av福利一区| 午夜福利视频在线观看免费| 99热网站在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲经典国产精华液单| 日日爽夜夜爽网站| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 蜜桃国产av成人99| 久久99精品国语久久久| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 日韩成人伦理影院| 黑人猛操日本美女一级片| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲美女视频黄频| 黄色 视频免费看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 丰满少妇做爰视频| 看十八女毛片水多多多| 日韩成人av中文字幕在线观看| 热99久久久久精品小说推荐| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| videos熟女内射| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲图色成人| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 三上悠亚av全集在线观看| 午夜av观看不卡| 亚洲精品456在线播放app| 国产极品天堂在线| 99热6这里只有精品| 蜜臀久久99精品久久宅男| 天堂俺去俺来也www色官网| 欧美日韩成人在线一区二区| 秋霞在线观看毛片| 大香蕉久久成人网| 热re99久久精品国产66热6| 两性夫妻黄色片 | 亚洲精华国产精华液的使用体验| 激情五月婷婷亚洲| h视频一区二区三区| 成人漫画全彩无遮挡| 少妇高潮的动态图| 国产精品99久久99久久久不卡 | 免费高清在线观看视频在线观看| av在线app专区| 国产精品一区二区在线不卡| 色94色欧美一区二区| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲美女视频黄频| 国产精品国产av在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 91久久精品国产一区二区三区| 女人久久www免费人成看片| 五月天丁香电影| 欧美日韩精品成人综合77777| 美女中出高潮动态图| 精品第一国产精品| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产精品一二三区在线看| 中国三级夫妇交换| 99re6热这里在线精品视频| 日本欧美国产在线视频| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲国产看品久久| 在线观看免费高清a一片| 交换朋友夫妻互换小说| 自线自在国产av| 伦理电影免费视频| 熟女电影av网| 999精品在线视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 黄色配什么色好看| 一二三四在线观看免费中文在 | 丝袜在线中文字幕| 国产男女内射视频| 波野结衣二区三区在线| a级毛色黄片| 国产精品人妻久久久影院| 久久鲁丝午夜福利片| 国产精品一区www在线观看| 草草在线视频免费看| 18禁国产床啪视频网站| 精品久久久精品久久久| 亚洲精品,欧美精品| 国产日韩欧美在线精品| 久久 成人 亚洲| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲伊人色综图| 搡老乐熟女国产| 免费观看在线日韩| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 欧美另类一区| 久久国产精品大桥未久av| 国产亚洲精品久久久com| 美女大奶头黄色视频| 三级国产精品片| 香蕉国产在线看| 久久久久久久国产电影| 国产极品粉嫩免费观看在线| 日本91视频免费播放| 国产激情久久老熟女| 精品人妻在线不人妻| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产淫语在线视频| 国产精品欧美亚洲77777| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲国产精品一区三区| 免费大片黄手机在线观看| 热re99久久国产66热| 国产av精品麻豆| a级毛片黄视频| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲成人一二三区av| 视频区图区小说| 男人添女人高潮全过程视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久女婷五月综合色啪小说| 大香蕉97超碰在线| 国产极品天堂在线|