荊州周邊地區(qū)豬場(chǎng)飼料真菌及霉菌毒素的檢測(cè)

余云雷，溫凌子 (長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,湖北 荊州 434025)

荊州周邊地區(qū)豬場(chǎng)飼料真菌及霉菌毒素的檢測(cè)

余云雷，溫凌子 (長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,湖北 荊州 434025)

以湖北荊州周邊地區(qū)3個(gè)豬場(chǎng)所使用的飼料為研究對(duì)象，采用吸水紙檢測(cè)法對(duì)飼料中的真菌種類進(jìn)行了調(diào)查，并采用真菌毒素ELISA試劑盒對(duì)飼料樣品中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、T-2毒素、嘔吐毒素和伏馬毒素進(jìn)行了檢測(cè)，分析了飼料被污染的程度。結(jié)果表明，所檢測(cè)的配合飼料、全價(jià)飼料、玉米和豆粕普遍受到了以上6種霉菌毒素的污染。飼料樣品中玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的檢出率高達(dá)100％，黃曲霉毒素B1和T-2毒素的檢出率平均在80％以上。

飼料；霉菌；霉菌毒素

真菌對(duì)飼料的污染常常引起飼料霉腐變質(zhì)。據(jù)美國(guó)食品和藥物管理局調(diào)查，全球每年至少有25％的飼料及飼料原料受到真菌毒素的污染，造成飼料業(yè)和畜牧業(yè)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。其中，大多數(shù)飼料原料和混合飼料的霉變是由于在收獲、運(yùn)輸過(guò)程或貯藏期間操作不當(dāng)引起。

真菌的種類很多，其中能夠污染食品和飼料的真菌約有30余種，主要有黃曲霉、赭曲霉、橘青霉、展開(kāi)青霉、黃綠青霉和串珠鐮刀菌等[1]。這些真菌在一定溫度和濕度條件下能在飼料中大量繁殖。有些真菌(如黃曲霉素、赭曲霉等)還會(huì)產(chǎn)生具有細(xì)胞毒性或神經(jīng)毒性的真菌毒素[2]。真菌污染飼料不僅使飼料質(zhì)量、營(yíng)養(yǎng)方面的效用降低，還會(huì)在動(dòng)物食用后引起動(dòng)物機(jī)體的急慢性中毒，使動(dòng)物免疫機(jī)能受到抑制，嚴(yán)重的甚至引起死亡[3]。此外，飼料中真菌毒素對(duì)動(dòng)物的影響還會(huì)直接或間接進(jìn)入食物鏈，從而危害到人類健康[4]。對(duì)豬場(chǎng)飼料中的真菌種類進(jìn)行調(diào)查，可以有針對(duì)性地采取相應(yīng)措施避免飼料真菌污染，對(duì)預(yù)防動(dòng)物真菌中毒和危及人類具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 樣品

來(lái)自湖北省荊州周邊的3個(gè)豬場(chǎng)，主要采集飼料和原料。共抽取樣品44份，其中配合飼料12份，玉米8份，豆粕10份，全價(jià)飼料14份。

1.2 主要試劑

黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、T-2毒素、嘔吐毒素和伏馬毒素ELISA試劑盒系北京翔遠(yuǎn)同創(chuàng)科技有限公司產(chǎn)品。

1.3 真菌種類的檢測(cè)

參照王建華等[5]的方法采用吸水紙檢測(cè)法進(jìn)行。將用無(wú)菌水浸透的3層無(wú)菌濾紙放于直徑9cm的能透近紫外光的玻璃培養(yǎng)皿中，每皿多點(diǎn)點(diǎn)植樣品，每個(gè)樣品檢測(cè)2皿。在22℃下，采取12h近紫外光/12h黑暗培養(yǎng)，光照距離為40cm，7～10d后在顯微鏡和解剖鏡下觀察真菌，并記錄每個(gè)樣品所攜帶真菌的種類。

1.4 真菌毒素的測(cè)定

(1)樣品處理 將粉碎好的配合飼料、全價(jià)飼料、玉米和豆粕樣品過(guò)20目篩后，每個(gè)樣品稱取20g分別置于帶塞錐形瓶中，并加入100ml 70％的甲醇水溶液，搖勻后靜置2～3min，自然沉淀。然后用玻璃纖維濾紙過(guò)濾水相萃取物，收集萃取物待測(cè)。

(2)毒素的檢測(cè) 采用雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)按照試劑盒使用說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。向預(yù)先包被霉菌毒素試劑盒抗體的酶標(biāo)孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和HRP標(biāo)記的霉菌毒素抗體，經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，再加入底物，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上讀取光密度D450nm值，參照標(biāo)準(zhǔn)品判定結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中真菌的種類

經(jīng)檢測(cè)，配合飼料、全價(jià)飼料、玉米和豆粕4種飼料的44個(gè)樣品中主要存在的真菌有6種：黃曲霉、鐮孢菌、梭霉菌、赭曲霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌。

2.2 配合飼料樣品中6種真菌毒素的檢測(cè)

表1 配合飼料樣品中6種真菌毒素的檢測(cè)結(jié)果

表2 玉米樣品中6種真菌毒素的檢測(cè)結(jié)果

表3 豆粕樣品中6種真茵毒素的檢測(cè)結(jié)果

表4 全價(jià)料樣品中6種真菌毒素的檢測(cè)結(jié)果

在被檢測(cè)的12份配合飼料樣品中均檢測(cè)到玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A，檢出率為100％。12份中被檢出含有伏馬毒素的有11份，含有黃曲霉毒素B1、T-2毒素的分別有10份，含有嘔吐毒素的有9份(表1)。

2.3玉米樣品中6種真菌毒素的檢測(cè)結(jié)果

在被檢測(cè)的8份玉米樣品中均含有伏馬毒素、赭曲霉毒素，含有黃曲霉毒素B1的有7份，含有T-2毒素的有6份，含有嘔吐毒素的有5份，含有玉米赤霉烯酮的有5份(表2)。

2.4豆粕樣品中6種真菌毒素的檢測(cè)結(jié)果

所檢10份豆粕樣品中均檢測(cè)出含有玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素，而含有T-2毒素的有9份，含有伏馬毒素、嘔吐毒素、黃曲霉毒素的分別有7份、6份、8份(表3)。

2.5全價(jià)料樣品中6種真菌毒素的檢測(cè)結(jié)果

在被檢測(cè)的14份全價(jià)料飼料樣品中均含有玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A，含有伏馬毒素的有13份，含有黃曲霉毒素B1、T-2毒素、嘔吐毒素的分別有12份(表4)。說(shuō)明飼料受到6種霉菌毒素的污染比較普遍。

3 討論

本調(diào)查結(jié)果表明，所檢4類樣品(配合飼料、玉米、豆粕和全價(jià)料)普遍受到黃曲霉毒素B1、T-2毒素、嘔吐毒素、伏馬毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素6種霉菌毒素的污染，污染率均在60％以上。其中黃曲霉毒素B1污染最為嚴(yán)重，在配合飼料、全價(jià)飼料和玉米中達(dá)到嚴(yán)重污染的程度。由于測(cè)定是在12月到4月之間進(jìn)行，這段時(shí)間潮濕度較高，降雨量大，雨季恰好與熱季重疊，容易形成高溫高濕的氣候而適合霉菌生長(zhǎng)和產(chǎn)生真菌毒素，推測(cè)這是造成霉變和產(chǎn)生毒素的主要原因。

同時(shí)，本調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，黃曲霉毒素B1和T-2毒素對(duì)飼料的污染比較嚴(yán)重，而受到伏馬毒素和嘔吐毒素的污染較輕，原因可能在于鐮刀菌屬于田間霉菌，在作物生長(zhǎng)和收獲期間比較容易滋生和產(chǎn)生毒素(主要包括伏馬毒索、嘔吐毒素、T-2毒素和玉米赤霉烯酮)。而曲霉菌屬于倉(cāng)儲(chǔ)性霉菌，主要在糧食和谷物的儲(chǔ)存階段生長(zhǎng)和產(chǎn)生毒素(主要包括黃曲霉毒素B1和赭曲霉毒素)。近幾年的暴雨導(dǎo)致了一些原料含水量超標(biāo)，加上高溫天氣造成真菌毒素超標(biāo)，特別是黃曲霉毒素B1的超標(biāo)。溫度、O2和CO2濃度及濕度之間的相互作用決定了霉菌定殖的程度。在眾多的飼料發(fā)生霉變的地區(qū)來(lái)看，我國(guó)南方地區(qū)都要高于北方，這是因?yàn)槟戏降臍鉁?、濕度更適合于黃曲霉的生長(zhǎng)繁殖，特別是梅雨季節(jié)，黃曲霉更容易生長(zhǎng)。

調(diào)查分析到的6種主要真菌幾乎存在于所檢測(cè)的所有原料和動(dòng)物的飼料中。由于這些霉菌和毒素能夠引起動(dòng)物中毒等多種危害，也是動(dòng)物飼料污染而且引起霉腐變質(zhì)的常見(jiàn)菌類。真菌污染飼料不僅造成經(jīng)濟(jì)上的損失，而更加嚴(yán)重的是真菌在飼料中的生長(zhǎng)代謝過(guò)程中產(chǎn)生的各種真菌毒素，會(huì)引起動(dòng)物慢性和急性中毒，因而應(yīng)更加注意飼料的衛(wèi)生。真菌污染飼料，主要有以下的2個(gè)原因：原料運(yùn)輸和加工過(guò)程中污染了霉菌孢子；在儲(chǔ)藏、銷售期間管理不善，懸浮于空氣中的霉菌孢子隨塵埃落到飼料上。防止飼料的真菌污染，除了應(yīng)該在生產(chǎn)管理和運(yùn)輸衛(wèi)生方面加強(qiáng)外，更應(yīng)該注意飼料的儲(chǔ)藏。

[1]王希春，何成華，劉海明．真菌毒素的污染、危害及其檢測(cè)技術(shù)[J].畜牧與獸醫(yī),2009,(8):23-34.

[2]陳小有，張衛(wèi)東.飼料中霉菌及真菌毒素的危害及控制措施[J].河南水產(chǎn),2011,(2):15-16.

[3]王代強(qiáng)，陳 巖.谷物、飼料中霉菌毒素的特點(diǎn)及檢測(cè)方法[J].飼料與種植,2009,(11):49-50.

[4]鮑 營(yíng)，梁成珠，劉學(xué)惠．出入境農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素的污染、檢測(cè)及控制[J].食品安全與檢測(cè),2005,(1):60-61.

[5]王建華,Tylkowska K.22份菜豆(PhaseolusvulgarisL.)種質(zhì)健康研究[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,8(5):55-60.

[6]朱立平，陳學(xué)清．免疫學(xué)常用實(shí)驗(yàn)方法[J]．北京：人民軍醫(yī)出版社,2000:23-74.

10.3969/j.issn.1673-1409(S).2012.03.008

S816.3

A

1673-1409(2012)03-S027-03

2012-03-10

余云雷(1970-)，男，湖北江陵人，碩士生，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事重大動(dòng)物疾病的防控研究。