夏桑菊顆粒快速檢驗方法探討

汪文峰(天門市黃潭鎮(zhèn)衛(wèi)生院藥劑科，湖北 天門 431700)

周 芳(十堰市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，湖北 十堰 442011)

陳銀華(十堰市食品藥品監(jiān)督檢驗所，湖北 十堰 442000)

夏桑菊顆粒快速檢驗方法探討

汪文峰(天門市黃潭鎮(zhèn)衛(wèi)生院藥劑科，湖北 天門 431700)

周 芳(十堰市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，湖北 十堰 442011)

陳銀華(十堰市食品藥品監(jiān)督檢驗所，湖北 十堰 442000)

目的：建立夏桑菊顆粒的快速檢驗方法。方法：對4批不同廠家、批號的夏桑菊顆粒進行實驗，在衛(wèi)生部中藥成方制劑收載的檢驗標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上對鑒別項化學(xué)反應(yīng)及薄層色譜提取方法、溶劑和展開系統(tǒng)進行了改進。結(jié)果：改進后的檢驗方法簡便、快速，經(jīng)濟、環(huán)保，結(jié)果更加明顯。結(jié)論：該方法適合于夏桑菊顆粒的快速篩查。

夏桑菊顆粒；快速檢驗；熊果酸

夏桑菊顆粒收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第15冊，具有清肝明目、疏風(fēng)散熱、除濕痹、解瘡毒的功能。用于風(fēng)熱感冒、目赤頭痛、高血壓、頭-暈耳鳴、咽喉腫痛、疔瘡腫毒等癥狀，并可作清涼飲料[1]。處方為夏枯草500g、桑葉175g、野菊花80g，經(jīng)加工制成1000g顆粒，夏枯草為主藥。筆者在原檢驗標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，對夏桑菊顆粒的快速檢驗方法進行了探討。

1 材料與試劑

共收集4個廠家的4批樣品：四川金藥師制藥有限公司，批號：090501；四川菲德力制藥有限公司，批號：100308；太極集團四川綿陽制藥有限公司，批號：55100019；四川蜀中制藥有限公司，批號：090104。

陰性對照用野菊花藥材：亳州宏宇飲片廠，產(chǎn)地湖北，批號100813；桑葉：亳州市永剛飲片廠，產(chǎn)地湖北，批號091227。

熊果酸對照品：中國藥品生物制品檢定所，批號742-8701，鑒別用。硅膠G薄層預(yù)制板購自青島海洋化工廠分廠。試驗所用試劑均為分析純。

2 方 法

2.1鑒別一的改進

原標(biāo)準(zhǔn)收載方法：取本品5g，置乳缽中研細，移至錐形瓶中，加乙醇25ml，置水浴上微熱半小時，濾過，濾液置蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，滴加三氯化銻飽和的氯仿溶液，再蒸干，即顯紫褐色。

改進后的方法：取本品20g，研細，加乙醇約15～20ml(以控制濾液約2ml為度)，研磨5min，濾過，取濾液1～2滴，點于濾紙上，吹干，加三氯化鋁試液1～2滴，吹干，置紫外光燈(365nm)下觀察，顯黃綠色熒光。

2.2鑒別二的改進

原標(biāo)準(zhǔn)收載方法：取樣品20g置于磨口三角燒瓶中，加水100ml，鹽酸15ml，置水浴中加熱回流2h，取出，濾過，棄去濾液，殘渣揮干，用乙醚振搖提取3次，每次25ml，合并乙醚提取液，回收盡乙醚，殘渣用乙醚2ml溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15μl、對照品溶液2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶5∶8∶0.5)為展開劑，展開，取出，涼干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。

改進后方法的不同處如下：取本品20g，研細，加乙醇約15～20ml(以控制濾液約2ml為度)，研磨5min，濾過，濾液作為供試品溶液。展開劑改為環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶0.5)。噴顯色劑后，熱風(fēng)吹至斑點顯色清晰。其它同原標(biāo)準(zhǔn)。

2. 3陰性對照溶液的制備

按樣品的制備工藝，從中除去夏枯草藥材，制得陰性樣品，同供試品溶液的制備方法制得陰性對照溶液。

3 鑒別試驗結(jié)果

3.1鑒別一改進試驗結(jié)果

按改進后的方法，鑒別一改進試驗結(jié)果見圖1。

圖1 鑒別一改進試驗結(jié)果

3.2鑒別二改進試驗結(jié)果

按改進后的方法，對收集到的4批夏桑菊顆粒和自制的陰性對照溶液進行實驗，結(jié)果斑點清晰，易于辨別，陰性無干擾，能滿足快速檢驗的要求。見圖2。

圖2 鑒別二改進試驗結(jié)果

4 討 論

4.1在鑒別一中改用三氯化鋁反應(yīng)

在原標(biāo)準(zhǔn)鑒別一中，三氯化銻反應(yīng)主要是用于在無水條件下檢測萜類、甾體和黃酮類化合物，屬通用型顯色劑，專屬性相對較差。另外，三氯化銻高毒且有強腐蝕性，遇水強烈反應(yīng)產(chǎn)生氯化氫并生成不溶于水的三氧化二銻，粘附于玻璃器皿壁，試驗完成后不易清洗。夏枯草果穗中主要含熊果酸、齊墩果酸和β-香樹脂醇等三萜類化合物，其中熊果酸含量較高。夏桑菊顆粒的三味藥中均含有較多黃酮及其苷類成分，桑葉中含有蕓香苷、槲皮素、異槲皮苷等，野菊花中含有刺槐素、木犀草素及其苷類等，夏枯草中含有蘆丁、異槲皮苷、木犀草素、夏枯草苷等[2]。因此筆者將鑒別一改為三氯化鋁反應(yīng)，用于檢測黃酮類化合物更有針對性。該方法操作簡便快速，反應(yīng)明顯，空白無干擾，重現(xiàn)性好。

4.2鑒別二中薄層鑒別提取溶劑及方法的選擇

按中藥成方制劑中的方法制備供試品，加鹽酸處理后的樣品，棄去濾液，殘渣含大量水，很難揮干。用乙醚振搖提取，不易提取充分，而且合并的乙醚提取液因含有水分而不易蒸干，容易導(dǎo)致最后制得的供試品溶液中熊果酸含量偏低，薄層層析后供試品色譜中，在與熊果酸對照品色譜相應(yīng)的位置上，無斑點出現(xiàn)或僅限淡黃色斑點，需加大數(shù)倍的點樣量才能出現(xiàn)與熊果酸對照品色譜相應(yīng)的紅色斑點。而且殘渣最后用2ml乙醚溶解作為供試品溶液，乙醚沸點低，揮發(fā)快，使點樣量不易控制，污染大。

為了篩選出簡便快捷環(huán)保的提取方法，比較了乙醚超聲提取[3]、無水乙醇超聲提取[4]、乙醇超聲提取和乙醇研磨提取等方法，幾種方法差異不大，考慮快速、簡便的原則，我們采取研磨的方法。在溶劑的選擇上，綜合考慮廉價、易得、環(huán)保、方便的原則，最終選擇乙醇作為提取和定容溶劑。

提取溶劑加入量的選擇：現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)多采用充分加入溶劑提取，濾液蒸干,定量溶解的辦法解決這一問題，而運用于快檢中，顯然過于煩瑣。為此,提出了控制濾出量的思路，根據(jù)樣品的實驗情況，給出一定的加液范圍，控制濾出量在2ml左右，從而控制供試品溶液的濃度相對穩(wěn)定[5]。在實際操作過程中，研磨后靜置一會兒，取上清液部分過濾，較容易濾出。

4.3展開劑的選擇

實驗比較了環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶5∶8∶0.5)[1]、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)[6]、異辛烷-苯-氯仿-醋酸乙酯-甲酯(6∶3∶1.5∶3∶0.5)[3]、環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶0.5)等展開劑，展開效果均較好。研究過程充分考慮到環(huán)保要求，決定在原標(biāo)準(zhǔn)的展開系統(tǒng)基礎(chǔ)上進行微調(diào)，除去氯仿，調(diào)節(jié)展開劑組分比例，最終確定展開劑為環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶0.5)，系統(tǒng)展開速度快，而且也符合環(huán)保要求，并且Rf值適中，斑點清晰，易于辨別，重現(xiàn)性好。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)——中藥成方制劑[S]. 15冊. 1997：164.

[2]肖培根. 新編中藥志[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008：483.

[3]趙霞，尚桂麗. 夏桑菊顆粒薄層鑒別提取方法的改進[J]. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2009，25(5)：695-696.

[4]肖東華，呂越. 夏桑菊顆粒有效成分測定中薄層色譜鑒別法的改進[J]. 河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2003，18(4)：34-35.

[5]薛玉梅，黃麗丹，王鼎. 六味地黃丸系列中成藥快檢方法研究[J]. 藥物分析雜志，2009，29(2)：282-284.

[6]劉莉，張翔. 降糖寧膠囊薄層鑒別方法的研究[J]. 黑龍江醫(yī)藥，2007，20(1)：18-19.

[編輯] 一 凡

R282.7

A

1673-1409(2012)04-R069-03

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.04.034

2012-02-26

汪文峰(1977-)，男，湖北天門人，主管中藥師，主要從事醫(yī)院中藥學(xué)工作。