離心時間對凝血常規(guī)測定結(jié)果的影響

李玉芹，趙欣

(1.四川省醫(yī)學科學院·四川省人民醫(yī)院檢驗科，四川成都610072;2.成都市血液中心檢驗科，四川成都610041)

離心時間對凝血常規(guī)測定結(jié)果的影響

李玉芹1，趙欣2

(1.四川省醫(yī)學科學院·四川省人民醫(yī)院檢驗科，四川成都610072;2.成都市血液中心檢驗科，四川成都610041)

目的分析不同時間離心全血所得的血漿測定凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)和纖維蛋白原濃度(FIB)的結(jié)果差異性，確定最適合實際工作的離心時間。方法將100例門診患者的抗凝全血(每例兩管)分為A組和B組，在相同條件下，分別離心10 min和5 min，用CA-7000型全自動血凝儀進行血凝常規(guī)檢測，并且應用XE-2100全自動血細胞分析儀測定血小板計數(shù)。結(jié)果各項測定結(jié)果在離心5和10 min兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);血漿血小板計數(shù)A組(離心10 min)和B組(離心5 min)的測定結(jié)果范圍分別為(1～8)×109/L和(3～10)×109/L，均達到了乏血小板血漿的標準［＜(10～20)×109/L］［1］。結(jié)論凝血常規(guī)標本可以3000 r/min離心5 min后進行測定。

離心時間;凝血酶原時間;活化部分凝血活酶時間;纖維蛋白原濃度;凝血酶時間

凝血常規(guī)包括凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)和纖維蛋白原濃度(FIB)，其作為凝血功能異常的篩查試驗，在出血性疾病診斷、抗凝治療監(jiān)測、術(shù)前檢查中具有重要作用。凝血四項的標本需要離心，離心時間的長短決定了能否獲得乏血小板血漿，凝血標本一般要求3000 r/min離心10 min后分離血漿［2］。但在實際工作中由于生化、免疫等標本都是離心5 min，而凝血標本離心時間與它們不一致，帶來很多不便。還有當遇到急診標本時，為了提高工作效率(特別是對于危重患者)，我們想了解縮短標本的離心時間是否可能導致假性異常結(jié)果。本研究將兩組抗凝全血分別離心5和10 min，在相同條件下測定結(jié)果，然后分析兩組結(jié)果差異有無統(tǒng)計學意義，以確定最適合實際工作的離心時間。

1 資料與方法

1.1 一般資料隨機采集2010年8月13～21日在四川省人民醫(yī)院就診的100例門診患者的抗凝全血，每例患者抽血兩管，分為A、B兩組，A組離心10 min，B組離心5 min。

1.2 方法相同條件下(每天上午8～10點同一患者同時抽兩管抗凝全血)，用規(guī)格為21 g×1″的BDTM回血采血針采取患者的靜脈血1.8 ml(無溶血、脂血、黃疸和血凝塊，如有上述情況的標本棄之)，于0.109 mol/L枸櫞酸鈉為抗凝劑(血液與抗凝劑之比為9︰1)的藍頭真空采血管中(每例兩管)，輕輕顛倒5～8次使之充分混勻，并在管上做好標記。兩組血液以3000 r/min的轉(zhuǎn)速分別離心10和5 min，立刻按照操作手冊上機(SysmexCA-7000型全自動血凝儀)進行血凝常規(guī)(PT、APTT、FIB、TT)檢測。用Sysmex XE-2100全血細胞分析儀對兩組標本血漿進行血小板測定，然后用改良牛鮑計數(shù)板手工復查。SysmexCA-7000型全自動血凝儀所用試劑及質(zhì)控品均為德國Dade Behring Marburg公司生產(chǎn)的凝血試劑;Sysmex XE-2100血液分析儀所用試劑為日本Sysmex公司生產(chǎn)的儀器配套試劑。

1.3 室內(nèi)質(zhì)控每天測定標本前分別用與相應儀器配套的同一批號的高中兩種值的質(zhì)控品對Sysmex CA-7000型全自動血凝儀和Sysmex XE-2100全血細胞分析儀進行室內(nèi)質(zhì)控，各項目均處于在控狀態(tài)。各項目重復性實驗測定的變異系數(shù)(CV)均＜5%。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS 10.0專業(yè)版統(tǒng)計分析軟件進行分析。檢測結(jié)果以均數(shù)±標準差表示，用配對t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同離心時間凝血各項指標測定結(jié)果見表1。

表1 不同離心時間凝血各項指標測定結(jié)果的比較

2.2 不同離心時間血漿血小板計數(shù)A組和B組的測定結(jié)果范圍分別為(3～12)×109/L和(1～8)×109/L，均達到了乏血小板血漿的標準［＜(10～20)×109/L］［1］。

3 討論

在血栓和止血檢驗的全過程中，實驗結(jié)果受到受血者狀態(tài)、標本采集后放置時間與處理、抗凝劑與試劑、儀器設備等多方面因素的影響［3］。鑒于此，我們設計的實驗是將100例門診患者的靜脈全血分兩組，在相同條件下分別離心10和5 min，立即用CA-7000型全自動血凝儀測定結(jié)果，最大限度地保證了對比實驗單變量的原則。

在實際工作中，因免疫、生化、凝血標本都使用共同離心機離心，而免疫、生化標本離心時間為5 min，若凝血標本離心10 min，常常是先與免疫、生化標一起離心5 min后，又再離心5 min。有些檢驗人員，在離心5 min后也就未再離心，使得凝血標本的離心時間不一致，因此我們想通過實驗，觀察凝血標本離心10 min和離心5 min之間各項結(jié)果是否會受影響。從表1可以看出，各項凝血指標的測定結(jié)果組間的差異均無統(tǒng)計學意義。

雖然各項凝血檢驗結(jié)果的差異無統(tǒng)計學意義，但APTT的P值最小(P=0.052)，說明離心時間的縮短對內(nèi)源性凝血途徑的檢測影響最大。究其原因，我們分析認為，血小板在體內(nèi)凝血過程中發(fā)揮重要作用?；罨“逄峁┑难“宓谌蜃?PF3)是體內(nèi)凝血過程重要組成部分。PF3參與內(nèi)源性凝血途徑中復合物FⅨ-FⅧa-Ca-PF3的合成，不僅對因子Ⅹ(FⅩ)有活化作用，而且血小板對FⅧ具有濃縮作用并能促進FⅨ活化［4］。體外檢測APTT時就是以腦磷脂代替血小板提供催化表面的。在共同途徑中，PF3提供催化表面，促進凝血酶原轉(zhuǎn)變成凝血酶?；罨蜃?FⅩa)在血小板膜上結(jié)合可加速凝血反應，其催化凝血酶原轉(zhuǎn)變成凝血酶的能力，比未結(jié)合活化因子Ⅹ促凝快300000倍［5］。研究表明，血小板的磷脂與蛋白成分共同促進了凝血酶原酶與凝血酶的形成，使整個凝血過程加速2×108倍［6］。這樣算下來，血小板可使內(nèi)源性凝血途徑提速將近1000倍。如果離心時間不夠，血小板沒有完全沉降，相應凝血的磷脂催化表面增加，從而使APTT檢測時間縮短。因此必須保證3000 r/min及5 min的離心速度和時間，這樣既能提高檢驗速度，又能確保獲得乏血小板血漿，以避免影響APTT的結(jié)果，從而使免疫、生化、凝血標本離心時間保持一致.

［1］陳宏礎，王鴻利等，全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.第3版.南京:東南大學出版社，2006:202.

［2］叢玉隆.關于衛(wèi)生部出凝血時間操作規(guī)程《通知》的理解［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2001，24(3):158.

［3］陳林興，黃華.時間和溫度對凝血酶原時間、活化部分凝血活酶時間、凝血酶時間、纖維蛋白原濃度測定結(jié)果的影響分析［J］.汕頭大學醫(yī)學院學報，2004，17(1):42-43.

［4］王鴻利，王學鋒.血栓病臨床新技術(shù)［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2003:20-23.

［5］王振義.血栓與止血基礎理論與實踐［M］.上海:上?？萍汲霭嫔?，1996:52-60.

［6］Ahmad SS，London FS，Walsh PN.The assembly of the factor X-activating complex on activated human platelets［J］.J Thromb Haemost，2003，1:48-59.

The influence of centrifugal time to results of indexes of coagulation

LI Yu-qin1，ZHAO Xin2(1. Department of Clinical Laboratory，Sichuan Provincial People's Hospital，Chengdu 610072，China;2.Clinical Laboratory Department of Chengdu blood center，Chengdu 610041，China)

ObjectiveTo ascertain the optimum centrifugal time for our work by analysing the differences between the blood plasma specimen's results which include plasma prothrombin time(PT)，activated partial thrombo-plasting time(APTT)，thrombin time(TT)and fibrinogen concentration(FIB)which are centrifuged in different time.Methods100 outpatients vein entire blood samples(two per example)are divided into A group and B group，which is respectively centrifuged 10 minutes and 5 minutes in the same situation.The PT，APTT，TT and FIB results were tested by CA-7000 full-automatic blood coagulation analyzer.The platelet of the blood plasma were measured by Sysmex XE-2100 full-automatic blood cell analyzer.Resultsin centrifugal 10 minutes and 5 minutes has no significant difference(P＞0.05).The range of the results of the platelet in the plasma for A group and the B group is(1～8)×109/L and(3～10)×109/L respectively，both of them are up the standard of the poor platelet plasma［＜(10～20)×109/L］.ConclusionCoagulation specimen can be measured by centrifuged with 3000 r/min speed，5 minutes.

Centrifugal time;Plasma prothrombin time;Activated partial thromboplasting time;Thrombin time;Fibrinogen concentration

R446.111

A

1672-6170(2012)05-0092-02

2012-02-17;

2012-07-18)