血清與血漿定量檢測丙型肝炎病毒的對(duì)照研究

杜瓊，胡萍，曾家偉，龍姍姍，馬文婭

(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都610072)

血清與血漿定量檢測丙型肝炎病毒的對(duì)照研究

杜瓊，胡萍，曾家偉，龍姍姍，馬文婭

(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都610072)

目的探討采用血清和血漿兩種標(biāo)本同時(shí)檢測丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染者HCV病毒含量的差異性。方法同時(shí)收集256例HCV感染者血清和血漿標(biāo)本，采用PCR-熒光探針法(RT-PCR)進(jìn)行HCV-RNA的定量檢測。結(jié)果血清HCV-RNA檢出率為69.92%(179/256)，血漿的檢出率為85.16%(218/256)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.25，P＜0.05)。同時(shí)對(duì)兩種標(biāo)本檢測大于103IU/ml的定量結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.032)。結(jié)論采用血漿標(biāo)本測定HCV-RNA檢出率明顯高于血清標(biāo)本，并且分離標(biāo)本快速，避免溶血和RNaes的影響，值得推廣應(yīng)用。

血清;血漿;丙型肝炎病毒核糖核酸;丙型肝炎病毒;PCR-熒光探針法

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是一種全球性傳染、給人類健康帶來極大威脅的病原體，全世界HCV感染率約為3%，即全世界有1.7～2.0億人曾感染過HCV［1］。近年來經(jīng)吸毒和性傳播HCV的危險(xiǎn)性在不斷增加，其導(dǎo)致的公共衛(wèi)生問題直接影響著一般人群的健康［2］。因此，國內(nèi)外許多學(xué)者都在該人群中開展HCV感染檢測方面的研究。目前HCV-RNA被認(rèn)為是診斷HCV病毒血癥的金標(biāo)準(zhǔn)［3］，熒光PCR檢測HCV-RNA可以直接反映體內(nèi)HCV的復(fù)制程度，可用于對(duì)丙型肝炎的診斷和抗病毒藥物治療中的療效觀察指標(biāo)，但其檢測標(biāo)本是血清、血漿尚未明確，兩者的比較未見報(bào)道。本文就HCV感染者血清標(biāo)本和血漿標(biāo)本檢測HCV-RNA含量進(jìn)行了初步探討。

1 材料與方法

1.1 材料標(biāo)本來自2010年2月至2011年6月四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院門診及住院的HCV感染者256例，所有標(biāo)本均經(jīng)過丙肝抗原或丙肝抗體檢測陽性篩查，醫(yī)生建議進(jìn)一步檢測HCVRNA含量。同時(shí)采集其靜脈凝集血2 ml和EDTA抗凝血2 ml分離血清、血漿備用。

1.2 檢測方法PCR-熒光探針法(RT-PCR)測定HCV-RNA含量，具體操作步驟及定量結(jié)果判斷均嚴(yán)格按照SOP文件進(jìn)行。該方法的線性范圍:103～107IU/ml。質(zhì)量控制:設(shè)置陰性對(duì)照、試劑空白對(duì)照、室內(nèi)質(zhì)控的臨界陽性、中、高值。HCV核酸定量檢測(PCR-熒光探針法)試劑由上海科華生物工程股份有限公司提供;儀器為美國ABI 7500實(shí)時(shí)熒光PCR分析儀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0軟件包進(jìn)行處理。采用t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

血清HCV-RNA檢出率為69.92%(179/256)，血漿為85.16%(218/256)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.25，P＜0.05)，見表1。同時(shí)對(duì)兩種標(biāo)本檢測大于103IU/ml的定量結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.032)。血清小于檢測下限的4例標(biāo)本中，分析發(fā)現(xiàn)其中的有2例血清標(biāo)本發(fā)生了中度溶血。

表1 血漿、血清HCV-RNA檢出率比較

3 討論

丙型肝炎是由HCV感染引起的一種隱匿性、傳染性、持續(xù)性疾病，不及時(shí)治療，肝炎會(huì)轉(zhuǎn)為慢性而最終導(dǎo)致肝硬化乃至演變?yōu)楦渭?xì)胞癌，而目前HCV還沒有疫苗可預(yù)防，早期診斷和治療非常重要，HCV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷是丙型肝炎診斷的重要依據(jù)和手段［4］，HCV-RNA檢測對(duì)丙肝的早期診斷具有重要意義，并且可以直接反映體內(nèi)HCV復(fù)制程度，同時(shí)是對(duì)丙型肝炎抗病毒藥物治療中的療效觀察的重要指標(biāo)。

近年來熒光定量PCR技術(shù)被廣泛應(yīng)用于臨床病原體的檢測，它不僅靈敏度高、特異性好，并且，由于試劑防污染系統(tǒng)的使用，避免了擴(kuò)增產(chǎn)物的污染和環(huán)境污染，控制了假陽性結(jié)果。許多文獻(xiàn)報(bào)道檢測HCV-RNA常選用血清標(biāo)本，有關(guān)用血漿HCVRNA檢測的報(bào)道并不多見。兩者的比較未見報(bào)道，本研究用血漿、血清標(biāo)本檢測HCV-RNA，并將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果表明HCV-RNA檢測用血漿標(biāo)本優(yōu)于血清標(biāo)本，具有標(biāo)本分離快捷、檢測率高的特點(diǎn)。

在血清小于檢測下限的4例標(biāo)本中，有2例血清標(biāo)本發(fā)生了中度溶血，可能是由于:①溶血導(dǎo)致RNA酶釋放而降解RNA使其結(jié)果無擴(kuò)增;②標(biāo)本溶血，血紅素抑制反應(yīng)體系中Taq酶的活性，導(dǎo)致假陰性結(jié)果［6］。另外2例血漿標(biāo)本含量處于檢測臨界值，而血清標(biāo)本的含量小于檢測下限，這可能是由于血液在凝固的過程中，將HCV病毒包裹，使其僅有的HCV病毒在血清中減少，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

血漿標(biāo)本分離迅速、快捷，不易溶血。血漿和血清成分的最大區(qū)別是血漿含有纖維蛋白原，從HCV-RNA的提取過程來看，血漿中雖然存在纖維蛋白原，但在提取后已經(jīng)棄去纖維蛋白原，因此不會(huì)影響檢測結(jié)果。因而血漿標(biāo)本代替血清標(biāo)本檢測HCV-RNA是可行的。

綜述所述，采用血漿標(biāo)本測定HCV-RNA靈敏度高于血清標(biāo)本，同時(shí)具有分離標(biāo)本迅速的特點(diǎn)，值得推廣應(yīng)用。

［1］Zeuzem S，Hultcrantz R，Bourliere M，et al.Pegin terferonalfa-2b plusribavirin for treatment of chronic hepatitis Cin previously untreated patients in fectedwith HCV enotypes 2 or 3［J］.J Hepatol，2004，40(6):993-999.

［2］駱俊，夏嫻，喻榮彬.靜脈注射吸毒人群丙型肝炎病毒感染研究進(jìn)展［J］.世界華人消化雜志，2007，15(28):2966-2971.

［3］楊東亮.丙型肝炎的病毒學(xué)檢測指標(biāo)及其臨床意義［J］.中華肝臟病雜志，2004，12(2):104.

［4］魏來，吳曉東.丙型肝炎病毒檢測方法的研究進(jìn)展及其臨床意義［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，13(7):884-886.

［5］Castelain S，Descamps V，Thibault V，et al.TaqMan amplification system with an internal positive control for HCV-RNA quantitation［J］.J Clin Virol，2004，31:227-234.

Comparison the quantification results of HCV-RNA between serum and plasma samples

DU Qiong，F(xiàn)U Ping，ZENG Jia-wei，LONG Shan-shan，MA Wen-ya(Department of Laboratory，Sichuan Academy of Medical Sciences＆Sichuan Provincial People's Hospital，Chengdu 610072，China)

ObjectiveTo analyze the differences of the quantification results of HCV-RNA in serum and plasma samples from the same patients with chronic hepatitis C.MethodsA total of 256 serum and plasma samples were collected and analyzed of HCVRNA by real-time quantitative PCR.ResultsThe positive rate of HCV-RNA detected in plasma was 85.16%，which was significantly higher than that(69.92%)in serum samples with P＜0.05.There was statistical significance between the two methods when HCVRNA quantification results were over 1×103IU/ml(P=0.032).ConclusionsHCV-RNA quantification detection in plasma is more sensitive than serum.It is worth of further application with the advantage of fast sample separation，avoiding the influence of haemolysis and RNaes.

Serum;Plasma;Hepatitis C virus-RNA;Hepatitis C virus;Reverse transcription-polymerase chain reaction

R373.2;R331.1;R457.15

A

1672-6170(2012)05-0088-02

2012-04-28;

2012-07-13)