高效液相色譜法測(cè)定龍膽瀉肝湯顆粒中龍膽苦苷含量

許 仲 ，葉勝體 ，張 妥

(1.廣東省陽江市藥品檢驗(yàn)所，廣東 陽江 529500; 2.廣東省陽江市中醫(yī)醫(yī)院，廣東 陽江 529500)

龍膽瀉肝湯顆粒是廣東省陽江市中醫(yī)醫(yī)院自擬處方制成的中成藥制劑，具有清熱解毒、瀉肝經(jīng)實(shí)火、清利肝膽濕熱的功效，主治頭暈止赤、肋痛口苦、尿赤澀痛、濕熱帶下等諸癥。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為陽江市中醫(yī)醫(yī)院自擬，但其中沒有含量測(cè)定項(xiàng)。為確保藥品質(zhì)量，保證用藥有效，筆者為其增加了龍膽苦苷的含量測(cè)定項(xiàng)，該方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);AB135-S型電子分析天平(德國梅特勒公司)。龍膽苦苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110770-200510);龍膽瀉肝湯顆粒(廣東省陽江市中醫(yī)醫(yī)院，批號(hào)分別為 20090608，20090721，20090824);甲醇(分析純、色譜純)，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱為Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相為甲醇-水(21∶79);流速為1.0 mL/min;柱溫為40℃，檢測(cè)波為270 nm;進(jìn)樣量為10μL。理論板數(shù)按龍膽苦苷峰計(jì)算大于3 500，分離度為2.01。

2.2 溶液制備

取龍膽苦苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含40μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取本品，研細(xì)，精密稱定約15 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)20 min，冷卻，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取不含龍膽苦苷的陰性樣品適量，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果見圖1，表明龍膽瀉肝湯顆粒中其他成分對(duì)龍膽苦苷的測(cè)定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密稱定龍膽苦苷對(duì)照品10.12 mg，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻;再精密量取上述溶液配制成20.42，32.67，40.84，49.01，61.26 μg/mL 的溶液。分別取上述溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，以龍膽苦苷進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=12.548X+25.109，r=0.996 9(n=5)。結(jié)果表明，龍膽苦苷進(jìn)樣量在20.42～61.26μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液10μL(質(zhì)量濃度為40.1μg/mL)，分別進(jìn)樣5次。結(jié)果龍膽苦苷峰面積平均值為525.6，RSD為0.7%(n=5)，表明該方法精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取本品內(nèi)容物(批號(hào)為20090608)各5份，分別精密稱定，依溶液制備方法制成5份供試品溶液，進(jìn)樣10μL測(cè)定。龍膽苦苷平均含量為41μg/mL，RSD為1.2%(n=5)，表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，于開機(jī) 2 h后的 0，2，4，6，8 h分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.9%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn):取同一批已知含量的樣品(批號(hào)為20090608，含龍膽苦苷6.82 mg/100 g)，分別加入一定量的龍膽苦苷對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂的色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法和色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為20090608，20090721，20090824的每100 g樣品含龍膽苦苷分別為 6.82，6.86，6.22 mg，平均為 6.63 mg。故擬訂龍膽瀉肝湯顆粒含龍膽以龍膽苦苷計(jì)，每100 g不得少于6.63 mg。

表1 龍膽苦苷加樣回收試驗(yàn)

3 討論

用不同比例的甲醇-水作流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，以甲醇-水(21∶79)為流動(dòng)相時(shí)龍膽苦苷的峰形好，保留時(shí)間適中，柱效高，與其他干擾峰能很好地分離?？偟膩碚f，該方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:17.