復(fù)方甘草酸單銨注射液家兔體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究

邵益丹，莊讓笑，席建軍，方紅英，王福根

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第六醫(yī)院，浙江 杭州 310014)

甘草酸是甘草的有效成分，甘草酸單銨屬甘草有效成分的第2代提取物，具有較強(qiáng)的抗炎、保護(hù)肝細(xì)胞膜以及改善肝功能的作用[1]。復(fù)方甘草酸單銨注射液是我院的特色制劑，臨床上用于治療病毒性肝炎和各種肝臟損傷。筆者建立測定家兔體內(nèi)甘草酸單銨血藥濃度的反相高效液相色譜法，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算分析，得到其在家兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)[1]，為復(fù)方甘草酸單銨注射液的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥、動(dòng)物

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);高速低溫冷凍離心機(jī)(上海市離心機(jī)械研究所);XW-80A型漩渦混合器(上海醫(yī)大儀器廠)。甘草酸單銨標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110731-201013);甘草酸單銨(西安富捷藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20091105);甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。新西蘭大耳白家兔，體重為2.0～3.0 kg，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱:Eclipse XDB-C18柱(150mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:0.01 mol/L磷酸-乙腈(60∶40);柱溫:30℃;流速:1.0 mL/min;檢測波長:252 nm。在此條件下，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液配制

精密稱取甘草酸單銨0.5 g，置250 mL輸液瓶中，加水60 mL溶解，根據(jù)復(fù)方甘草酸單銨注射液處方配制，調(diào)節(jié)pH至7.0，加水至100 mL，即得甘草酸單銨溶液。

2.3 血漿樣品處理[2]

精密吸取0.1 mL家兔血漿，置1.5 mL尖底離心管，加入0.4 mL甲醇，漩渦振蕩1 min，混合均勻，10 000 r/min離心15 min，取上清液，用氮?dú)獯蹈桑恿鲃?dòng)相0.1 mL溶解，取20μL進(jìn)樣。

2.4 方法學(xué)考察

血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:精密稱取甘草單酸銨標(biāo)準(zhǔn)品100 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并定容至刻度，即得標(biāo)準(zhǔn)品貯備液(質(zhì)量濃度為1 000 mg/L)，將貯備液依次稀釋成1 000，500，400，200，100，50，25，10，5 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.1 mL，加入到0.1 mL血漿中，漩渦振蕩1 min，混合均勻，按2.3項(xiàng)下自“加入0.4 mL甲醇”起處理后，以甘草酸單銨質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=12.448 X-30.069，r2=0.999 6(n=9)。結(jié)果表明，甘草酸單銨質(zhì)量濃度在5～1 000 mg/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

回收率試驗(yàn):取空白血漿0.1 mL，分別加入1 000，100，5 mg/L甘草酸單銨標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mL，每個(gè)濃度平行5份，按2.3項(xiàng)下自“加入0.4 mL甲醇”起處理后，測定峰面積，將血樣峰面積代入回歸方程計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

精密度試驗(yàn):取空白血清0.1 mL，加入質(zhì)量濃度為1 000，100，5 mg/L甘草酸單銨標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mL，每個(gè)濃度平行3份，依法處理后放4℃冰箱內(nèi)保存。日內(nèi)重復(fù)測定5次，連續(xù)測定5 d，計(jì)算日內(nèi)精密度及日間精密度。結(jié)果日內(nèi) RSD分別為0.93%，2.15%和3.66%;日間 RSD分別為1.33%，3.90%和5.11%。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取質(zhì)量濃度為1 000，100，5 mg/L甘草酸單銨標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1 mL，加入到0.1 mL空白血漿中，按2.3項(xiàng)下自“加入0.4 mL甲醇”起處理后，分別于1，2，5，10 d進(jìn)樣測定。結(jié)果峰面積的 RSD分別為1.26%，2.49%，2.91%，2.56%。

2.5 血藥濃度與藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)測定

取復(fù)方甘草酸單銨注射液，按50 mg/kg劑量于家兔耳緣處靜脈注射，分別于 0.5，1，2，3，4，8，10，12，18，24 h 時(shí)取靜脈血，30 min內(nèi)分離血漿，按2.3項(xiàng)下自“精密吸取0.1 mL血漿”起處理，將得到的峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度，數(shù)據(jù)用DAS藥動(dòng)學(xué)程序處理，求得藥動(dòng)力學(xué)參數(shù)[3]。

靜脈注射后甘草酸單銨在體內(nèi)最大血藥濃度(Cmax)為(470.3±85.9)mg/L、達(dá)峰時(shí)間(Tmax)為(30.1±16.2)min，0～∞藥時(shí)曲線下面積(AUC0～∞)為(95 752.4±5 781.5)mg/(L·min)，0～ t藥時(shí)曲線下面積(AUC0～t)為(83861.1 ±4 518.9)mg/(L·min)，清除率(CLz)為(0.000 8±0.000 2)L/(min·kg)，表觀分布容積(Vz)為(0.19±0.03)L/kg，半衰期(t1/2z)=(145.3±35.3)min。

3 討論

筆者比較了甲醇、乙腈和三氯乙酸沉淀蛋白的效果，結(jié)果甲醇沉淀蛋白后，甘草酸單銨峰形以及保留時(shí)間比較理想。本試驗(yàn)建立的反相高效液相色譜法測定甘草酸單銨的血藥濃度，樣品處理簡單，專屬性高，線性范圍包括了所有體內(nèi)血藥濃度實(shí)測數(shù)據(jù)點(diǎn)，高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度水平的回收率均大于90%，日內(nèi)及日間變異均小于10%，達(dá)到了生物樣品測定的要求[4]。

[1]李松龍.甘草酸二銨胃內(nèi)滯留漂浮型緩釋片兔體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28(13):1 079-1 082.

[2]孫 黎，曹惠明，沈金芳，等.靜滴異甘草酸鎂注射液的人體藥代動(dòng)力學(xué)研究[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2005，21(11):1 348-1 351.

[3]孫曼春，方世平，王智勇，等.鹽酸左氧氟沙星在健康人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究[J].中國藥業(yè)，2010，19(3):5-6.

[4]付志玲，劉春芝，房敏峰，等.雙丹方中丹皮對(duì)丹參藥代動(dòng)力學(xué)的影響[J]. 中成藥，2010，20(1):127-130.