冷凍聯(lián)合125I粒子植入治療對(duì)Ⅳ期胰腺癌患者組織CEACAM6表達(dá)的影響

曾健瀅 周序瓏 姚飛 劉衛(wèi)群 陳繼冰 李家亮 牛立志 左建生 徐克成

冷凍聯(lián)合125I粒子植入治療對(duì)Ⅳ期胰腺癌患者組織CEACAM6表達(dá)的影響

曾健瀅 周序瓏 姚飛 劉衛(wèi)群 陳繼冰 李家亮 牛立志 左建生 徐克成

冷凍消融作為近年興起的腫瘤消融治療的手段之一，目前已應(yīng)用于治療不能手術(shù)切除的胰腺腫瘤[1-4]。近年有報(bào)道指出，經(jīng)皮冷凍聯(lián)合125I粒子植入治療是一種可降低腫瘤負(fù)荷、消除殘存腫瘤組織、有效延長(zhǎng)患者生存期的微創(chuàng)聯(lián)合治療方法[5-6]。癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞附著分子6(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6，CEACAM6)屬于CEA家族中一種具有癌基因功能的黏附分子蛋白，在胰腺癌發(fā)生的早期即表達(dá)，被認(rèn)為是一種新的胰腺癌標(biāo)記物。Duxbury等[7]報(bào)道，92%的胰腺癌組織表達(dá)CEACAM6，且其表達(dá)水平與癌分化程度有密切關(guān)系。本研究觀察冷凍聯(lián)合125I粒子植入治療胰腺癌后，癌組織CEACAM6表達(dá)的變化，評(píng)估該聯(lián)合療法的應(yīng)用價(jià)值。

一、材料與方法

1．標(biāo)本來源：收集廣州復(fù)大腫瘤醫(yī)院2010年7月至2011年11月應(yīng)用冷凍聯(lián)合125I粒子植入治療的4例原發(fā)性胰頭癌患者，其中男性3例，女性1例，平均年齡55歲。腫瘤長(zhǎng)徑4.7～6.0 cm。TNM分期皆為Ⅳ期。1例伴肝動(dòng)脈淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，2例伴肝轉(zhuǎn)移，1例伴肝、肺轉(zhuǎn)移。1例因胰腺癌侵犯胃竇部十二指腸降部曾行膽腸吻合術(shù)，1例因十二指腸梗阻曾行膽總管支架植入術(shù)及胃腸吻合術(shù)，1例因皮膚及鞏膜黃染，肝內(nèi)膽總管、胰管擴(kuò)張?jiān)?個(gè)胃腸吻合術(shù)，1例伴胰動(dòng)、靜脈侵犯。冷凍前當(dāng)天及冷凍后7 d，在B超引導(dǎo)下用18G活檢鉗從病灶處不同方向取組織2條，置中性甲醛固定。

2．冷凍消融治療及125I粒子植入：患者取仰臥位，用B超加CT掃描定位后將2～4支1.7 mm冷凍探針于穿刺點(diǎn)插入胰腺頭部腫塊靶區(qū)內(nèi)。在B超確認(rèn)探針到位并未傷及胃腸道后，視腫瘤大小冷凍3～10 min。冷凍溫度為-110～-170℃。冷凍術(shù)后，取PET/CT顯示有活性處為靶區(qū)，在B超引導(dǎo)下用PTC針從穿刺點(diǎn)分別插入胰頭部腫塊的靶區(qū)內(nèi)布粒子，125I粒子間隔0.5～1 cm，記錄總活度及半衰期。

3．腫瘤組織病理學(xué)檢查及CEACAM6蛋白檢測(cè)：胰腺組織常規(guī)行病理學(xué)檢查。采用ChemMate EnVision HRP試劑盒檢測(cè)樣本的CEACAM6蛋白，嚴(yán)格按說明書操作。用已知陽性片作陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。對(duì)全片染色強(qiáng)度較低的病例隨機(jī)選取5個(gè)視野，對(duì)全片染色強(qiáng)度較高病例則隨機(jī)選取1個(gè)視野，每個(gè)40倍視野至少有200個(gè)可用于評(píng)價(jià)的腫瘤細(xì)胞。參考McCarty等[8]標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。

二、結(jié)果

1．組織病理學(xué)改變：冷凍聯(lián)合125I粒子植入治療前腫瘤細(xì)胞大小不等，圓形或卵圓形，核大深染，染色質(zhì)粗，呈乳頭狀排列，有不規(guī)則腺腔結(jié)構(gòu)；治療后腫瘤中心區(qū)凝固性壞死，壞死邊緣區(qū)纖維組織內(nèi)見少量腫瘤細(xì)胞(圖1)。

a:治療前(HE ×400)；b:治療后腫瘤壞死中心(HE ×400)；C:治療后腫瘤壞死邊緣(HE ×200)

圖1冷凍聯(lián)合125I粒子植入治療前后胰腺癌組織病理變化

2．腫瘤組織CEACAM6表達(dá)：CEACAM6陽性表達(dá)主要定位于腫瘤細(xì)胞的胞膜和胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色顆粒狀。冷凍聯(lián)合125I粒子植入治療前胰腺癌細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)；治療后腫瘤壞死中心區(qū)殘余細(xì)胞碎片示非特異性染色，壞死邊緣區(qū)腫瘤細(xì)胞呈弱陽性反應(yīng)。治療前后胰腺癌細(xì)胞CEACAM6表達(dá)評(píng)分分別為(1.12±0.08)和(0.75±0.22)分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P= 0.013，圖2)。

a:治療前(IHC ×400)；b:治療后腫瘤壞死中心(IHC ×400)；c:治療后腫瘤壞死邊緣(IHC ×200)

圖2冷凍聯(lián)合125I粒子植入治療前后胰腺癌組織CEACAM6表達(dá)

討論冷凍消融時(shí)，冷凍探針在靶組織區(qū)形成的冰球只有大于靶病變邊緣至少1 cm時(shí)才能保證靶組織完全處于有效冷凍區(qū)域內(nèi)[9]。對(duì)于中晚期胰腺癌而言，腫瘤較大且邊緣多不規(guī)則，特別是位于胰腺頭部或鉤突部腫瘤，常無完整的“安全邊緣”[10-12]，冷凍形成的冰球難以覆蓋足夠?qū)挼陌踩吘壍哪[瘤。因此，在冷凍后的腫瘤冷凍區(qū)邊緣部位植入放射性粒子，通過其發(fā)出的持續(xù)低能伽馬射線，可起到對(duì)殘余的腫瘤細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞持續(xù)殺滅作用。

CEACAM6是免疫球蛋白超家族甘油磷酸肌醇(GPI)相關(guān)成員，其N端有由108個(gè)氨基酸組成的免疫球蛋白可變區(qū)(IgV)樣結(jié)構(gòu)域和6個(gè)免疫球蛋白恒定區(qū)(IgC)2型樣結(jié)構(gòu)域，通過糖基磷脂酰肌醇連接在細(xì)胞膜上。它與多種惡性實(shí)體腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有著密切的相關(guān)性[13-16]。Kalinina等[17]報(bào)道，大鼠胰腺癌種植瘤CEACAM6的過表達(dá)與胰腺癌細(xì)胞黏附、侵襲、惡性轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞化療敏感性及抗凋亡等生物學(xué)行為密切相關(guān)；下調(diào)種植瘤CEACAM6的表達(dá)可以減少微血管形成、抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。

本研究結(jié)果顯示，治療前癌組織CEACAM6強(qiáng)陽性表達(dá)，治療后冷凍中心區(qū)的胰腺腫瘤細(xì)胞完全壞死，但由于腫瘤過大，邊緣不規(guī)則，邊緣區(qū)殘存少量癌細(xì)胞。這些癌細(xì)胞的CEACAM6表達(dá)呈弱陽性，表明冷凍聯(lián)合125I粒子植入療法可下調(diào)殘存癌細(xì)胞CEACAM6的表達(dá)，提示該療法還可以抑制殘余腫瘤細(xì)胞的增殖與生長(zhǎng)，降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的可能性。

[1] 武清，張家興，錢建新，等．手術(shù)聯(lián)合氬氦靶向冷凍消融在中晚期胰頭癌中的應(yīng)用．中國(guó)腫瘤臨床，2005, 32:1403-1405．

[2] 易峰濤，宋華志，李靜．術(shù)中氫氦刀治療晚期胰腺癌．中華肝膽外科雜志，2006，12：186-187．

[3] Li J，Chen X，Yang H，et al．Tumour cryoablation combined with

palliative bypass surgery in the treatment of unresectable pancreatic cancer：a retrospective study of 142 patients. Postgrad Med J，2011，87：89-95．

[4] Kovach SJ，Hendrickson RJ，Cappadona CR，et al．Cryoablation of unresectable pancreatic cancer. Surgery，2002，131：463-464．

[5] Xu KC，Niu LZ，Hu YZ，et al．Cryosurgery with combination of (125)iodine seed implantation for the treatment of locally advanced pancreatic cancer. J Dig Dis，2008，9：32-40．

[6] Xu KZ，Niu LZ，Hu YZ，et al．A pilot study on combination of cryosurgery and (125)iodine seed implantation for treatment of locally advanced pancreatic cancer．World J Gastroenterol, 2008，14：1603-1611．

[7] Duxbury MS，Matros E，Clancy T，et al．CEACAM6 is a novel biomarker in pancreatic adenocarcinoma and PanIN lesions．Ann Surg，2005，24：491-496．

[8] McCarty KS, Szabo E, Flowers J,et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of humantumors. Cancer Res, 1986,46:4244-4248.

[9] 徐克成，牛立志.腫瘤冷凍治療學(xué).上海：上?？萍冀逃霭嫔纾?007:82-86．

[10] Popken F,Serfert JK,Dutkowski P,et al.Comparison of ice ball diameter and temperature distribution achieved with 3mm accuprobe cryoprobes in porcine and human liver tissue and human colorectal liver metastases in vitro.Cryobiology,2000,40:302-310．

[11] Mala T，Samset E，Aurdal L，et al．Magnetic resonance imaging estimated three dimensional temperature distribution in liver cryolesion．a(chǎn) study of cryolesion characteristics assumed necessary for tumor ablation．Cryobiology, 2001，43：268-275．

[12] Seifert JK，Gerharz CD，Mattes F，et al．A Pig model of hepatic cryotherapy. In vivo temperature distribution during freezing and histopathological changes. Cryobiology，2003，47：214- 226．

[13] Poola I,Shokrani B,Bhatnagar R,et al.Expression of carcinoembryonic antigen cell adhesion molecule 6 oncoprotein in atypical ductal gyperplastic tissues is associated with the development of invasive breast cancer.Clin Cancer Res,2006,12:4773-4783.

[14] Jantscheff P，Terracciano L，Lowy A, et al．Expression of CEACAM6 in resetable colorectal cancer: a factor of independent prognostic significance. J Clin Oncol，2003，21： 3638-3646．

[15] Leta K, Tanaka F，Utsunomiya T，et al．CEACAM6 gene expression in intraehepatic eholangiocarcinoma．Br J Cancer， 2006，95：532-540．

[16] Blumenthal RD，Hansen HJ，Goldenberg DM．Inhibition of adhesion, invasion, and metastasis by antibodies targeting CEACAM6 (NGA-90) and CEACAM5 (Carcinoembryonic Antigen)．Cancer Res，2005，65：8809-8817．

[17] Kalinina T，Güng?r C，Thieltges S，et al．Establishment and characterization of a new human pancreatic adenocarcinoma cell line with high metastatic potential to the lung. BMC Cancer,2010，10：295．

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2012.06.016

海珠區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2010-Y-27)

510305 廣州，中國(guó)科學(xué)院廣州生物院附屬?gòu)?fù)大醫(yī)院，廣州復(fù)大腫瘤醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室

牛立志，Email:fudaclab@gmail.com

2012-03-16)

(本文編輯：呂芳萍)