寬體金線蛭室內(nèi)產(chǎn)繭、孵化及仔蛭饑餓研究△

李軍，于翔*，宋文華，龔元，張健，張濤

(1.遼寧省淡水水產(chǎn)科學研究院，遼寧 遼陽 111000；2.遼寧省水生動物病害防治重點實驗室，遼寧 遼陽 111000；3.荊州市民康生物科技有限公司，湖北 荊州 434300)

中藥農(nóng)業(yè)

遼寧省海洋與漁業(yè)廳“吸血水蛭工廠化高密度養(yǎng)殖技術研究”項目(200903)

*

于翔，E-mail：yulnly@126.com

寬體金線蛭室內(nèi)產(chǎn)繭、孵化及仔蛭饑餓研究△

李軍1,2，于翔1,2*，宋文華1,2，龔元3，張健1,2，張濤1,2

(1.遼寧省淡水水產(chǎn)科學研究院，遼寧 遼陽 111000；2.遼寧省水生動物病害防治重點實驗室，遼寧 遼陽 111000；3.荊州市民康生物科技有限公司，湖北 荊州 434300)

目的建立寬體金線蛭室內(nèi)網(wǎng)箱濕土養(yǎng)殖新模式，為中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范及規(guī)模化繁養(yǎng)殖提供參考依據(jù)。方法以野外采捕的具有生殖環(huán)帶的寬體金線蛭為試驗材料，在室內(nèi)采用網(wǎng)箱濕土法養(yǎng)殖，進行寬體金線蛭產(chǎn)繭、卵繭孵化及仔蛭饑餓試驗研究。結果親蛭采用網(wǎng)箱濕土法養(yǎng)殖17 d，其平均成活率為90%；產(chǎn)繭前具有生殖環(huán)帶(土黃色)，產(chǎn)繭后生殖環(huán)帶消失；親蛭產(chǎn)卵繭后平均體重下降率達(29.94±0.01)%；產(chǎn)卵繭期間共收獲卵繭79枚，平均產(chǎn)繭量為1.8枚/條，卵繭平均重量為(0.50±0.21)g/枚，平均長徑和短徑分別為(1.75±0.31)cm/枚和(1.10±0.18)cm/枚；卵繭在室溫下(14～33 ℃)孵育34 d，共孵出仔蛭865條，每枚卵繭孵出(11.4±2.0)條仔蛭，卵繭孵化率達92.57%。初孵仔蛭平均個體體重為(0.020 5±0.008 4)g。饑餓試驗表明，在140 d時，對照組存活11條水蛭，成活率僅22%，其平均個體體重為(0.108 4±0.087 7)g，仔蛭個體體重有隨日齡的增加而增加趨勢；饑餓組仔蛭在140 d時全部死亡。結論在適宜的條件下，采用網(wǎng)箱濕土養(yǎng)殖法，寬體金線蛭可在室內(nèi)產(chǎn)繭，卵繭集中孵育及親蛭和仔蛭分開飼養(yǎng)。

寬體金線蛭；卵繭；初孵仔蛭；饑餓

寬體金線蛭(WhitmaniapigraWhitman 1884)，別名為馬蛭、寬身金線蛭和寬身螞蟥，隸屬環(huán)節(jié)動物門(ANNELIDA)、蛭綱(Hirudinea)、真蛭亞綱(Euhirudinea Lukin,1956)、無吻蛭目(Arhynchobdellida Blanchard,1894)、醫(yī)蛭形亞目(Hirudiniformes Caballero,1952)、黃蛭科(Haemopidae Sawyer,1986)、金線蛭屬(WhitmaniaBlanchard,1888)，在我國廣泛分布[1]。寬體金線蛭干燥全體為傳統(tǒng)中藥材水蛭，其性味咸、苦，平；有小毒。歸肝經(jīng)。具破血通經(jīng)，逐瘀消癥功能，用于血瘀經(jīng)閉，癥瘕痞塊，中風偏癱，跌撲損傷[2]。近年來，由于寬體金線蛭的臨床需求的增加，同時由于天然水域的環(huán)境污染，其棲息地不斷減小，導致其種群數(shù)量減少，野生資源破壞嚴重，所以進行寬體金線蛭的人工繁養(yǎng)殖，不僅能夠滿足臨床和科研的需要，同時也能有效地保護生態(tài)環(huán)境。目前寬體金線蛭主要繁養(yǎng)殖方式是池塘養(yǎng)殖[3-4]，與池塘養(yǎng)殖不同，本研究采用室內(nèi)網(wǎng)箱濕土法，成蛭于網(wǎng)箱濕土內(nèi)產(chǎn)繭，卵繭采用濕紗布孵育，仔蛭在水中養(yǎng)殖，探討其繁殖，卵繭孵化及初孵仔蛭生長性能，旨在豐富寬體金線蛭繁殖生物學等基礎理論知識，以期實現(xiàn)中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范及規(guī)?；别B(yǎng)殖提供參考依據(jù)。

1 材料

寬體金線蛭采自遼寧省淡水水產(chǎn)良種場，由遼寧省淡水水產(chǎn)科學研究院于翔教授級高級工程師鑒定。

2 方法

2.1 寬體金線蛭的繁殖及養(yǎng)殖管理

選擇形態(tài)、體色正常，健康，具有生殖環(huán)帶的寬體金線蛭50條，實驗開始前，測量寬體金線蛭個體體重(精確到0.01 g)，稱重前用潤濕的紗布除去親蛭體表附著的臟物和水分。將50條寬體金線蛭分成2組，每組25條，于本院生態(tài)室內(nèi)采用網(wǎng)箱濕土法養(yǎng)殖(網(wǎng)箱：35.0 cm×14.5 cm×11.5 cm，土層厚度：約6.0 cm)[5]，每日觀察親蛭情況，每4～5 d 進行一次翻土取卵繭，記錄日期及卵繭的數(shù)量，同時測量卵繭重量(精確到0.000 1 g)，稱重前用潤濕的紗布除去卵繭表面附著的臟物；卵繭的長徑與短徑采用顯微攝影輔助記錄，測量數(shù)據(jù)通過所拍攝的照片及同期拍攝的標尺用Winmeasure軟件測量。試驗結束后，測量親蛭的個體體重，統(tǒng)計存活條數(shù)、卵繭數(shù)及卵繭的大小、重量，計算體重下降率、成活率和產(chǎn)繭量。

寬體金線蛭繁殖期間，試驗期間室內(nèi)保持安靜，生態(tài)室內(nèi)溫度(28±1)℃，土壤溫度(25±1)℃，每天中午開窗換氣約1 h，每天早晚檢查網(wǎng)箱內(nèi)親蛭情況，適量淋水，土壤濕度不低于20%，及時挑出病、死蛭；試驗用水為曝氣3 d的自來水。

2.2 寬體金線蛭卵繭的孵化

寬體金線蛭卵繭于室內(nèi)在自然溫度下孵化，在網(wǎng)箱(35.0 cm×14.5 cm×11.5 cm)內(nèi)置適當大小的木板，將卵繭放木板上，卵繭間距約為2.0 cm，于卵繭上平鋪一層潤濕的醫(yī)用級紗布，將網(wǎng)箱放入塑料箱內(nèi)(38.0 cm×17.5 cm×14.5 cm)，箱內(nèi)注水約1 cm，將紗布一端放入水中，使卵繭和紗布保持一定的濕度，孵化期間每日檢查卵繭的發(fā)育情況，及時將孵出仔蛭取出，撿出已孵出水蛭的空繭及死繭，仔蛭放入另一網(wǎng)箱中集中飼養(yǎng)，換充分曝氣的等溫水1次，換水量為總水量的1/3。

試驗結束統(tǒng)計孵出仔蛭的卵繭數(shù)量，計算孵化率；以剛從卵繭中爬出的寬體金線蛭為初孵仔蛭，統(tǒng)計其數(shù)量，并測量個體體重(精確到0.000 1 g)。

2.3 初孵寬體金線蛭饑餓試驗

挑取健康的初孵水蛭100條，分成兩組，每組50條，放入網(wǎng)箱(35.0 cm×14.5 cm×11.5 cm)內(nèi)，再將網(wǎng)箱放入注水約3 cm的塑料箱內(nèi)(38.0 cm×17.5 cm×14.5 cm)，其中一組投餌(飼喂螺)，另一組不投餌，分別記為對照組和饑餓組，每隔7 d于上午10：00測量水蛭的個體體重，稱重前用潤濕的紗布除去水蛭體表附著的水分(精確到0.000 1 g)。試驗期間檢查小水蛭狀態(tài)，記錄死亡的數(shù)量。每天換充分曝氣的等溫水，換水量為總水量的1/3。試驗結束后，統(tǒng)計成活尾數(shù)，計算成活率。

2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

S：成活率(%)，S1：試驗前寬體金線蛭條數(shù)(條)，S2：試驗結束后存活寬體金線蛭條數(shù)(條)；W：體重下降率(%)，W1：試驗前寬體金線蛭的體重(g)，W2：試驗結束后寬體金線蛭的體重(g)；C：產(chǎn)繭量(枚/條)，Cn：卵繭的枚數(shù)(枚)；H：孵化率(%)；Cf：孵出水蛭的卵繭枚數(shù)(枚)。

3 結果

3.1 寬體金線蛭成活率和產(chǎn)繭前后形態(tài)特征

試驗期間，產(chǎn)繭期長達14 d(2011年6月3日至2011年6月16日)，產(chǎn)繭結束后，統(tǒng)計寬體金線蛭存活數(shù)量，1號箱和2號箱分別存活21條和24條，成活率分別為84%和96%，其平均成活率為90%。

產(chǎn)繭前后，其生殖環(huán)帶變化顯著；產(chǎn)繭前，生殖環(huán)帶為淺土黃色，外觀明顯；產(chǎn)卵繭后生殖環(huán)帶消失(見圖1A和圖1B)，其他形態(tài)和狀態(tài)正常，未見明顯變化。

A.產(chǎn)繭前具有生殖環(huán)帶的寬體金線蛭(箭頭所示) B.產(chǎn)繭后生殖環(huán)帶消失的寬體金線蛭圖1 寬體金線蛭產(chǎn)繭前后生殖環(huán)帶變化

3.2 寬體金線蛭產(chǎn)卵繭前后體重變化

由表1可知，產(chǎn)卵繭前寬體金線蛭平均個體體重為(3.86±0.21)g，其中最大個體體重為6.82 g，最小個體體重為2.42 g；產(chǎn)卵繭后寬體金線蛭個體體重明顯減小，其平均個體體重僅為(2.69±0.71)g，減重達1.17 g，平均體重下降率高達(29.94±0.01)%。由以上結果可知，與寬體金線蛭產(chǎn)卵繭前體重相比，在產(chǎn)卵繭后，其個體體重明顯減小。

表1 寬體金線蛭產(chǎn)卵繭前后體重的變化

3.3 寬體金線蛭產(chǎn)卵繭、產(chǎn)繭量及不同時間收集卵繭重量、大小變化

3.3.1 寬體金線蛭產(chǎn)卵繭和產(chǎn)繭量 產(chǎn)繭期間，寬體金線蛭主要在網(wǎng)箱中土壤的中下層活動。多數(shù)卵繭產(chǎn)在土壤中下層的縫隙中，剛產(chǎn)出的受精卵外被稀薄的白色泡沫狀物質(zhì)(圖2)，數(shù)小時后，卵繭壁逐漸硬化，壁外的許多泡沫風干，破裂，只剩下一些連接成五角或六角的短柱所組成的土黃色蜂窩狀或海綿狀保護層(圖3)。

圖2 網(wǎng)箱中剛產(chǎn)出的寬體金線蛭卵繭(箭頭所示)

產(chǎn)繭期間，每4～5 d進行一次翻土取卵繭，共進行4次翻土取卵繭，收獲卵繭79枚(表2)，其中1號箱和2號箱分別產(chǎn)卵繭43枚和36枚，平均產(chǎn)繭量為1.8枚/條。試驗期間，寬體金線蛭的產(chǎn)卵繭期較集中，產(chǎn)繭期的前5 d(2011年6月3日至2011年6月7日)，產(chǎn)卵繭數(shù)量多，共73枚，占總卵繭數(shù)量的92.41%，此后，其產(chǎn)卵繭數(shù)量減少。

表2 寬體金線蛭產(chǎn)卵繭數(shù)量

3.3.2 不同時間收集寬體金線蛭卵繭重量變化 試驗期間收集卵繭平均重量為(0.50±0.21)g/枚，其平均長徑和短徑分別為(1.75±0.31)cm/枚和(1.10±0.18)cm/枚；其中卵繭重量最大為1.194 g/枚，最小為0.135 3 g/枚；第1次收集卵繭平均重量為(0.60g±0.00)g/枚，明顯大于第2次(0.40±0.07)g/枚和第3次(0.34±0.15)g/枚收集的卵繭重量，同時由圖4也可得出，其卵繭平均重量隨產(chǎn)繭時間的延長有明顯減小的趨勢(圖4)。

圖4 不同時間收集寬體金線蛭繭重量的變化

3.4 寬體金線蛭繭孵化率及初孵仔蛭

3.4.1 寬體金線蛭卵繭孵化 寬體金線蛭卵繭在生態(tài)室內(nèi)進行孵化(室溫14～33 ℃)，其孵化期達34 d(2011年6月3日至2011年7月7日)，卵繭的平均孵化率達92.57%(表3)。1號箱孵出水蛭430條，2號箱孵出水蛭435條，共孵出865條仔蛭，平均每枚卵繭孵出(11.4±2.0)條仔蛭，其中2011年6月3日和2011年6月7日產(chǎn)卵繭平均孵出(12.3±0.2)條和(12.1±1.7)條仔蛭，孵化出水蛭條數(shù)比較相近，均高于平均值(11.4±2.0)條/枚。

3.4.2 初孵仔蛭形態(tài)特征 初孵仔蛭大多從卵繭的一端爬出，初孵寬體金線蛭體色深淺并不相同，有的呈深褐色，身上5條縱行的淡黃褐色斑紋，背中線1條較寬(圖5A)，有的淺土黃色，條紋并不明顯(圖5B)，其體色隨其孵出的時間的增加而逐漸加深，呈深褐色，背部形成5條縱行的淡黃褐色斑紋，背中線1條較寬。

表3 寬體金線蛭孵化率統(tǒng)計

試驗期間共測量167條初孵仔蛭體重，其平均個體體重為(0.020 5±0.008 4)g，其中最小體重為0.003 1 g，最大體重為0.051 5 g。

圖5 初孵寬體金線蛭

3.4.2 饑餓試驗 試驗開始時，對照組初孵仔蛭平均個體體重為(0.022 6±0.008 3)g；在42 d時，存活25條水蛭，其平均個體體重(0.062 0±0.036 8)g；在140 d時，存活11條水蛭，成活率僅22%，其平均個體體重為(0.108 4±0.087 7)g，其中最大個體體重為0.302 8 g，最小個體體重為0.019 3 g，試驗期內(nèi)對照組仔蛭個體體重有隨日齡的增加而增加趨勢(圖6)。

饑餓組初孵仔蛭在試驗前平均個體體重為(0.022 1±0.010 6)g，饑餓組仔蛭隨日齡的增加，其死亡仔蛭的數(shù)量也在增加；在42 d時，存活21條水蛭，其平均個體體重(0.018 8±0.012 1)g，存活水蛭數(shù)量和平均個體體重均低于對照組；133 d時，僅存活1條，其個體體重為0.019 7 g，與試驗前初孵仔蛭的平均體重(0.022 1±0.010 6)g相近；140 d時，饑餓組仔蛭全部死亡。饑餓組寬體金線蛭的體重并不隨日齡的增加而增加，而是在一定范圍內(nèi)波動，且其波動值較小(圖6)。

圖6 寬體金線蛭對照組與饑餓組體重

4 討論

4.1 寬體金線蛭繁殖模式

目前，寬體金線蛭的養(yǎng)殖方式大多采用池塘養(yǎng)殖[3-4]，主要是模擬寬體金線蛭在自然界中的生態(tài)環(huán)境，在養(yǎng)殖中存在環(huán)境因子(溫度、濕度和水質(zhì)等)可控性差，種蛭和仔蛭混養(yǎng)，攝食不均衡，生產(chǎn)管理難度大，同時還存在水蛭逃逸及天敵等諸多問題。

自然界中，大部分水蛭蟄伏泥土地中越冬，產(chǎn)繭時要進入田埂上泥土中產(chǎn)繭[1]，這是由于水蛭可通過身體表皮腺細胞分泌粘液結合空氣中氧氣進行呼吸[4,6-7]，這也為新的養(yǎng)殖模式提供了理論依據(jù)，所以近年來以土壤為介質(zhì)進行養(yǎng)殖的方式已有相關報道[5-6]，其中于翔[5]成功采用網(wǎng)箱濕土法進行菲牛蛭成蛭養(yǎng)殖，養(yǎng)殖時間為60 d，個體增重明顯(0.8～1.4倍)，成活率高(80%～92%)。本研究寬體金線蛭產(chǎn)繭期間，采用網(wǎng)箱濕土養(yǎng)殖法，養(yǎng)殖17 d，親蛭在試驗前后形態(tài)、體色正常，健康，平均成活率達90%，成活率較高；親蛭能在網(wǎng)箱濕土中產(chǎn)繭，卵繭經(jīng)孵育，孵化出仔蛭，實現(xiàn)親蛭集中養(yǎng)殖，產(chǎn)繭，定期收繭，集中孵化，種蛭和仔蛭分開飼殖，仔蛭分批、分級飼養(yǎng)和培育，管理難度小，環(huán)境因子可控性強，但是這種養(yǎng)殖模式否可以作為寬體金線蛭長期的繁養(yǎng)殖模式，還有待于進一步深入研究。

4.2 親蛭產(chǎn)繭前后體重變化、產(chǎn)繭量

溫度和體重對寬體金線蛭產(chǎn)繭后體重變化影響不同，史紅專等[8]研究表明隨著溫度的升高(20 ℃～28 ℃)，寬體金線蛭(20 g)產(chǎn)繭后的體重下降率有所增加；在相同溫度下(25 ℃)，體重大小(7.83～35.27 g)對產(chǎn)卵后體重下降率的影響不顯著；而本研究中，產(chǎn)前寬體金線蛭的平均體重為3.86±0.21 g，產(chǎn)繭后體重下降率(29.94±0.01)%均低于20 g寬體金線蛭產(chǎn)繭后體重下降率(36.87%)和7.83 g寬體金線蛭產(chǎn)繭后體重下降率(35.10%)[8]，體重下降率相差較大。在產(chǎn)繭量方面，現(xiàn)有資料記載，成熟個體經(jīng)過交配平均能產(chǎn)4～5 枚卵繭[9]；在試驗條件下(25℃)，體重為35.27 g親蛭的產(chǎn)繭量(2.1枚/條)高于7.83 g親蛭的產(chǎn)繭量(1.3枚/條)[8]；在本研究中寬體金線蛭體產(chǎn)繭量(1.8枚/條)雖低于25 ℃ 20 g寬體金線蛭產(chǎn)繭量(2.1枚/條)，卻高于體重為7.83 g寬體金線蛭的產(chǎn)繭量(1.3枚/條)，這可能與寬體金線蛭生存環(huán)境和生長年齡有關，本研究中寬體金線蛭生存在東北地區(qū)，由于北方地區(qū)冬季長達5個月，其大約4月底或5月出土，產(chǎn)卵期在5月末6月初，而長江流域?qū)掦w金線蛭在大約3月底或4月上旬出土，產(chǎn)卵期在5月份，兩者繁殖期相差近一個月，而生長期相差至少2個月。除溫度這個環(huán)境因子外，其它生存地理環(huán)境與長江流域也相差較大(如水質(zhì))，環(huán)境因子不同有可能造成生態(tài)習性差別，同時試驗條件不同也可能對體重下降率和產(chǎn)繭量具有影響。

在繁殖過程中，應保持安靜的環(huán)境，適合的溫度、濕度和通風，減少人為刺激和環(huán)境刺激對其交配和產(chǎn)繭的影響，試驗中本項目組成員曾觀察到由于人為刺激，正在產(chǎn)繭的水蛭逃逸，產(chǎn)出卵繭無土黃色蜂窩狀或海綿狀保護層，這種卵繭不能孵出水蛭。產(chǎn)繭后，寬體金線蛭體重下降大，說明其體能損耗大，所以在繁殖前后應提供良好的生態(tài)條件，如清新的水質(zhì)、適宜的溫度、適口的餌料，特別要加強種蛭的營養(yǎng)，強化培育。在日常養(yǎng)殖過程中，應設置繁殖種蛭的專用養(yǎng)殖池，注意常年培育和秋季強化相結合，選育一定數(shù)量具有優(yōu)良性狀的種蛭，并定期與外單位及野生的種蛭進行交換原種及良種親蛭，保證遺傳基因在群體內(nèi)的互補作用，防止產(chǎn)生基因瓶頸。

4.3 卵繭形態(tài)、重量、大小及孵化出量

本研究中寬體金線蛭的卵繭呈卵圓形，繭膜分兩層，外部是一層海綿狀保護層，里面是卵繭膜，這與資料中記載的寬體金線蛭產(chǎn)的卵繭形態(tài)一致[1]，卵繭平均重量、大小和孵出量分別為(0.50±0.21)g、(1.75±0.31)×(1.10±0.18) cm/枚和(11.4±2.0)條/枚，均低于自然界中寬體金線蛭的卵繭平均重量(1.68 g)、大小(26.6×18.7 mm)和孵出量(13～35條/枚)[1]。已有試驗表明，卵繭重量大小與孵出量具有一定的關系，史紅專等[8]研究發(fā)現(xiàn)在25 ℃下，卵繭重量(0.1～2.0 g)與孵出量成正比，在卵繭重量為0.1～0.5 g時，孵出量為12.63條/只，這與本研究中的卵繭重量(0.50±0.21)g和平均孵出量(11.4±2.0)條/枚基本一致，說明卵繭重量在同一數(shù)量級時，在適合的孵育條件，仔蛭的孵出量基本相同，但卵繭的多少、重量是否與親蛭大小、年齡、生態(tài)習性和試驗條件有關，還有待于進一步研究。

4.4 初孵寬體金線蛭饑餓試驗

初孵仔蛭的形態(tài)特征與資料記載基本一致[1]。對照組中初孵寬體金線蛭在140 d時，形態(tài)、體色正常，健康活躍，但存活率低，僅為22%，成活率低與餌料螺類的不適口有關，試驗期間發(fā)現(xiàn)，部分仔蛭被投喂的大螺厴夾住現(xiàn)象，造成仔蛭死亡，說明投喂的螺類不適口，同時成活率低還可能與試驗條件有一定的關系。試驗結束時，仔蛭個體體重差異較大，這與其初孵仔蛭的體重相差較大有關，同時餌料不適口也是造成體重差異大的原因。Lai等[10]對同屬的光潤金線蛭(Whitmanialaevis)捕食化學感應能力研究發(fā)現(xiàn)，其對不同種的螺類有一定的偏好，但是對螺類的大小不具有分辨能力，對于寬體金線蛭攝食偏好的螺類還有待于進一步研究，由以上可能得出，在仔蛭的培育中，應根據(jù)其生長情況，按規(guī)格，分級、分批飼養(yǎng)，配備適口的螺類。饑餓組寬體金線蛭體重在一定范圍內(nèi)波動，其主要原因是初孵仔蛭體重具有一定的差異，試驗中發(fā)現(xiàn)體重較小的仔蛭先死亡，而體重較大的仔蛭存活時間較長，從而造成體重波動。饑餓組寬體金線蛭于140 d全部死亡，說明其抗饑餓能力較強，這與成蛭的生態(tài)習性基本一致，在養(yǎng)殖中可以依據(jù)生產(chǎn)中實際情況，考慮這一特性，但同時還要考慮其不可逆點。

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StudyoftheSpawning,HatchingEggsandExperimentalStarvationofLeechofWhitmaniapigraWhitman1884

LI Jun1, YU Xiang1, SONG Weng-hua1, GONG Yuan2, ZHANG Jian1, ZHANG Tao1

(1.FreshwaterFisheriesSciencesInstituteofLiaoningProvince,Liaoyang111000,China;2.LiaoningkeylaboratoryofAquaticAnimalInfectiousDiseasesControlandPrevention,Liaoyang111000,China; 3.JingzhouMinkangBiotechnologyCo.,Ltd,Jingzhou434300,China)

Objective:The purpose of this study is to set up a new method for spawn of sexually mature leeches (WhitmaniapigraWhitman 1884) with clitellum in soil in the net, cocoons hatching and leeches breeding, which will provide useful references for Good Agriculture Practices and artificially propagating large numbers of individuals.MethodsThe spawn of sexually mature leeches (WhitmaniapigraWhitman 1884) with clitellum in soil in the net, cocoons hatching and experimental starvation of newly hatched juvenile were studies in laboratory.ResultsThe laboratory studies showed that leeches revealed reliable clitellum development prior to cocoon production and the clitellum vanished through the cessation of cocoon production. The average survival of leeches were 90% after spawn (17 days)，and the lost weight of leeches was (29.94±0.01)%. The number of cocoons collected was 79 in spawn. The mean number of cocoons produced by every leech was 1.8 and the average weight of the cocoon was (0.50±0.21)g. The long and short diameter of the cocoon was (1.75±0.31)cm and (1.10±0.18)cm, respectively. The incubation was 34 days at the room temperature (14～33 ℃) and 865 newly hatched juvenile were collected. The mean number of newly hatched juvenile of every cocoon was (11.4±2.0) and the hatching rate was 92.57%. The weight of every newly hatched juvenile was (0.020 5±0.008 4)g. The experimental starvation indicated that only 11 leeches of control group survived at 140 dph and the average survival was 22% .The weight of leeches was (0.108 4±0.087 7)g in the control group at 140 dph. The body weight positively correlated to dph in the control group. Starved leeches all died at 140 dph.ConclusionWe set up a new method for spawn of sexually mature leeches (WhitmaniapigraWhitman 1884) with clitellum in soil in the net, cocoons hatching and leeches breeding.

WhitmaniapigraWhitman 1884; Cocoon; Newly hatched juvenile; Starvation

2012-08-03)