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    河北唐山地區(qū)乙肝患者血清標志物七項與乙型肝炎病毒 DNA定量的對比研究

    2014-03-30 06:18:46李世龍田珊紅李小林
    醫(yī)學綜述 2014年20期
    關(guān)鍵詞:乙肝患者拷貝乙肝病毒

    張 寶,李世龍,田珊紅,李小林,張 燕

    (1.唐山市傳染病醫(yī)院檢驗科,河北 唐山 063000; 2.唐山市人民醫(yī)院檢驗科,河北 唐山 063000)

    乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是目前流行最廣泛,嚴重危害人類健康的肝炎病毒之一,是主要的肝臟疾病致病因子[1]?,F(xiàn)全球約3.5億乙型肝炎(乙肝)感染患者,其中很大部分分布于發(fā)展中國家[2]。我國是HBV感染的最主要高流行區(qū),其中HBV慢性感染者約3000萬例[3]。國內(nèi)關(guān)于HBV血清學標志物(HBVm)與HBV DNA定量的對比分析的研究較多,由于乙肝在我國流行呈現(xiàn)地區(qū)差異性,河北省內(nèi)相關(guān)研究不多。目前HBV感染的實驗室診斷可分為免疫學診斷和核酸診斷。隨著核酸技術(shù)的不斷發(fā)展,實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)檢測技術(shù)由于具有快速、高特異性、高敏感性而又價廉的特點已廣泛應(yīng)用于臨床實驗診斷,為HBV的預(yù)防及監(jiān)測疾病的感染提供了直接依據(jù)。目前全國HBVm普遍是五項,俗稱乙肝兩對半,而本研究是七項,這是本研究的優(yōu)點之處。本研究主要分析本地區(qū)人群感染HBV后其血清學標志物(七項)與HBV DNA定量之間的對比分析,最終為本市的醫(yī)療機構(gòu)開展病原學、流行病學和臨床應(yīng)用研究提供可靠依據(jù),以進一步發(fā)掘HBVm的價值和意義。

    1 材料與方法

    1.1材料 選擇2007年7月至2008年1月唐山市傳染病醫(yī)院收治的758例門診及住院的乙肝患者,男509例,年齡2個月至88歲,平均年齡(36.6±13.2歲);女249例,年齡1 d至70歲,平均年齡(32.5±13.5)歲。

    1.2主要儀器與試劑

    1.2.1儀器 酶標儀(邁瑞MR-96A),洗板機(邁瑞MW-12A),核酸擴增熒光定量檢測儀(Real time PCR System美國ABI Prism 7300),高速離心機(珠海黑馬TLG-16R),恒溫加熱器(杭州奧盛K30B)。

    1.2.2試劑 HBVm的雙抗夾心法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測試劑采購于上??迫A生物工程股份有限公司;核酸FQ-PCR檢測試劑購自于中山大學達安基因股份有限公司。

    1.3試驗方法 HBVm七項的檢測采用ELISA法,操作及結(jié)果判讀嚴格按照上??迫A試劑說明書。HBV DNA實時熒光定量檢測采用FQ-PCR,操作及結(jié)果判讀嚴格按照試劑說明書。

    1.4統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析,計數(shù)資料比較采用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié) 果

    2.1ELISA HBVm七項和FQ-PCR HBV DNA定量檢測結(jié)果 針對758例患者的血清HBVm七項共檢出17種模式,陽性判定標準為HBV DNA 定量≥103拷貝/mL。其中有13種模式均呈現(xiàn)HBV DNA定量的陽性率,以HBVm七項(1,3)陽性率最高,為1.63×108拷貝/mL(表1)。

    表1 ELISA HBVm七項和FQ-PCR HBV DNA定量檢測結(jié)果

    1:乙肝病毒表面抗原(HBsAg);2:乙肝病毒表面抗體(HBsAb);3:乙肝病毒e抗原(HBeAg);4:乙肝病毒e抗體(HBeAb);5:乙肝病毒核心抗體(HBcAb);6:乙肝病毒前S2抗原(Pre-S2Ag);7:乙肝病毒前S2抗體(Pre-S2Ab)

    2.2HBeAg與 HBV DNA定量的相關(guān)性分析 758例標本中,依照HBeAg是否陽性將其分為兩組。HBeAg陽性組269例,其中有243例(90.33%)檢出HBV DNA定量≥103拷貝/mL,平均數(shù)為5.13×107拷貝/mL;HBeAg陰性組489例,其中181例(37.01%)標本檢出HBV DNA定量≥103拷貝/mL,平均數(shù)為8.37×107拷貝/mL。HBeAg陰性組檢出率顯著低于HBeAg陽性組(χ2=198.01,P<0.01)。

    3 討 論

    目前國內(nèi)各級醫(yī)療機構(gòu)通過篩查試驗ELISA法來檢測血清標本中HBV的多種HBVm,簡稱兩對半,該方法具有操作簡便易行,可以基本滿足臨床對于乙肝的診斷需要。而本研究在此基礎(chǔ)上更添加了Pre-S2Ag、Pre-S2Ab兩項,更大大提高了實驗診斷的效力,但還是難以確切地反映乙肝患者體內(nèi)HBV的復制水平,尤其對于傳染病醫(yī)院來說。不能夠滿足臨床對于某些乙肝患者的確診,隱匿性乙肝診斷以及不能用來判斷乙肝抗病毒藥物的療效監(jiān)測指標、預(yù)后的評價等需求。另外,對于能否準確判定臨床輸血有無感染、乙肝產(chǎn)婦妊娠方式的選擇、器官移植、醫(yī)務(wù)人員的意外割傷等情況時,HBVm七項結(jié)合HBV DNA定量可滿足以上情況。本研究針對以上情況分析了HBVm七項與HBV DNA 定量之間的關(guān)系及采用PQ-PCR技術(shù)對于臨床應(yīng)用乙肝抗病毒藥物療效監(jiān)測的重要性。

    本研究結(jié)果顯示,以HBVm七項(1,3)陽性的患者6例,HBV DNA陽性6例,檢出率達100%,血清HBV DNA復制水平最高。HBVm七項(1,3,5)、(1,3,7)和(1,3,5,7)陽性的患者,HBV DNA復制水平相當。乙肝患者血清標本中HBeAg陰性組的HBV DNA定量的檢出率顯著低于HBeAg陽性組,顯示HBeAg與HBV DNA的復制相互關(guān)聯(lián)。血清HBeAg是臨床指導抗病毒治療以及觀察療效的常用指標[4],在乙肝抗病毒治療過程中,根據(jù)HBeAg的S/CO(信號/臨界值)的改變進行隨訪監(jiān)測,對于抗病毒療效判斷有重要價值并已常規(guī)應(yīng)用。值得注意的是,本研究仍有27例HBV DNA定量檢測結(jié)果<103拷貝/mL存在于269例HBeAg陽性標本中,其原因是患者經(jīng)乙肝抗病毒治療體內(nèi)HBV DNA復制被抑制或已消失或已進入非活動期,HBV DNA的半衰期短于HBVm蛋白質(zhì)。而在此以前體內(nèi)所產(chǎn)生的HBeAg尚未被完全降解,仍處于較高的滴度,由此形成了所謂的HBV HBeAg與HBV DNA的“時相分離”情況[5]。田珊紅等[6]等研究阿德福韋酯聯(lián)合拉米夫定治療HBV YMDD(酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸)變異的療效顯示,HBV DNA載量隨著治療時間的延長而下降,到治療結(jié)束時有75%的乙肝患者HBV DNA轉(zhuǎn)陰,59.4%的乙肝患者HBeAg轉(zhuǎn)陰。

    本研究在HBVm七項(1,4,5)陽性的131例患者血清中,已檢出HBV DNA者為50例(38.17%),但HBeAb的出現(xiàn)并不能代表乙肝患者體內(nèi)HBV復制停止而無傳染性。實際上,仍有一些乙肝患者存在HBV的高度復制,這種情況的出現(xiàn)可能是由于前C區(qū)基因變異導致HBeAg

    不能形成。故此類乙肝患者仍需要接受抗病毒藥物的治療。臨床上為判斷這些患者應(yīng)用乙肝抗病毒藥物的療效,應(yīng)通過PCR技術(shù)來實現(xiàn)HBV DNA定量的檢測。此外,由于地區(qū)差異或抽樣人群的差異造成這一比率與陳俊等[7]研究結(jié)果有差異。

    本研究在HBVm七項(2,4,5)陽性8例患者的血清中,HBV DNA陽性檢出1例;HBVm七項(5)陽性16例患者的血清中,HBV DNA定量≥103拷貝/mL檢出2例;HBVm七項(4,5)陽性14例患者的血清中,HBV DNA定量≥103拷貝/mL檢出4例,以上幾種情況都屬于隱匿性HBV感染,需要依賴于高靈敏度的HBV DNA定量檢測來診斷。對于肝細胞癌患者、anti-HBc單獨陽性和HCV感染者的人群中均有一定數(shù)量的隱匿性HBV感染。本研究檢測出了2例屬于隱匿性HBV感染的臍帶血中HBVm(3,5)陽性的剛出生嬰兒,未檢出HBV DNA復制,值得進一步跟蹤分析。

    值得關(guān)注的是,由于HBVm蛋白的表達晚于HBV DNA的復制,本研究在6例血清HBVm七項全陰性的患者中,檢出1例HBV DNA復制呈現(xiàn)中度水平的患者,此類患者可能正處于HBV感染的窗口期[8]。另外,由于通過ELISA法檢測HBVm七項的靈敏度明顯低于應(yīng)用PCR技術(shù)對HBV DNA定量的檢測,更進一步證實了HBV DNA的檢出早于HBVm。并且在10例HBVm(2)陽性的患者中,有2例存在HBV DNA的復制,其原因可能是乙肝患者先后感染兩種不同基因型的HBV或HBV出現(xiàn)抗病毒藥物的耐藥而進行變異轉(zhuǎn)換。

    綜上所述,對于臨床乙肝的診斷及輸血,器官移植等情況,不能將HBVm七項的檢測作為傳染性的判斷依據(jù)[9],對于HBV DNA定量的檢測運用PCR方法可比較準確地反映HBV的復制狀況,對臨床乙肝患者的診斷、妊娠婦女是否適合哺乳、幾種抗病毒藥物治療效果的評價、預(yù)后判斷具有顯著價值,而且對于HBVm七項來判斷血液或器官是否具有傳染性方面,具有無可比擬的優(yōu)勢。但是據(jù)美國食品藥品管理局對于血液篩查的核酸檢測試劑需對50拷貝/mL含量的標本檢出率>95%的要求,需要HBV DNA 定量的測定靈敏度大幅提高。

    [1] Clarke B,Bloor S.Molecular genotyping of hepatitis B virus[J].J Clin Virol,2002,25 Suppl 3:S41-S5.

    [2] Maynard JE.Hepatitis B:global importance and need for control[J].Vaccine,1990,8 Suppl:S18-S20.

    [3] 劉潔.HBV肝外感染的臨床研究進展[J].疑難病雜志,2007,6(9):569-571.

    [4] 周麗敏.乙肝病毒標志物2431例檢測模式匯總及分析[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2012,11(1):65,67.

    [5] 施保華.乙肝病毒血清學標志物定量檢測的臨床應(yīng)用價值[J].中國實用醫(yī)藥,2011,6(6):120-121.

    [6] 田珊紅,胡金華,張寶,等.阿德福韋酯聯(lián)合拉米夫定治療HBV YMDD變異慢性乙型肝炎療效分析[J].中國煤炭工業(yè)醫(yī)學雜志,2013,16(1):7-8.

    [7] 陳俊,王曉昌.1006例甘肅省隴東地區(qū)HBV患者血清標志物與HBV DNA的對比分析[J].分子診斷與治療雜志,2011,3(1):36-38.

    [8] Loriot MA,Marcellin P,Bismuth E,etal.Demonstration of hepatitis virus DNA by polymerase chain reaction in the serumliver after xpontaneous or therapeuticauy induced HBeAg to anti-HBe or HBeAg to anti-HBs seroconversin in patients with chronic hepatitis B[J].Hepatology,1992,15(1):32-36.

    [9] 尚建中,秦守杰.HBV感染者血清學標志與HBV DNA含量的關(guān)系[J].中華實用中西醫(yī)雜志,2004,17(16):2423-2425.

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