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    HPLC法測定風(fēng)寒感冒顆粒中5-0-甲基維斯阿米醇苷的含量

    2012-11-01 03:57:18魏桂蓉
    關(guān)鍵詞:維斯阿米風(fēng)寒

    魏桂蓉

    風(fēng)寒感冒顆粒由麻黃、葛根、紫蘇葉、防風(fēng)等十一味藥組成[1],具有解表發(fā)汗,疏散風(fēng)寒等功效。用于風(fēng)寒感冒,發(fā)熱,頭痛,惡寒,無汗,咳嗽,鼻塞,流清涕等。5-0-甲基維斯阿米醇苷是防風(fēng)中有效成分之一,具有祛風(fēng)解表、勝濕止痛,止痙等作用[2]。本品現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中尚無含量測定項目,為有效控制風(fēng)寒感冒顆粒內(nèi)在質(zhì)量,筆者選用5-0-甲基維斯阿米醇苷作為含量測定指標(biāo)并加以控制,建立風(fēng)寒感冒顆粒中5-0-甲基維斯阿米醇苷HPLC含量測定方法,結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確,可靠,重復(fù)性好,可用于本品的質(zhì)量控制。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器 島津LC-20AT系列高效液相色譜儀(日本島津),METTLER XS-105電子天平。

    1.2 試藥 5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,含量測定用,批號111523-201007);風(fēng)寒感冒顆粒(通化長青藥業(yè)股份有限公司提供,規(guī)格:每袋8克,批號107001、102110、090931);甲醇為色譜純,自制純化水,其他試劑均為分析純。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 色譜條件 色譜柱:phenomenex Luna-C18柱(200 mm×4.60 mm,5 μm);流動相:甲醇-水(35 ∶65);流速:1.00 ml/min;檢測波長:254 nm; 柱溫:28℃;進(jìn)樣量:10.00 μl。

    2.2 對照品溶液制備 取5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品7.01 mg,置50 ml棕色量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得儲備液(140.2 μg/ml)。精密量取儲備液5 ml,置50 ml棕色量瓶中加甲醇稀釋至刻度,即得(每1 ml含5-0-甲基維斯阿米醇苷 14.02 μg)。

    2.3 供試品溶液制備 精密稱取本品3.0 g,加甲醇25.00 ml,稱重,超聲1 h,用甲醇補(bǔ)足減失重量,濾過,即得。

    2.4 陰性對照溶液制備 按處方配比(缺防風(fēng)藥材)照工藝制備成模擬顆粒,按“2.3”項下的方法制成陰性對照溶液。

    2.5 干擾試驗 照上述色譜條件,將對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10.00μl,分別注入液相色譜儀,色譜圖見圖1。供試品色譜圖中,在與對照品色譜圖相應(yīng)的保留時間處,有相同的色譜峰,而陰性對照溶液無干擾峰。

    圖1 風(fēng)寒感冒顆粒中5-0甲基維斯阿米醇苷HPLC圖

    2.6 線性關(guān)系考察 將上述5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液(14.02 μg/ml),分別精密進(jìn)樣 2、6、10、14、18、22 μl,按上述色譜條件測定,以平均峰面積為縱坐標(biāo),以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),得方程:Y=2.21×106X-1.09×104,r=0.9997,線性范圍為0.02804 ~0.3084 μg。

    2.7 精密度試驗 取對照品溶液(14.02μg/ml)連續(xù)進(jìn)樣6次,每次10.00 μl,記錄峰面積,RSD為0.82%,表明精密度良好。

    2.8 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液(批號107001),分別于0、4、8、12、16、24 h 進(jìn)樣 10.00μl,測得樣品中 5-0-甲基維斯阿米醇苷峰面積的RSD為1.03%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.9 重復(fù)性試驗 精密取同一批號樣品(批號為107001)6份,按“2.3”項下的方法制備供試品溶液,依法測定,結(jié)果5-0-甲基維斯阿米醇苷含量的RSD為0.95%,表明本法重復(fù)性較好。

    2.10 加樣回收率試驗 量取已知5-0-甲基維斯阿米醇苷含量為0.1259 mg/g的樣品9份(批號為107001),每份1.5 g,3份一組,每組分別按對照品溶液濃度的80%、100%、120%的量加入對照品,按“2.3”項下的方法制備供試品溶液,計算回收率,結(jié)果見表1。

    表1 風(fēng)寒感冒顆粒中5-0-甲基維斯阿米醇苷的回收率試驗結(jié)果(n=9)

    2.11 樣品含量測定 取3批樣品,按“2.3”項下的方法制備供試品溶液,進(jìn)樣10.00 μl,照外標(biāo)法(峰面積)計算5-0-甲基維斯阿米醇苷的含量,結(jié)果:批號107001,含量0.1259 mg/g、批號 102110,含量 0.1282 mg/g、批號 090931,含量0.1107 mg/g。

    3 討論

    3.1 本品為含糖的顆粒劑,曾采用了①正丁醇提取,濾過,濾液蒸干,用甲醇溶解定容;②甲醇提取,蒸干,用水溶解后,再用正丁醇萃?。?]結(jié)果表明兩種方法提取率偏低,回收率偏低,最后用甲醇超聲1 h可以提取完全,回收率好。

    3.2 本文用甲醇提取,雜質(zhì)比較多,曾采用流動相甲醇-0.1%冰醋酸,梯度洗脫[4],基線不平穩(wěn),影響積分準(zhǔn)確性,且用時太長;又考察了甲醇-水(44∶56)[3]、甲醇-水(40∶60)[2],分離效果均不理想。最后用甲醇-水(35∶65)為流動相,分離效果好,且峰型好,理論板數(shù)高。

    3.3 從線性,回收率,重復(fù)性,溶液穩(wěn)定性等實(shí)驗結(jié)果可以看出,用HPLC法測定風(fēng)寒感冒顆粒中5-0-甲基維斯阿米醇苷的含量,準(zhǔn)確性高,重現(xiàn)性好,且操作簡便快速。

    [1] 衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑地一冊,45.

    [2] 中國藥典委員會.中國藥典.2010年版.一部,2010:140.

    [3] 李玲.高效液相色譜法測定感冒清熱顆粒中5-0-甲基維斯阿米醇苷的含量.中國中醫(yī)藥信息雜志,2009,16(4):43-44.

    [4] 江麗,鐘國慶,龔春燕,等.HPLC法測定復(fù)方防風(fēng)膠囊中兩成分的含量.中國藥師,2010,(8):1128-1130.

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