兔愛美耳球蟲病的快速病理診斷

何書海 （信陽農(nóng)業(yè)高等專科學(xué)校動物科學(xué)系 河南 信陽 464000）

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兔愛美耳球蟲病的快速病理診斷

何書海 （信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校動物科學(xué)系 河南 信陽 464000）

愛美耳球蟲在臨床上常常引起雞球蟲病和兔球蟲病，檢查該病時常產(chǎn)采用病理剖檢和實驗室檢查來確診。愛美耳球蟲感染雞時，球蟲常常寄生在腸黏膜上，出現(xiàn)以球蟲腸炎為主的病變特征，其球蟲合子可以隨糞便排出體外，所以通過檢查糞便就可以比較容易的確診該病。而當(dāng)發(fā)生兔球蟲病特別是肝型球蟲時，球蟲主要寄生在肝膽管上，發(fā)生以球蟲肝炎為主要特征的病變，此時就不能單純根據(jù)糞檢發(fā)現(xiàn)卵囊就確診為球蟲病。一方面是因為在急性球蟲病時，如處于裂體增殖期時尚未形成卵囊，有時糞檢不一定發(fā)現(xiàn)卵囊。另一方面是兔的帶蟲現(xiàn)象極為普遍。實踐證明，糞便中的卵囊檢查要和尸檢同時進行，特別是病變部制作切片鏡檢是診斷球蟲病的重要手段。由于傳統(tǒng)石蠟切片檢查相對糞檢來說較費時費力，所以在臨床檢查時很少被運用。本試驗結(jié)合病理剖檢技術(shù)，通過對傳統(tǒng)石蠟切片技術(shù)進行改良和創(chuàng)新，探索出了一種便捷的病理檢查方法，以期為臨床快速確診兔愛美耳球蟲病提供實踐經(jīng)驗。

1 臨床診斷材料與設(shè)備

患病家兔及其肝、腸病變組織。54~58℃石蠟、硬脂酸、無水乙醇、二甲苯、蘇木素染色液、伊紅染色液等，以上所涉及化學(xué)藥品均為分析純。

SK生物組織快速處理儀(上海隆拓儀器設(shè)備有限公司)，KD-3368-VI電腦冷凍石蠟兩用切片機(浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司)，OLYMPUS CHC型光學(xué)顯微鏡(日本OLYMPUS光學(xué)工業(yè)株式會社)，MD90 數(shù)碼成像裝置(廣州明美科技有限公司)。

2 臨床診斷方法

2.1 病理剖檢 對病死家兔進行尸體解剖，檢查內(nèi)臟器官，采取病變器官進行保存?zhèn)錂z。

2.2 快速切片檢查 取肝臟以及小腸組織快速制作石蠟切片，并染色鏡檢。具體方法如下：（1）準(zhǔn)備100ml具塞廣口瓶6個，分別盛入AF固定液、85%酒精、95%酒精、100%酒精、混合石蠟(硬脂酸與54℃石蠟按1:3混合)。（2）取肝臟、小腸病理組織切成1.0cm×1.0cm×0.3cm大小，放入100ml具塞廣口瓶，置于SK生物組織快速處理儀中超聲處理(水溫75℃，超聲頻率1MHz，超聲時間根據(jù)組織大小選擇3~5min)，依次完成固定、脫水、透明、浸蠟。（3）取事先預(yù)制蠟塊(熔點56~58℃)，用彎頭鑷子在中央融化與組織大小相同的坑，放入組織塊，熱蠟固封，冰箱4℃迅速冷卻1min。（4）迅速切片，撈片后，將載玻片反面放在酒精燈上加熱至70℃左右融蠟，濾紙吸蠟后再次加熱入二甲苯1min脫蠟。（5）無水酒精浸洗15s，95%酒精浸洗15s，滴加蘇木素染色液于玻片組織上，并酒精燈加熱至表面有熱氣散發(fā)。(6）水洗2次后75%鹽酸反藍，水洗后入95%乙醇，再進行伊紅染色，水洗后進入80%、95%、100%濃度酒精梯度脫水各1min。（6）二甲苯透明2次，中性樹膠封片、鏡檢。

3 結(jié)果

剖檢可見部分病死兔肝臟明顯腫大，沿小膽管分布上有黃白色小結(jié)節(jié)，有的病灶中的內(nèi)容物變稠，形成粉粒樣的鈣化物，膽囊脹大，膽汁濃稠；腸壁血管充血，腸腔臌氣，十二指腸擴張、肥厚，黏膜有出血性炎癥；部分表現(xiàn)為腸壁有栗粒大小的黃白色結(jié)節(jié)以及小的化膿性、壞死性病灶。

顯微鏡下觀察肝小葉間結(jié)締組織增生，并形成包囊，內(nèi)含大量球蟲蟲卵；肝細(xì)胞脂肪變性、萎縮，肝索明顯變細(xì)，肝血竇顯著變大，肝膽管擴張，膽管上皮細(xì)胞內(nèi)和管腔內(nèi)有許多裂殖體、裂殖子、配子體、孢子囊等不同發(fā)育期的蟲體(圖1)。鏡檢小腸可見腸黏膜上皮細(xì)胞變性、壞死和脫落，黏膜上皮內(nèi)見有裂殖體，腸腔部位可見球蟲卵囊(圖2)。該方法制作的切片HE染色著色好，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核紅藍對比鮮明，細(xì)胞無變形、空泡化等異?，F(xiàn)象。

圖1 肝球蟲H.E400′

圖2 腸球蟲H.E400′

3 討論

兔球蟲病是兔業(yè)養(yǎng)殖中一種常見且危害嚴(yán)重的寄生蟲病，該病是由艾美耳屬的多種球蟲寄生于兔的小腸或膽管上皮細(xì)胞內(nèi)引起的，病兔死亡率很高，該病常造成兔業(yè)養(yǎng)殖的巨大損失。發(fā)生該病時，特別是肝型兔球蟲病時，診斷該病僅靠糞便檢查發(fā)現(xiàn)卵囊來確診是不夠的，所以需要采取病理剖檢并結(jié)合實驗室病理組織切片檢查來確診本病。本試驗通過對傳統(tǒng)石蠟切片技術(shù)進行改良和創(chuàng)新，探索了一種快捷的兔球蟲病的快速病理診斷技術(shù)，并取得了良好的試驗結(jié)果，值得推廣。

本試驗根據(jù)超聲波可以使分子高速振動、運動加快的原理，運用SK生物組織快速處理儀發(fā)射的超聲波對病理組織進行脫水、透明、浸蠟處理，縮短病理組織的處理時間，使整個制作過程簡便而快捷。在一定溫度下，超聲波強大的穿透力作用使病理組織中的液體分子與試劑溶液交換加速，從而加快了固定、脫水、透明和浸蠟的速度。本方法成功實現(xiàn)了病理切片檢查時間的縮短并獲得高質(zhì)量的檢查效果，將傳統(tǒng)石蠟切片制作時間從30h縮短為20~30min，為實現(xiàn)該方法在實驗室檢查中的廣泛推廣奠定了良好的技術(shù)基礎(chǔ)。同時，在實踐該病理切片檢查方法時，體會出了一些關(guān)鍵注意事項，以保證切片效果，現(xiàn)總結(jié)如下：（1）取材時應(yīng)盡量取的薄，便于組織脫水；（2）處理過程中應(yīng)根據(jù)不同組織來選擇時間，注意觀察處理后的組織變化；（3）包埋時，蠟塊中的坑不可事先做好，這樣組織在切片時會出現(xiàn)脫落的現(xiàn)象，同時還要注意將組織包埋得平整；（4）用濾紙吸蠟時，不應(yīng)太用力，已用過的地方，切不可反復(fù)使用，否則很容易脫片；（5）在載玻片反面加熱融蠟和染色時，也可以選用電吹風(fēng)，但都要注意溫度的控制，不宜過高，以免在染色時出現(xiàn)脫片和細(xì)胞過度收縮；（6）操作時，操作人員的熟練程度會直接影響到全程的時間長短。

（2011–10–27）

S858.291

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1007-1733(2012)01-0038-02