雞大腸桿菌的分離鑒定

李本科 （山東省濱州市畜牧獸醫(yī)局 256600）

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雞大腸桿菌的分離鑒定

李本科 （山東省濱州市畜牧獸醫(yī)局 256600）

本研究用菌采自濱州市某雞場疑似大腸桿菌病死雞的心血，肝臟，腎臟。進(jìn)行病原菌的分離，鑒定，生化試驗動物試驗和藥敏試驗，結(jié)果顯示，引起該雞場發(fā)病的病原菌為大腸桿菌，該菌株有較強的致病性，對阿米卡星、鏈霉素、慶大霉素敏感，對環(huán)丙沙星，諾氟沙星，卡那霉素中度敏感，而紅霉素、青霉素、氨芐西林，頭孢唑啉，頭孢噻吩和復(fù)方新諾明對分離菌有耐藥性。表明該雞場出現(xiàn)了耐藥的致病性大腸桿菌，在以后的肉雞生產(chǎn)中應(yīng)慎用抗生素，在使用藥物治療大腸桿菌病時，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，選擇敏感藥物，且應(yīng)注意交替用藥，按療程投藥。

大腸桿菌 分離鑒定 致病性 生化試驗 藥敏實驗

雞大腸桿菌病是由大腸埃希氏菌的某些血清型引起的雞的傳染病。作為各種動物體內(nèi)的常駐菌，大腸桿菌在自然環(huán)境中幾乎無處不在，由其引起的大腸桿菌病流行分布極為廣泛和普遍，給養(yǎng)雞業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。本病一年四季均有發(fā)生，沒有明確的季節(jié)性，尤其冬季和春季多發(fā)，該病癥狀一般均呈典型經(jīng)過。幼雛多發(fā)臍帶炎，突然死亡。大部分雞只體溫升高、精神委頓、羽毛蓬亂、呼吸困難和食欲廢絕。黃、白、綠稀便交替出現(xiàn)。急性型往往發(fā)病后一周內(nèi)即死亡，亞急性或慢性型多發(fā)于成年蛋雞，患病的雞精神不振，食欲減少，飲水量增加，逐漸消瘦和下痢，但死亡率不高。除此之外，常見氣囊炎的發(fā)生，表現(xiàn)程度不一的呼吸道癥狀。有的雞關(guān)節(jié)腫大呈跛行和胸臥姿勢。還有出現(xiàn)眼球炎及母雞卵巢炎、輸卵管炎等。剖檢可見氣囊壁渾濁增厚，肝臟腫大變綠，表面有纖維素樣物質(zhì)覆蓋，腸黏膜出血及產(chǎn)蛋母雞卵巢變性成瘤塊狀[1]。為了控制該大腸桿菌對雞群的危害，筆者對送檢的疑似大腸桿菌病料進(jìn)行了分離鑒定，并通過藥敏實驗確定了敏感性藥物，為有效防治大腸桿菌病提供了依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 病料來源 濱州市某養(yǎng)雞場疑似感染大腸桿菌所致死亡雞4只。

1.2 細(xì)菌分離 無菌采取其肝臟，心血和肺臟的組織，分別劃線接種到馬丁平板，麥康凱平板，37 ℃培養(yǎng)20h。

1.3 細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察 取在麥康凱瓊脂平板上培養(yǎng)20h的新鮮菌落，涂片進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。

1.4 生化試驗 糖發(fā)酵及生化反應(yīng)按常規(guī)進(jìn)行[2]。

1.5 致病力測定 （1）菌液制備：將麥康凱平板上的分離菌落用馬丁肉湯洗下，4℃保存?zhèn)溆?。?）動物試驗：未免疫過的健康雞隨機分為A、B兩組，每組5只。A組為試驗組，B組為對照組。A組頸部皮下接種馬丁肉湯菌液，每只0.5ml；B組頸部皮下接種相同劑量的滅菌馬丁肉湯，隔離飼養(yǎng)。

1.6 藥敏試驗 按K-B紙片擴散法將被檢細(xì)菌涂布接種于普通瓊脂平板上，間隔一定距離貼上各種藥敏試紙，于37℃培養(yǎng)24h，結(jié)果判斷依據(jù)《紙片法抗菌藥物敏感試驗操作標(biāo)準(zhǔn)(第四版)》進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 病雞及病死雞的病理剖檢變化 病雞肝臟腫大、質(zhì)脆，有點狀壞死灶，表面覆蓋有黃白色的纖維素性滲出物；脾臟腫大，肺充血、淤血，腎臟腫大，有尿酸鹽沉積；十二指腸有出血性腸炎變化。

2.2 細(xì)菌培養(yǎng) 在營養(yǎng)瓊脂平板上37 ℃培養(yǎng)18 h后，形成中等大小，圓形微凸起，表面光滑濕潤，淺灰白色半透明菌落。在麥康凱瓊脂平板上，形成中等大小，表面光滑濕潤的粉紅色菌落。

2.3 細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察 挑取病死雞肝、腎在馬丁平板和麥康凱平板上的菌落分別涂片革蘭氏染色鏡檢，均可見兩端鈍圓，多數(shù)散在排列的革蘭氏陰性短桿菌。

2.4 生化試驗結(jié)果 生化試驗結(jié)果顯示，此次分離的大腸桿菌對甘露醇、麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、鼠李糖、蕈糖、果糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，MR、棉子糖、山梨醇、鳥氨酸結(jié)果陽性，VP、衛(wèi)矛醇、肌醇、硝酸鹽、酒石酸鹽、水楊素、精氨酸水解酶、側(cè)金盞酰、阿拉伯醇、血清菊糖、鳥氨酸精氨酸脫羧酶、丙氨酸鹽、ONPG、乙酰胺結(jié)果陰性，符合大腸桿菌的生化特征。

2.5 動物試驗 A組3只36h內(nèi)死亡，2只1周后耐過，剖檢可見肝臟腫大，有出血點和壞死點，腸嚴(yán)重膨氣且內(nèi)容物稀薄，心包淤血，肺出血，脾臟腫大。腎臟腫大，有尿酸鹽沉積；十二指腸有出血性腸炎變化。采取A組死雞的心血、肝和腎臟接種在普通瓊脂平板和麥康凱平板，37℃培養(yǎng)20h，長出與分離的病料相似的菌落。革蘭氏染色及生化鑒定表明此菌與接種細(xì)菌為同種細(xì)菌。表明該菌對雞具有較強的致病力。B組飼養(yǎng)7d后沒有明顯的臨床變化，剖檢未見病變。

2.6 藥敏試驗 結(jié)果見附表。

由附表可見，此次分離的大腸桿菌對阿米卡星、鏈霉素、慶大霉素敏感，對環(huán)丙沙星，諾氟沙星，卡那霉素中度敏感，而紅霉素、青霉素、氨芐西林，頭孢唑啉，頭孢噻吩和復(fù)方新諾明對分離菌產(chǎn)生耐藥性。

附表 藥敏試驗結(jié)果 (mm)

抗菌藥物名稱代號抑菌圈直徑結(jié)果 紅霉素E8R 青霉素P9R 頭孢唑啉CZ10R 環(huán)丙沙星CIP16M 諾氟沙星NOR14M 阿米卡星AN20S 鏈霉素S18S 慶大霉素GM21S 氨芐西林AM8R 頭孢噻吩CF12R 卡那霉素K15M 復(fù)方新諾明SXT10R

注：R代表耐藥，M代表中度敏感，S代表敏感

3 討論

（1）近十幾年，為了控制大腸桿菌及某些細(xì)菌感染，在飼料添加劑及治療中盲目使用一些抗菌藥物，導(dǎo)致耐藥菌株越來越多并日趨嚴(yán)重。而且大腸桿菌可通過菌毛將其抗藥性質(zhì)粒傳遞給其他大腸桿菌，所以大腸桿菌的抗藥性形成較快，環(huán)境中大腸桿菌耐藥性菌株越來越多[3]。藥敏試驗結(jié)果可以看出，曾對大腸桿菌比較敏感的環(huán)丙沙星、諾氟沙星、痢特靈、頭孢唑啉鈉等隨著不斷的應(yīng)用均產(chǎn)生了不同程度的抗藥性。所以，在使用藥物治療大腸桿菌病時，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，選擇敏感藥物，且應(yīng)注意交替用藥，按療程投藥，才能收到較好的治療效果。（2）大腸桿菌是條件性致病菌，大腸桿菌病的發(fā)生和流行與氣候環(huán)境條件及飼養(yǎng)管理水平等許多應(yīng)激因素密切相關(guān)，特別是雞舍的衛(wèi)生狀況很差，糞便污染，潮濕擁擠，空氣不流通，過冷過熱都能明顯地促使本病發(fā)生。有些雞場和雞群由于這些原因而導(dǎo)致的大腸桿菌病發(fā)病率高達(dá)50%以上。因此防制該病的關(guān)鍵在于加強飼養(yǎng)管理，做好各個環(huán)節(jié)的衛(wèi)生消毒，消除各種發(fā)病誘因。日常要提供全價優(yōu)質(zhì)飼料，并足量補充維生素和電解質(zhì)；夏季還要注意防暑，應(yīng)添加飼料添加劑，如碳酸氫鈉、桿菌肽鋅、維生素C等；通過消毒創(chuàng)造一個沒有致病微生物生存和繁殖的良好的養(yǎng)殖環(huán)境。殺滅和抑制已經(jīng)產(chǎn)生的致病微生物，減少其對動物的感染機會。（3）做好免疫工作。由于各地大腸桿菌的血清型存在差異，有效而通用的菌苗尚未出現(xiàn)，因此篩選地區(qū)性免疫原性優(yōu)良的大腸桿菌菌株制作菌苗的疫苗進(jìn)行免疫效果較好。

[1] 陳懷套, 許東仁. 獸醫(yī)病理學(xué)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2005.

[2] 塞弗. 禽病學(xué)(第11版)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2005.

[3] 中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集，某大型雞場的病原性大腸桿菌常見血清型及其穩(wěn)定性[D]. 2002,10.

（2011–09–29）

S852.61+2

A

1007-1733(2012)01-0017-02