鋅離子缺乏對(duì)模型小鼠NPP行為學(xué)改變的實(shí)驗(yàn)研究

趙占志 崔凱 劉麗 許大偉

鋅離子缺乏對(duì)模型小鼠NPP行為學(xué)改變的實(shí)驗(yàn)研究

趙占志 崔凱 劉麗 許大偉

神經(jīng)病理性疼痛(Neuropathic Pain，NPP)是由神經(jīng)系統(tǒng)損傷引起的一種慢性疼痛疾病，主要表現(xiàn)為痛覺過敏、觸誘發(fā)痛(或稱痛覺超敏)、局部感覺缺失以及自發(fā)性疼痛等［1］。本研究利用坐骨神經(jīng)分支選擇損傷模型(spared nerve injury，SNI)觀察飲食鋅缺乏處理對(duì)SNI模型動(dòng)物行為學(xué)變化以及對(duì)脊髓中鋅離子的影響，從而為探討脊髓中的鋅代謝以及鋅在NPP產(chǎn)生與傳導(dǎo)中的作用和機(jī)制研究提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 選取48只SPF級(jí)健康CD-1小鼠。隨機(jī)分為4組:①SHAM:正常喂養(yǎng)2w后接受假手術(shù)。② N-SNI:正常喂養(yǎng)2w后接受SNI手術(shù)。③ L-SNI:低鋅喂養(yǎng)2w后接受SNI手術(shù)。④H-SNI:高鋅喂養(yǎng)2w后接受SNI手術(shù)。其中，低鋅喂養(yǎng)組給予進(jìn)食低鋅飼料 (鋅:0.85 mg/kg，AIN-76A，Research Di-ets);高鋅喂養(yǎng)組給予飲用硫酸鋅水溶液(227 mg/L);其他動(dòng)物給予適鋅飼料(鋅:30.0 mg/kg)。

2 結(jié)果

2.1 機(jī)械性痛閾值檢測(cè)結(jié)果 與基礎(chǔ)值比:假手術(shù)組術(shù)后痛閾無明顯下降;模型組及低鋅模型組術(shù)后痛閾均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與模型組相比，鋅缺乏組痛域降低，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(表1)。

2.2 原子吸收光譜檢測(cè)結(jié)果 通過原子吸收光譜法我們進(jìn)一步檢測(cè)了脊髓后角總鋅量含量的變化。結(jié)果表明，與假手術(shù)組相比，模型組小鼠脊髓后角總鋅含量無明顯變化，而鋅缺乏小鼠總含量明顯減少，詳見表2。

表1 SNI模型小鼠機(jī)械性痛域檢測(cè)(單位:g)

表2 SNI模型小鼠脊髓后角鋅含量的原子吸收光譜檢測(cè)

3 討論

有研究發(fā)現(xiàn)，脊神經(jīng)背根切斷術(shù)后，小鼠痛閾明顯降低，脊髓后角淺層灰質(zhì)尤其是脊髓Ⅰ-Ⅳ區(qū)的鋅離子明顯減少，推斷鋅可能參與了痛覺的傳導(dǎo)［2］。本研究發(fā)現(xiàn)，脊髓背側(cè)角淺層分布著大量的鋅離子;動(dòng)物經(jīng)SNI手術(shù)后，其術(shù)側(cè)脊髓背側(cè)角淺層鋅離子顯著減少，而其機(jī)械性痛閾值也隨之顯著下降;本研究結(jié)果證實(shí)，與模型組相比，鋅缺乏小鼠脊髓后角中的鋅離子減少更為顯著，其機(jī)械性痛閾值降低也更為顯著。我們推測(cè)之所以出現(xiàn)這種結(jié)果可能是由于坐骨神經(jīng)損傷時(shí)，由于感覺神經(jīng)元的周圍突受損，導(dǎo)致其向脊髓背側(cè)角運(yùn)輸?shù)匿\離子減少，增高了甲基.D.天門冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor，NMDA)受體的興奮性并降低了β-氨基丁酸對(duì)疼痛傳遞的抑制作用，因此造成SNI后出現(xiàn)了NPP的一系列痛覺過敏現(xiàn)象，而鋅缺乏處理將進(jìn)一步加重病情。

［1］ 朱麗娜，李玲．微量元素鋅的藥理研究與臨床應(yīng)用進(jìn)展．中國誤診學(xué)雜志，2011，11(9):2031-2032．

［2］ Smith ML，Auer RN，Siesjo BK.The density and distribution of ischemic brain injury in the rat following 2-10 min of forebrain ischemia.Acta Neuropathol，2004，64(4):319-332．

124000 盤錦，遼河油田總醫(yī)院麻醉科

1.2 SNI模型 動(dòng)物麻醉及無菌處理同假手術(shù)組。暴露坐骨神經(jīng)主干至坐骨神經(jīng)分叉，將其三大主要分支中的腓腸神經(jīng)保留，結(jié)扎并切斷腓總神經(jīng)和脛神經(jīng)。結(jié)扎神經(jīng)后仔細(xì)止血，生理鹽水清洗后逐層縫合。

1.3 機(jī)械性痛閾值檢測(cè)及原子吸收光譜檢測(cè) 將小鼠單獨(dú)放置于透明的有機(jī)玻璃圓柱體中，其下為金屬絲網(wǎng)眼。待小鼠適應(yīng)環(huán)境后，以von Frey刺激小鼠術(shù)側(cè)足底，從輕至重，每種型號(hào)刺激針刺激10次，每次間隔5 s。鼠會(huì)出現(xiàn)抬足、縮足、快速甩足以及甩足后舔足等反應(yīng)。當(dāng)VonFrey纖毛針曲成90度時(shí)小鼠仍不抬足，視為無反應(yīng)。以出現(xiàn)5次以上縮足反應(yīng)為陽性，記錄能夠引發(fā)縮足反應(yīng)的最小力度為機(jī)械性痛閾閾值(g)。于術(shù)前2 d測(cè)定后足基礎(chǔ)機(jī)械性痛閾，并分別于術(shù)后第1、3、5、7、9、11、13 d測(cè)痛閾。